HLA-B27/B7檢測(cè)在強(qiáng)直性脊柱炎診斷中的價(jià)值分析

馬小龍 劉春燕

臨床研究

HLA-B27/B7檢測(cè)在強(qiáng)直性脊柱炎診斷中的價(jià)值分析

馬小龍 劉春燕

目的 探討人類白細(xì)胞抗原（HLA）-B27+/B7-百分比及平均熒光強(qiáng)度（MnX）檢測(cè)對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎（AS）患者的診斷和臨床分級(jí)價(jià)值。方法 選擇2014年1月至2015年4月普洱市人民醫(yī)院收治的確診AS患者38例為AS組，其他原因引起的腰腿痛患者40例為非AS組，同期本院體檢健康志愿者30例為健康對(duì)照組。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)3組HLA-B27+/B7-百分比及平均MnX，并結(jié)合影像學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行臨床分級(jí)評(píng)估。結(jié)果 AS組HLA-B27+/B7-百分比〔（92.21±3.30）%比（46.04±2.11）%、（29.57±1.25）%〕和平均MnX（13.7±0.5比1.5±0.1、2.1±0.1）均明顯高于非AS組及健康對(duì)照組（P均＜ 0.05），AS組HLA-B27陽(yáng)性率顯著高于非AS組及健康對(duì)照組〔92.1%（35/38）比12.5%（5/40）、3.3%（1/30），P均＜ 0.05〕；X線Ⅰ～Ⅳ級(jí)HLA-B27百分比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔分別為（92.03±3.05）%、（91.44±2.85）%、（93.65±3.10）%、（90.65±2.77）%，P均＞ 0.05〕，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ級(jí)之間平均MnX比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為5.3±0.2、7.6±0.3、19.0±1.2、24.6±1.9，P均＜ 0.05）。結(jié)論 HLA-B27百分比及平均MnX對(duì)AS的診斷、臨床分級(jí)和早期預(yù)測(cè)有一定的價(jià)值。

強(qiáng)直性脊柱炎；人類白細(xì)胞抗原B27；熒光強(qiáng)度

強(qiáng)直性脊柱炎（AS）是一種自身免疫性疾病，具有慢性、進(jìn)行性、炎癥性等特點(diǎn)，是關(guān)節(jié)病中最常見的疾病之一，呈世界范圍分布，不同種族及國(guó)家的發(fā)病率亦不同，我國(guó)AS的發(fā)病率約為0.3%，全世界的總發(fā)病率為0.9%［1］。AS伴常染色體隱性遺傳，有明顯的家族聚集發(fā)病趨勢(shì)［2］，以青年男性發(fā)病率較高，病變常累及骶髂關(guān)節(jié)和中軸關(guān)節(jié)，易發(fā)生全脊柱強(qiáng)直，致殘率極高。AS的診斷主要依據(jù)臨床癥狀、體征和X線檢查，但臨床表現(xiàn)與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎等極度相似，X線的改變僅在病情發(fā)展到一定程度時(shí)才能被觀察到，特別是早期改變（Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)）很難被臨床醫(yī)師發(fā)現(xiàn)。早在1973年，國(guó)外研究已發(fā)現(xiàn)人類白細(xì)胞抗原B27（HLA-B27）的表達(dá)與AS高度相關(guān)［3］。 本研究旨在探討外周血淋巴細(xì)胞HLA-B27/B7百分比和熒光強(qiáng)度（MnX）以及影像學(xué)檢查在AS患者臨床診斷與臨床分級(jí)等方面的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年1月至2015年4月入住普洱市人民醫(yī)院被確診為AS的患者38例為AS組，診斷符合1984年修訂紐約標(biāo)準(zhǔn)；X線表現(xiàn)分級(jí)符合修訂紐約標(biāo)準(zhǔn)；其中男性25例，女性13例；平均年齡（28.9±12.1）歲。同期選擇其他原因如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎引起的腰腿痛患者40例為非 AS組，其中男性26例，女性14例；平均年齡（40.5±10.6）歲。以同期30例體檢健康志愿者作為健康對(duì)照組，其中男性20例，女性10例；平均年齡（31.4±13.1）歲。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.2.1 外周血細(xì)胞HLA-B27/B7檢測(cè) 取各組受試者清晨空腹靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝，加入混勻全血50 μL，同型對(duì)照組加入異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記IgG2a和藻紅蛋白（PE）標(biāo)記IgG1抗體10 μL，測(cè)定管加入HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE抗體10 μL。避光孵育30 min后分別加入Optilyse C裂解液（美國(guó)Beckman Coulter公司）混勻30 min，離心5 min，加入500 μL磷酸鹽緩沖液（PBS）混勻，再次離心，加入500 μL PBS混勻上機(jī)檢測(cè)。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)HLA-B27/B7百分比及MnX。取健康志愿者HLA-B27陽(yáng)性率及平均MnX為參考范圍，以HLA-B27陽(yáng)性率＞ 60%、平均MnX ＞ 5記為AS陽(yáng)性診斷［4］。

1.2.2 影像學(xué)檢查 所有AS患者接受X線檢查，由2名以上有經(jīng)驗(yàn)的放射科醫(yī)師確定其骶髂關(guān)節(jié)炎分級(jí)，依據(jù)骶髂關(guān)節(jié)的X線表現(xiàn)，按照修訂紐約標(biāo)準(zhǔn)分為0～Ⅳ5級(jí)：0級(jí)為正常；Ⅰ級(jí)為可疑異常；Ⅱ級(jí)為輕度異常，可見局限性侵蝕、硬化，但關(guān)節(jié)間隙正常；Ⅲ級(jí)為明顯異常，呈中度或進(jìn)展性骶髂關(guān)節(jié)炎，伴有侵蝕、硬化、關(guān)節(jié)間隙增寬、狹窄或部分強(qiáng)直一項(xiàng)或一項(xiàng)以上改變；Ⅳ級(jí)為嚴(yán)重異常，完全性關(guān)節(jié)強(qiáng)直。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組HLA-B27+/B7-的百分比及平均MnX比較 AS組HLA-B27+/B7-百分比及平均MnX均顯著高于非AS組及健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜ 0.05）。見表1。

2.2 各組HLA-B27陽(yáng)性率比較 AS組HLA-B27陽(yáng)性率顯著高于非AS組及健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜ 0.05）。見表1。

表1 各組HLA-B27/B7百分比、平均MnX及HLA-B27陽(yáng)性率比較

2.3 X線檢查不同分級(jí)AS患者HLA-B27百分比及平均MnX比較 X線檢查不同分級(jí)AS患者HLA-B27百分比及平均MnX比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞ 0.05），Ⅲ、Ⅳ級(jí)平均MnX較Ⅰ、Ⅱ級(jí)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜ 0.05）。見表2。

表2 X線檢查顯示不同分級(jí)AS患者HLA-B27百分比及平均MnX比較

3 討論

HLA-B27屬于Ⅰ型主要組織相容性復(fù)合體（MHC）基因，位于第6號(hào)染色體的短臂上，DNA片段長(zhǎng)約3 600 kb，在機(jī)體中所有有核細(xì)胞上均有表達(dá)，在淋巴細(xì)胞表面含量豐富。早在1973年，人們就已發(fā)現(xiàn)HLA-B27抗原的表達(dá)與AS呈高度相關(guān)，超過90%的AS患者HLA-B27抗原表達(dá)為陽(yáng)性，普通人群的陽(yáng)性率僅為5%～10%［5］，由于AS癥狀與許多疾病相似而難以確診，因此檢測(cè)HLA-B27對(duì)AS診斷有重要意義。HLA-B27抗原的表達(dá)除與AS有關(guān)外，還與反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎有一定相關(guān)性［6］。

AS為血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病，病變幾乎全部累及骶髂關(guān)節(jié)，多沿脊柱向上蔓延，椎間盤及附近韌帶常發(fā)生鈣化和骨性強(qiáng)直［7］。到目前為止，研究發(fā)現(xiàn)感染、遺傳和免疫等因素與AS 的發(fā)生關(guān)系密切，但其確切的發(fā)病機(jī)制仍尚未明確。齊亞軍等［8］通過分析近年來(lái)有關(guān)AS發(fā)病機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)，氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡在AS的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。長(zhǎng)期以來(lái)，研究者針對(duì)AS的治療進(jìn)行了大量的臨床研究，并在緩解臨床癥狀、減少不良反應(yīng)等方面取得明顯療效［9］；但AS患者病情不能逆轉(zhuǎn)，對(duì)患者的生存質(zhì)量有重要影響，因此早期診斷和治療非常必要。雖然目前有關(guān)HLA-B27與AS之間的關(guān)聯(lián)尚未明確，但其與AS的高度相關(guān)性已得到公認(rèn)。如AS已出現(xiàn)X線所見的特征性脊柱改變和骶髂關(guān)節(jié)炎癥變化時(shí)，已經(jīng)錯(cuò)過了最佳治療時(shí)機(jī)，致殘率極高，但其發(fā)病隱匿，臨床癥狀和X線表現(xiàn)與多種疾病類似，容易誤診，因此早期檢測(cè)HLA-B27對(duì)診斷AS有重要意義。

劉湘等［10］采用病例對(duì)照研究方案，使用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物（polymerase chain Reaction-squence specific primer，PCR-SSP）高分辨技術(shù)檢測(cè)HLA-B27亞型，分析HLA-B27基因亞型與AS的相關(guān)性，探討HLA-B27基因亞型檢測(cè)的臨床意義，結(jié)果顯示，PCR-SSP法能檢測(cè)出29個(gè)HLA-B27亞型（B*2701～B*2730，其中B*2722除外），B*2702～B*2704、B*2706、B*2713亞型可能與AS的發(fā)病有關(guān)。裴兵［11］的研究選擇了187份AS患者標(biāo)本，分別進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)HLA-B27抗原檢測(cè)和PCR-SSP基因型檢測(cè)，結(jié)果顯示，兩種檢測(cè)技術(shù)均能有效檢測(cè)到標(biāo)本中的HLA-B27，且流式細(xì)胞儀檢測(cè)HLA-B27的敏感度為100%，特異度為96.7%，準(zhǔn)確度為98.7%，適合于AS患者臨床大規(guī)模樣本量的篩查。本研究結(jié)果也表明，AS患者HLA-B27抗原陽(yáng)性率及平均MnX明顯高于健康對(duì)照組，且雖然Ⅲ級(jí)以上伴HLA-B27陽(yáng)性患者與Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)患者抗原陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但Ⅲ級(jí)以上患者平均MnX明顯高于Ⅰ、Ⅱ級(jí)。值得提出的是，本研究38例AS患者中有3例HLA-B27陰性，40例非AS組中有5例HLA-B27陽(yáng)性，而30例健康志愿者有1例HLA-B27陽(yáng)性。流式細(xì)胞術(shù)所用的單克隆抗體在檢測(cè)HLA-B27時(shí)會(huì)與多種其他HLA抗原，特別是HLA-B7發(fā)生交叉反應(yīng)，對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響。35例HLA-B27陽(yáng)性患者中有4例檢測(cè)結(jié)果為HLA-B27+/B7+，調(diào)查這4例雙陽(yáng)性病例發(fā)現(xiàn)，有3例為確診AS后經(jīng)抗腫瘤壞死因子抗體、免疫抑制等藥物治療的患者，1例系類風(fēng)濕關(guān)節(jié)免疫抑制治療后HLA-B27+/B7+表達(dá)。所以藥物干擾HLA-B27的表達(dá)存在一定的假說(shuō)，需要更多研究進(jìn)一步證實(shí)。

盡管HLA-B27陽(yáng)性暫不能列入世界衛(wèi)生組織（WHO）診斷AS的標(biāo)準(zhǔn)， HLA-B27陽(yáng)性不能代替X線證據(jù)，但其在AS診斷、治療、預(yù)后方面的重要性已被臨床醫(yī)師認(rèn)可。值得一提的是，首先，AS出現(xiàn)骶髂關(guān)節(jié)影像方面的改變，韌帶骨化至少需要發(fā)病后3年［12］，早期診斷、治療尤為重要。其次，HLA-B27檢測(cè)能更大程度避免X線對(duì)患者的傷害，減輕其經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。所以，臨床醫(yī)師對(duì)HLA-B27陽(yáng)性應(yīng)給予重視，特別是平均MnX對(duì)臨床分級(jí)和病情嚴(yán)重程度、治療效果的重要性尚需要更多的研究加以證實(shí)。

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11 裴兵.探討流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HLA-B27在強(qiáng)直性脊柱炎中的臨床應(yīng)用價(jià)值.實(shí)用檢驗(yàn)醫(yī)師雜志，2012，4：31-34.

12 肖征宇，曾慶馀.對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎和脊柱關(guān)節(jié)炎的認(rèn)識(shí).中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2013，17：289-292.

（本文編輯：邸美仙）

Clinical value of HLA-B27/B7 detection for diagnosis for ankylosing spondylitis

MA Xiao-long, LIU Chun-yan. Department of Laboratory Medicine, Puer People's Hospital in Yunnan Province, Puer 665000, China

Objective To evaluate the humam leukocyte antigen (HLA)-B27+/B7-percent and mean fluorescence (MnX) for diagnosis and clinical classification in ankylosing spondylitis (AS). Methods Thirty-eight patients with AS (AS group) and 40 patients with back leg pain without AS (non-AS group), and 30 healthy controls (health control group) admitted to Puer People's Hospital in Yunnan Province from January 2014 to April 2015 were enrolled. HLA-B27+/B7-percent and MnX were determined by flow cytometry (FCM), which were combined with iconography for clinical classification in AS. Results HLA-B27+/B7-percent [(92.21±3.30)% vs. (46.02±2.11)%, (29.57±1.25)%] and MnX (13.7±0.5 vs. 1.5±0.1, 2.1±0.1) in AS group were significantly higher than those in non-AS group and health control group (P all ＜ 0.05), and HLA-B27 positive percent in AS group was significantly higher than that of non-AS group and health control group [92.1% (35/38) vs. 12.5% (5/40), 3.3% (1/30), P all ＜ 0.05]. There was no significant difference in HLA-B27 positive percent among grade Ⅰ to Ⅳof X-ray [(92.03±3.05)%, (91.44±2.85)%, (93.65±3.10)%, (90.65±2.77)%, respectively, P all ＞ 0.05], and there were significant difference in MnX among grade Ⅰ,Ⅱ,Ⅲand Ⅳ (5.3±0.2, 7.6±0.3, 19.0±1.2, 24.6±1.9, respectively, P all ＜ 0.05). Conclusion The determination of HLA-B27 percent and MnX could be an effective method for diagnosis, clinical classification and early finding of AS.

Ankylosing spondylitis; Humam leukocyte antigen B27; Fluorescence

665000 普洱市，云南省普洱市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

馬小龍，Email：13141596@qq.com

10.3969/j.issn.1674-7151.2016.03.011

2016-07-26）