FOXQ1和CyclinD1在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義

陳麗麗 曹學(xué)全 盧洪勝 楊朝暉 范廣民 章輝 顧華敏

FOXQ1和CyclinD1在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義

陳麗麗 曹學(xué)全 盧洪勝 楊朝暉 范廣民 章輝 顧華敏

目的 研究叉頭框蛋白Q 1（FOXQ1）和細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組化EnVision法檢測80例胃癌組織和25例癌旁組織中FOXQ1和CyclinD1的表達(dá)情況，分析其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 胃癌組織中FOXQ1和CyclinD1陽性表達(dá)率均高于癌旁組織（均P＜0.05）；在不同腫瘤浸潤深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不同臨床分期者之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），而在不同年齡、性別、腫瘤大小及分化程度者之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。胃癌組織中FOXQ1陽性表達(dá)率與CyclinD1陽性表達(dá)率呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 FOXQ1和CyclinD1高表達(dá)在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起作用，聯(lián)合檢測FOXQ1和CyclinD1可用于判斷胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移潛能及患者的預(yù)后。

胃癌 FOXQ1 CyclinD1 免疫組織化學(xué)

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生、發(fā)展與多基因突變及多類型傳導(dǎo)途徑異常有關(guān)。叉頭框蛋白Q1（forkhead box Q1，F(xiàn)OXQ1）是一個具有高度保守的叉頭框（FOX）結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子，在腫瘤的侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過程中起重要作用[1]。細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）是腫瘤細(xì)胞增殖周期G1/S期限制點(diǎn)的調(diào)控因子，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[2]。本研究采用免疫組化EnVision法檢測FOXQ1和CyclinD1在胃癌和胃癌旁組織中的表達(dá)情況，結(jié)合隨訪資料，分析其與臨床病理因素的關(guān)系及兩者表達(dá)的相關(guān)性，進(jìn)一步探討它們在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的可能作用機(jī)制。

1 對象和方法

1.1 對象 收集臺州市中心醫(yī)院2010年11月至2014年11月行根治手術(shù)的80例胃癌患者的切除標(biāo)本?；颊吣?3例，女37例，年齡35～85歲，中位年齡65歲；患者術(shù)前均未接受化療和放療，術(shù)后均經(jīng)病理檢查確診。檢測所取腫瘤組織均為腫瘤中心非壞死部分，同時取25例距離腫瘤組織邊緣＞5cm癌旁組織作為對照。所有組織標(biāo)本取出后均迅速用10%的中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、二甲苯透明、浸蠟、石蠟包埋保存。參照2010年WHO組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)分級分為高分化（管狀腺癌Ⅰ級）11例，中分化（管狀腺癌Ⅱ級）40例，低分化(管狀腺癌Ⅲ級) 29例。參照2010年UICC修訂的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)判定為Ⅰ期14例，Ⅱ期19例，Ⅲ期22例，Ⅳ期25例。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 鼠抗人單克隆FOXQ1抗體購自Abcan公司，兔抗人單克隆CyclinD1抗體購自上海基因科技有限公司，En VisionTM試劑盒和DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化檢測 采用En Vision二步法檢測FOXQ1和CyclinD1的表達(dá)。石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水，切片浸于3%H2O2溶液中3min，檸檬酸高壓抗原修復(fù)10min，一抗4℃孵育過夜，通用型二抗-HRP聚合物，37℃孵育30min，滴加DAB顯示，顯微鏡下觀察顯色情況，蘇木素復(fù)染，0.1%鹽酸乙醇分化，PBS沖洗返藍(lán)，乙醇脫水、透明、中性樹膠封固。用已知陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果評定 免疫組化陽性信號為淺黃色至棕黃色顆粒。根據(jù)染色細(xì)胞百分率和染色程度對免疫組化檢測結(jié)果進(jìn)行評定和分析：每例觀察5個以上高倍視野（× 400），計(jì)數(shù)不少于1 000個細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞率，F(xiàn)OXQ1和CyclinD1表達(dá)陽性標(biāo)準(zhǔn)參考Liang等[3]的判定標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞率≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；染色強(qiáng)度淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將陽性細(xì)胞率得分和染色強(qiáng)度得分相乘即為最后得分，0～3分定義為陰性，4～12分定義為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，F(xiàn)OXQ1和CyclinD1表達(dá)的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)。

2 結(jié)果

2.1 FOXQ1與CyclinD1在胃癌和癌旁組織中的表達(dá) FOXQ1的陽性表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)，部分細(xì)胞核亦有表達(dá)（圖1）；CyclinD1的陽性表達(dá)在細(xì)胞核（圖2）。兩者在胃癌組織中的陽性表達(dá)率均明顯高于癌旁組織（均P＜0.05），見表1。

圖1 胃癌組織中FOXQ1的陽性表達(dá)（En Vision二步法，× 400）

圖2 胃癌組織中CyclinD1的陽性表達(dá)（En Vision二步法，× 400）

表1 FOXQ1與CyclinD1在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)

2.2 FOXQ1、CyclinD1表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 胃癌組織中FOXQ1與CyclinD1陽性表達(dá)率在不同TNM分期、浸潤深度及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者之間，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），而在不同年齡、性別、腫瘤大小及分化程度者之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），詳見表2。

表2 FOXQ1﹑CyclinD1表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系[例（%）]

2.3 胃癌組織中 FOXQ1與 CyclinD1表達(dá)的相關(guān)性 80例胃癌組織中FOXQ1與CyclinD1表達(dá)均陽性者41例，均陰性者26例，胃癌組織中FOXQ1與CyclinD1表達(dá)呈正相關(guān)，詳見表3。

表3 FOXQ1與CyclinD1在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性（例）

3 討論

Fox家族是一類龐大而功能廣泛的轉(zhuǎn)錄因子，參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞周期調(diào)控、糖類和脂類代謝、生物衰老、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)過程，其突變和表達(dá)異常與發(fā)育畸形、代謝性疾病有關(guān)。FOXQ1基因?qū)儆贔OX家族成員之一，在胃癌、乳腺癌、大腸癌、肺癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的作用國內(nèi)外均有研究。Lin等[5]報(bào)道，在胃黏膜相關(guān)淋巴組織（MALT）淋巴瘤中高表達(dá)Shigekawa等[6]研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXQ1與乳腺癌的進(jìn)展密切相關(guān)。國內(nèi)學(xué)者研究顯示FOXQ1在大腸癌組織中表達(dá)水平較高，尤其是高惡性程度的和晚期大腸癌，而在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的晚期大腸癌組織中表達(dá)水平也明顯增高[7]。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)OXQ1在胃癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示FOXQ1高表達(dá)在胃癌的發(fā)生過程中起了作用。在不同TNM分期、浸潤深度及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者之間，胃癌組織中FOXQ1陽性表達(dá)率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。表明FOXQ1表達(dá)與胃癌的浸潤深度、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)。這一結(jié)果與Liang等[3]對胃癌的研究結(jié)果一致。

CyclinD1作為細(xì)胞周期調(diào)控中一種較為重要的因子在細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)中起了重要作用。它定位于染色體11q13上，含295個氨基酸，在細(xì)胞周期關(guān)鍵限速點(diǎn)轉(zhuǎn)換期中，通過對相應(yīng)轉(zhuǎn)換分子進(jìn)行激活轉(zhuǎn)換，促使細(xì)胞DNA合成，從而發(fā)揮出加速細(xì)胞增殖的正性調(diào)節(jié)作用，是細(xì)胞增殖G1/S期的重要控件。Lan等[8]研究表明CyclinD1在胃癌組織中的陽性表達(dá)率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于癌旁組織，與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。林孟波等[9]也報(bào)道CyclinD1在胃癌組織的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，在TNM分期為晚期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌中的表達(dá)率明顯高于TNM分期為中早期和淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者。本研究結(jié)果顯示，CyclinD1在胃癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于胃癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在不同TNM分期、浸潤深度及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者之間CyclinD1陽性表達(dá)率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。提示CyclinD1高表達(dá)與胃癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)，與上述研究結(jié)果相一致。

本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中FOXQ1表達(dá)與CyclinD1表達(dá)呈正相關(guān)，其表達(dá)水平與胃癌的浸潤、轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)。表明FOXQ1可能通過調(diào)控CyclinD1，參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起作用。FOXQ1與CyclinD1表達(dá)的聯(lián)合檢測可以應(yīng)用于臨床判斷胃癌的轉(zhuǎn)移潛能及患者的預(yù)后。

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Expression of FOXQ1 and CyclinD1 in gastric carcinoma and its clinical significance

CHEN Lili,CAO Xuequan,LU Hongsheng,etal.Department of Pathology,Taizhou Central Hospital,Taizhou 318000, China

【 Abstract】 Objective To investigate the expression and clinical significance of FOXQ1 and CyclinD1 in gastric carcinoma. Methods The expression of FOXQ1 and CyclinD1 in 80 samples of gastric carcinoma and 25 samples of pericancerous tissue was detected by immunohitochemical EnVision method，and its relationship with clinical pathological features was analyzed. Results The positive expression rates of FOXQ1 and CyclinD1 in gastric carcinoma tissues were significantly higher than those in corresponding percicancerous gastric mucosa(both P＜0.05).The positive expression rates of FOXQ1 and CyclinD1 were correlated with the depth of tumor invasion,lymph node metastasis and clinical stage(both P＜0.05), but not correlated with age,sex,tumor size or degree of differentiation(P＞0.05).The expression of FOXQ1 in gastric carcinoma was positively correlated with the expression of CyclinD1(P＜0.05). Conclusion The high expression of FOXQ1 and CyclinD1 may be involved in the occurrence and development of gastric cancer,the combined detection of FOXQ1 and CyclinD1 can be used to determine the invasive and metastatic potential of gastric carcinoma and the prognosis of the patients.

Gastric carcinoma FOXQ1 CyclinD1 Immunohistochemistry

2016-01-19）

（本文編輯：沈叔洪）

318000 臺州市中心醫(yī)院病理科