我國(guó)豬源牛病毒性腹瀉病毒的感染現(xiàn)狀及檢測(cè)技術(shù)

祖立闖，李嬌，謝金文，李峰，沈志強(qiáng)，

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東濱州256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州256600）

我國(guó)豬源牛病毒性腹瀉病毒的感染現(xiàn)狀及檢測(cè)技術(shù)

祖立闖1，李嬌1，謝金文2，李峰2，沈志強(qiáng)1，2

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東濱州256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州256600）

牛病毒性腹瀉病毒的宿主范圍廣泛，除感染牛外，還可以感染豬、羊、鹿及其它野生動(dòng)物。豬感染BVDV后會(huì)出現(xiàn)類似慢性豬瘟的臨床癥狀和病理變化，同時(shí)由于BVDV與豬瘟病毒的交叉反應(yīng)性，BVDV還可降低豬瘟疫苗的免疫效果，豬群中BVDV的感染不但增加了BVD的防控難度，還使豬瘟的防控難上加難。筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料并結(jié)合自身多年臨床工作經(jīng)驗(yàn)，將我國(guó)豬源BVDV的發(fā)病概況以及常用檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了全面的總結(jié)與概述，以期為我國(guó)豬源BVDV綜合防控措施的制定提供參考依據(jù)。

豬；牛病毒性腹瀉病毒；感染現(xiàn)狀；檢測(cè)技術(shù)

牛病毒性腹瀉（Bovine viral diarrhea,BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）引起的多種動(dòng)物易感的傳染病[1]。BVDV與豬瘟病毒、羊邊界病病毒同屬于黃病毒科（Flaviridae）瘟病毒屬（Pestivirus），三者具有免疫學(xué)交叉反應(yīng)[2]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將BVD列入必須報(bào)告的動(dòng)物疾病名錄，但僅將其作為牛報(bào)告疾病名錄，這樣可能使人們忽略BVDV還可引起豬、羊、鹿以及其它野生動(dòng)物等感染發(fā)病[3]。豬感染BVDV后表現(xiàn)出類似慢性豬瘟的臨床癥狀和病理變化，增加了臨床中豬瘟鑒別診斷的難度，且豬感染BVDV后產(chǎn)生的抗BVDV抗體對(duì)豬瘟病毒具有一定的抑制作用，對(duì)豬瘟疫苗的免疫產(chǎn)生干擾作用，降低豬瘟疫苗的免疫效果[4]，故豬群中BVDV的感染不但增加BVD的防控難度，還使豬瘟的防控難上加難。鑒于此，筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料并結(jié)合自身多年臨床工作經(jīng)驗(yàn)，將我國(guó)豬源BVDV的流行與發(fā)生情況以及常用檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行全面的總結(jié)與概述，以期為我國(guó)豬源BVDV綜合防控措施的制定提供參考。

1 病原特征

BVDV為單股、正鏈RNA病毒，在分類學(xué)上屬于黃病毒科瘟病毒屬，BVDV成熟的病毒粒子為球形或圓形顆粒，有囊膜，大小為40～60 nm。病毒基因組全長(zhǎng)約12.5 kb，包含單一開(kāi)放閱讀框（ORF），ORF兩側(cè)分別為5'-UTR和3'-UTR。根據(jù)5'-UTR序列，BVDV可分為BVDV-1和BVDV-2兩個(gè)基因型[5]。

2 我國(guó)BVDV發(fā)病情況

如表1所示，自從王新平等[6]于1995年在吉林成功分離鑒定出第一株豬源BVDV后，我國(guó)研究學(xué)者先后在廣西、山東、福建、青海等地感染的病例中陸續(xù)檢測(cè)出BVDV陽(yáng)性核酸或分離鑒定出病毒，目前豬源BVDV已在我國(guó)養(yǎng)豬密集地區(qū)呈地方性發(fā)生與流行。

表1 我國(guó)部分地區(qū)BVDV發(fā)病情況

3 我國(guó)BVDV流行病學(xué)調(diào)查情況

如表2所示，自2004年至2014年豬源BVDV在我國(guó)不同地區(qū)豬群中的感染率在0～80.48%之間，表明豬源BVDV已在我國(guó)豬群中呈散發(fā)性、地方性流行，個(gè)別地區(qū)的陽(yáng)性感染率較高，豬源BVDV在我國(guó)豬群中的流行現(xiàn)狀不容忽視，應(yīng)加強(qiáng)重視。

表2 我國(guó)部分地區(qū)BVDV流行病學(xué)調(diào)查概況

4 檢測(cè)技術(shù)

豬感染BVDV后，表現(xiàn)出類似豬瘟的臨床癥狀和病理變化，且臨床中BVDV常與豬瘟病毒混合感染，僅憑臨床特征很難實(shí)現(xiàn)豬源BVDV與豬瘟病毒的鑒別診斷，故對(duì)于豬源BVDV的確診需借助實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)。隨著現(xiàn)代免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展與推廣應(yīng)用，豬源BVDV的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)得到了快速發(fā)展和完善，目前常用的豬源BVDV診斷技術(shù)主要有病毒分離鑒定、RT-PCR、熒光定量RT-PCR、ELISA等。

4.1 病毒分離鑒定

該方法是將疑似BVDV感染的臨床病料接種BVDV易感細(xì)胞，再通過(guò)細(xì)胞病變觀察、生物學(xué)特性鑒定、電鏡觀察、中和試驗(yàn)、RT-PCR檢測(cè)、序列分析等方法對(duì)分離毒株進(jìn)行鑒定。楊小燕等[9]采集福建省疑似豬瘟病毒感染的仔豬病料，將其接種MDBK細(xì)胞72 h后可產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變，該分離毒株可被BVDV陽(yáng)性血清中和，對(duì)氯仿、乙醚、胰酶、酸敏感，不耐熱，RT-PCR可檢測(cè)出325 bp BVDV片段，該片段的核苷酸序列與BVDV NADL株標(biāo)準(zhǔn)種毒的同源性為89.02%，表明分離毒株為豬源BVDV。鄧宇等[8]將BVDV陽(yáng)性仔豬病料樣品接種MDBK細(xì)胞，該毒株在MDBK細(xì)胞上盲傳至13代未出現(xiàn)細(xì)胞病變，在直接免疫熒光試驗(yàn)中與BVDV陽(yáng)性血清呈陽(yáng)性反應(yīng)，電鏡觀察顯示病毒粒子略呈圓形、有囊膜、直徑約50 nm，5'-UTR序列進(jìn)化分析顯示病毒屬于BVDV-1型，表明成功分離鑒定1株豬源非致病變型BVDV-1。病毒分離鑒定方法一直是BVDV診斷方法的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但該方法中涉及到細(xì)胞培養(yǎng)、電鏡觀察、RT-PCR等方法，試驗(yàn)周期較長(zhǎng)，操作較復(fù)雜，往往受到試驗(yàn)條件和專業(yè)技術(shù)人員水平等限制。

4.2 RT-PCR方法

RT-PCR方法檢測(cè)快速、操作簡(jiǎn)單、敏感性和特異性較高，是最常用的動(dòng)物疫病快速確診技術(shù)，目前在BVDV的快速診斷中得到了推廣應(yīng)用。朱紫祥等[19]建立的豬源BVDV PCR診斷方法檢測(cè)豬源BVDV、豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、PK15細(xì)胞，只有豬源BVDV為陽(yáng)性，其余均為陰性，具有較高的特異性。鄧宇等[20]建立的豬源BVDV套式PCR檢測(cè)方法能從BVDV標(biāo)準(zhǔn)毒株、豬源BVDV毒株中擴(kuò)增198 bp的特異性片段，擴(kuò)增豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒均為陰性，敏感性可檢測(cè)到0.195 fg RNA模板量，具有敏感、特異和穩(wěn)定等特點(diǎn)，可用于豬源BVDV的臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查。RT-PCR方法特異、靈敏、快速，適合于一般實(shí)驗(yàn)室使用。

4.3 熒光定量RT-PCR方法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR是在常規(guī)PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種核酸定量檢測(cè)技術(shù)，與常規(guī)PCR方法相比具有能夠準(zhǔn)確定量、敏感性更強(qiáng)、不需要核酸電泳等優(yōu)點(diǎn)。鄧宇等[21]建立的豬源BVDV實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法檢測(cè)豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒均為陰性，最低可檢測(cè)到每個(gè)反應(yīng)相當(dāng)于10拷貝的標(biāo)準(zhǔn)品DNA，重復(fù)性試驗(yàn)的批內(nèi)變異系數(shù)為0.20%～0.95%，與常規(guī)RT-PCR方法的符合率為86.7%，具有特異、敏感、快速、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于豬感染BVDV的監(jiān)測(cè)。熒光定量RT-PCR方法能夠?qū)悠分械牟《竞怂徇M(jìn)行定量檢測(cè)，但該方法對(duì)儀器設(shè)備、試驗(yàn)試劑、操作人員技術(shù)水平等要求均較高，一般實(shí)驗(yàn)室由于受試驗(yàn)條件限制較難開(kāi)展。

4.4 ELISA方法

ELISA方法具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、高通量、價(jià)格低廉、敏感性和特異性高等優(yōu)點(diǎn)，成為當(dāng)前動(dòng)物疫病診斷中最常用的血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)。曾亮明等[18]建立的豬源BVDV ELISA抗體檢測(cè)方法中最佳包被質(zhì)量濃度為31.25 μg/L，最佳封閉液為10%馬血清，待檢血清的最佳稀釋度為1∶50，該方法檢測(cè)豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬繁殖與呼吸綜合征病毒陽(yáng)性血清均為陰性，與中和試驗(yàn)方法的符合率為97.9%，該方法特異性強(qiáng)、符合率高、重復(fù)性好，適合用于豬源BVDV的血清學(xué)抗體監(jiān)測(cè)。ELISA方法簡(jiǎn)單、快速、特異、敏感、經(jīng)濟(jì)，非常適合于臨床大規(guī)模樣品的檢測(cè)。

5 結(jié)語(yǔ)

豬群中BVDV的感染增加了動(dòng)物疫病流行的復(fù)雜化，對(duì)豬群危害很大。同時(shí)由于BVDV與CSFV的交叉反應(yīng)性，以及BVDV感染與CSFV感染的臨床相似性，給豬瘟的診斷和防治提出了新的課題，增加了豬瘟綜合防控的難度，引起了研究學(xué)者的極度重視，尤其引起了已經(jīng)消滅或控制了豬瘟國(guó)家的極大關(guān)注。豬感染牛病毒性腹瀉的原因很多，很重要的一點(diǎn)就是生物污染問(wèn)題。一些豬瘟細(xì)胞疫苗的生產(chǎn)過(guò)程中使用大量的胎牛血清，制備血清的胎牛常常含有BVDV病原，在細(xì)胞的生產(chǎn)過(guò)程中，有些血清滅活不徹底導(dǎo)致BVDV在細(xì)胞生成，用這樣的細(xì)胞制備的豬瘟疫苗存在生物安全問(wèn)題。此外，飼喂污染BVDV的飼料也可以成為豬源BVDV的感染來(lái)源，一些牛的臟器等廢料被加工成飼料，牛群中BVDV普遍存在，造成了BVDV的污染來(lái)源。豬源BVDV感染目前尚沒(méi)有較好的治療方法，只能采取以預(yù)防為主的綜合性防控措施，故全面掌握我國(guó)不同地區(qū)豬群中BVDV的感染現(xiàn)狀以及常規(guī)檢測(cè)技術(shù)對(duì)我國(guó)不同地區(qū)豬源BVDV綜合防控措施的制定至關(guān)重要。豬源BVDV已在我國(guó)豬群中呈散發(fā)性、地方性流行，個(gè)別地區(qū)的陽(yáng)性感染率較高，其流行現(xiàn)狀不容忽視。豬源BVDV的幾種常規(guī)檢測(cè)技術(shù)各有優(yōu)缺點(diǎn)，研究人員可根據(jù)不同地區(qū)豬源BVDV的感染情況以及自身試驗(yàn)條件合理選擇其中的一種，或者選擇幾種聯(lián)合使用，務(wù)必確保診斷結(jié)果及時(shí)、準(zhǔn)確，對(duì)于BVDV陽(yáng)性感染豬應(yīng)逐步淘汰、凈化，進(jìn)而保障我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的健康、穩(wěn)定與可持續(xù)發(fā)展。

[1]周洛.牛病毒性腹瀉流行現(xiàn)狀及診斷防控[J].中國(guó)動(dòng)物保健，2015，17（7）：46-48.

[2]李嬌，祖立闖，王金良，等.警惕豬群中牛病毒性腹瀉病毒感染[J].養(yǎng)豬，2013（5）：102-104.

[3]陶潔，廖金虎，張倩，等.豬感染牛病毒性腹瀉病毒研究進(jìn)展[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，36（5）：410-413.

[4]張慧英.牛病毒性腹瀉病毒感染對(duì)豬瘟免疫的影響[J].四川畜牧獸醫(yī)，2010（10）：21-23.

[5]鄧宇，袁世山，童武，等.豬源牛病毒性腹瀉病毒SD0803株3'非編碼區(qū)的克隆及結(jié)構(gòu)分析[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2013，43（9）：958-962.

[6]王新平，涂長(zhǎng)春，李紅衛(wèi)，等.從疑似豬瘟病料中檢出牛病毒性腹瀉病毒[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1996，16（4）：341-345.

[7]吳健敏，蔣冬福，韋志峰，等.一起豬瘟與牛病毒性腹瀉混合感染豬的報(bào)道[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2003，39（1）：50-51.

[8]鄧宇，孫春清，張宏彪，等.1株豬源牛病毒性腹瀉病毒的分離與鑒定[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，43（3）：416-423.

[9]楊小燕，魏春華，劉建奎，等.豬源牛病毒性腹瀉病毒的分離鑒定[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2011，41（1）：9-13.

[10]呂建軍.豬感染牛病毒性腹瀉病毒的診斷[J].畜牧與獸醫(yī)，2014，46（11）：109-111.

[11]潘承鳳.豬感染牛病毒性腹瀉病毒的診斷[J].中國(guó)動(dòng)物保健，2016，18（3）：38-39.

[12]戴益民，張文波，劉文峰，等.江西部分地區(qū)豬瘟疑似病例中牛病毒性腹瀉病毒感染情況的初步調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2010，46（7）：12-14.

[13]鄧波，李凱航，鞠龔訥，等.上海地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)牛病毒性腹瀉病毒感染狀況的血清學(xué)調(diào)查[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32（2）：134-136.

[14]宋永峰，張志，張燕霞，等.豬源牛病毒性腹瀉病毒的流行初探[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2008，25（7）：25-27.

[15]吳文輝，衛(wèi)秀余，余紅梅，等.豬群BVDV感染狀況調(diào)查及成因初步分析[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2011（4）：35-37.

[16]戴愛(ài)玲，魏春華，黃思瓊，等.福建龍巖規(guī)模化豬場(chǎng)BVDV感染的血清學(xué)調(diào)查[J].龍巖學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，31（2）：50-53.

[17]徐磊，曾亮明，王玉玲，等.福建省豬群感染牛病毒性腹瀉病毒的病原學(xué)檢測(cè)與分析[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，45（12）：2006-2012.

[18]曾亮明，徐磊，王玉玲，等.豬血清中牛病毒性腹瀉病毒抗體ELISA檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2014，44（9）：944-950.

[19]朱紫祥，顧立偉，張志，等.豬源牛病毒性腹瀉病毒PCR檢測(cè)方法的建立及NS5b區(qū)基因序列分析[J].中國(guó)畜牧雜志，2010，46（8）：79-85.

[20]鄧宇，藺濤，張榮，等.豬源牛病毒性腹瀉病毒套式PCR檢測(cè)方法的建立[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，32（5）：654-657.

[21]鄧宇，張榮，叢雁方，等.豬源牛病毒性腹瀉病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，42（7）：1046-1050.

（編輯：郭玉翠）

讀書(shū)能讓人長(zhǎng)壽

【英國(guó)《泰晤士報(bào)》網(wǎng)站8月5日?qǐng)?bào)道】題：尋找長(zhǎng)壽的新方式？選一本書(shū)試試吧

研究發(fā)現(xiàn)，愛(ài)讀書(shū)的人比不愛(ài)讀書(shū)的人具有明顯的“生存優(yōu)勢(shì)”。而且他們似乎比愛(ài)看雜志或報(bào)紙的人更長(zhǎng)壽。研究人員指出，在長(zhǎng)達(dá)數(shù)百頁(yè)的閱讀過(guò)程中，讀者一直追隨作者的思路、人物或情節(jié)，而不會(huì)忘記誰(shuí)是甘道夫或者為什么全世界的工人要聯(lián)合起來(lái)。這種“深度閱讀”所付出的智力努力讓大腦一直保持活躍，并幫助人們?cè)谖磥?lái)的生活中更好地作出決定。

此外，書(shū)籍還能增強(qiáng)“同情心、社會(huì)認(rèn)知和情商”。此前的研究表明，“同情心、社會(huì)認(rèn)知和情商”與延長(zhǎng)壽命有關(guān)，也許是因?yàn)樗鼈兛梢跃徑鈮毫Α?/p>

耶魯大學(xué)的公共健康專家進(jìn)行了一項(xiàng)長(zhǎng)期調(diào)查，在過(guò)去11年中，他們跟蹤記錄了3 600名50歲以上男性和女性的健康與閱讀習(xí)慣。研究期間，超過(guò)1/4的研究對(duì)象死亡。研究表明，每天讀書(shū)的時(shí)間越長(zhǎng)（哪怕只有半小時(shí)），壽命就越長(zhǎng)。數(shù)據(jù)顯示，截至1/5的研究對(duì)象死亡時(shí)，愛(ài)讀書(shū)的人比不愛(ài)讀書(shū)的人平均壽命長(zhǎng)近2歲。

這種效果也許是可以預(yù)期的，因?yàn)閻?ài)讀書(shū)的人往往更富有，教育程度也更高。因此，他們可能選擇更好的飲食、避免吸煙，并做一些有益健康的事。

不過(guò)，即使在研究人員將這些因素從數(shù)據(jù)中剔除后，愛(ài)讀書(shū)本身似乎仍能對(duì)健康產(chǎn)生顯著影響。

研究報(bào)告發(fā)表在英國(guó)《社會(huì)科學(xué)與醫(yī)學(xué)》月刊上。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2016-08-08）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)05-0078-03

2016-07-14

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（SDAIT-06-022-15）

祖立闖（1981-），男，黑龍江賓縣人，助理研究員，碩士，主要從事動(dòng)物疫病診斷技術(shù)研究.E-mail：zulichuang2008@126.com