北疆地區(qū)豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測與分析

劉鴿，于會舉，張培生，張倩，劉功成，屈勇剛，楊慧敏

（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子832003）

北疆地區(qū)豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測與分析

劉鴿，于會舉，張培生，張倩，劉功成，屈勇剛，楊慧敏

（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子832003）

為了解2014年2月至2016年4月新疆北疆地區(qū)豬偽狂犬病病毒野毒感染情況，試驗(yàn)從北疆地區(qū)的17個規(guī)?；i場（克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個不同區(qū)域）采集血樣932份，采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有139份陽性血清，平均陽性率為14.91%。對4個不同區(qū)域PRV gE蛋白抗體分析發(fā)現(xiàn)，瑪納斯區(qū)域的平均陽性率最高，為18.27%。試驗(yàn)對豬場的PRV gE蛋白抗體檢測呈陽性的個體進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，瑪納斯區(qū)域的陽性個體平均S/N值最大，為0.269 1。研究表明，雖然北疆地區(qū)PRV gE蛋白抗體陽性率較低，但各豬場普遍存在PRV，希望該試驗(yàn)對北疆乃至全疆各豬場PR的預(yù)防和凈化工作有所幫助。

PRV；ELISA；抗體檢測；陽性率

豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）是引起豬偽狂犬?。≒seudorabies,PR）的病原。PR具有急性、熱性和高度接觸性傳染的特點(diǎn)，危害十分嚴(yán)重。豬是PRV的自然宿主，自然界中只有豬是該病毒的唯一宿主[1]，豬感染PRV后能引起腦脊髓炎癥、自身發(fā)熱，并且容易引起妊娠母豬流產(chǎn)和仔豬死亡，且仔豬死亡率非常高，達(dá)到有發(fā)病無一幸免的可怕程度[2]。PR在全球范圍內(nèi)流行很廣，將該病從豬場根除難度很大，對養(yǎng)豬業(yè)的危害不容忽視[3]。國際獸醫(yī)局（OIE）將之列為B類動物傳染病，因?yàn)樵u定標(biāo)準(zhǔn)名稱不同，我國將之列為二類動物傳染病[4-5]。20世紀(jì)90年代，西方發(fā)達(dá)國家大多制定并啟動了根除PR計(jì)劃。在歐洲一些國家，常采用豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）的檢測方法對待測豬進(jìn)行監(jiān)測，方便對豬群進(jìn)行PR的預(yù)防和及時(shí)凈化豬場PRV[6-7]。目前，全球范圍內(nèi)都在積極預(yù)防和凈化豬場的PRV。

由于南疆地區(qū)是少數(shù)民族聚集區(qū)，豬肉消費(fèi)量相對較少，北疆地區(qū)養(yǎng)豬量占全疆養(yǎng)豬量的絕大部分，所以了解北疆地區(qū)的豬病情況對評估全疆的豬病有一定的參考價(jià)值。為了調(diào)查北疆地區(qū)豬群PRV野毒感染情況，本試驗(yàn)在2014年2月至2016年4月期間內(nèi)從北疆地區(qū)的17個規(guī)?；i場（克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯4個不同區(qū)域）采集血樣932份，在新疆石河子大學(xué)動物科技學(xué)院動物傳染病實(shí)驗(yàn)室用間接ELISA法檢測其抗體情況，希望對北疆乃至全疆各豬場PR預(yù)防和凈化工作有所幫助。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 血樣來源2014年2月至2016年4月從北疆地區(qū)的17個規(guī)?；i場的不同類別豬（0～10 d、11～20 d、21～30 d仔豬，后備母豬，經(jīng)產(chǎn)母豬，種公豬）中共采集血樣932份。

1.1.2 試驗(yàn)儀器和材料豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒（武漢科前生物生產(chǎn)，批號：20130101），微量移液器、恒溫培養(yǎng)箱、自動酶標(biāo)儀（美國Bio Tek儀器有限公司生產(chǎn)），獸用采血器。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集用一次性獸用采血器從豬的前腔靜脈采血3~4 mL/頭，待血清析出，將采血器和血樣放到有冰袋的保溫箱內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室處理。每份移取1 mL左右血清到滅菌的EP管（1.5 mL）中，一定要逐管準(zhǔn)確對應(yīng)標(biāo)記，在離心機(jī)中離心（條件：4 000 r/min，時(shí)間為8~10 min），即刻檢測或放到-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。放入冰箱備用的血清也要盡快對其檢測，避免時(shí)間過長而影響試驗(yàn)結(jié)果。

1.2.2 豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測法嚴(yán)格按照豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒使用說明書操作。在室溫條件下，將濃縮洗滌液搖動1~3 min，20倍稀釋。將待檢血清和對照血清各按1∶1稀釋。各取稀釋好的待檢血清和對照血清100 μL于包被板微孔中，陰、陽對照各設(shè)兩孔，37℃恒溫箱中孵育45 min后，抗原抗體結(jié)合，先洗滌再加酶標(biāo)記物100 μL，37℃恒溫箱中孵育20 min，每孔各加50 μL底物A、B，室溫避光顯色15 min后，每孔加50 μL終止液，混勻后盡快（最好10 min內(nèi)之內(nèi)，時(shí)間過長會影響結(jié)果的準(zhǔn)確性）測各反應(yīng)孔中的OD630nm值，判定結(jié)果。

1.2.3 判定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)用酶標(biāo)儀測OD630nm值。本試驗(yàn)成立的條件是陰性對照平均OD630nm值與陽性對照平均OD630nm值之差必須≥0.3。

S代表各樣品孔OD630nm值大小，N代表陰性對照各孔平均OD630nm值大小。

若S/N≤0.35，樣品判為gE抗體陽性；若0.4≥S/N＞0.35，樣品判為可疑；若S/N＞0.4，樣品判為gE抗體陰性。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析用SPSS軟件、Excel軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算gE抗體陽性率、可疑率、陰性率及平均S/N值。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.14 個區(qū)域豬場的豬偽狂犬病病毒gE抗體陽性率、可疑率、平均S/N值

豬場A～D在克拉瑪依區(qū)域，E～I(xiàn)在沙灣區(qū)域，J～M在石河子區(qū)域，N～Q在瑪納斯區(qū)域。932份血清中檢出gE抗體陽性139份，陽性率14.91%；檢出可疑血清5份，可疑率為0.54%。豬場A~Q中，只有A、C、D、I、L場檢測出可疑血清，可疑率分別為1.43%、0.70%、5.00%、2.86%、1.32%，均小于10%。豬場A~Q的gE抗體陽性率依次為：14.29%、17.46%、10.56%、10.00%、12.00%、12.12%、17.86%、16.28%、8.57%、11.11%、25.00%、17.11%、18.42%、13.04%、21.43%、21.95%、16.67%，不難發(fā)現(xiàn)其中最大值為25%，最小值是8.57%。A~Q豬場的平均S/N值分別為：0.481 2、0.431 8、0.501 5、0.482 7、0.491 5、0.490 1、0.431 5、0.437 8、0.501 1、0.503 1、0.409 8、0.431 8、0.428 7、0.483 1、0.413 2、0.411 2、0.435 1，這些值都＞0.4，其中最大值為0.503 1，最小值為0.409 8。結(jié)果見表1。

表1 北疆地區(qū)豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體ELISA檢測結(jié)果

試驗(yàn)不同區(qū)域的17個豬場的PRV gE蛋白抗體檢測平均陽性率：克拉瑪依13.08%，沙灣13.37%，石河子17.91%，瑪納斯18.27%。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，瑪納斯的PRV gE蛋白抗體檢測平均陽性率最高，為18.27%；而石河子的僅次于瑪納斯，為17.91%；克拉瑪依的最低，為13.08%，但都高于10%。

不同的試驗(yàn)區(qū)域豬場的平均S/N值為：克拉瑪依0.474 3，沙灣0.470 4，石河子0.443 4，瑪納斯0.435 7。可以發(fā)現(xiàn)，該4個區(qū)域的平均S/N值均＞0.4，且均<0.500 0，其中克拉瑪依和沙灣的平均S/N值較接近，分別為0.474 3、0.470 4，瑪納斯的平均S/N值最小，為0.435 7。

對北疆地區(qū)試驗(yàn)豬場的PRV gE蛋白抗體檢測呈陽性的個體進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，其陽性個體平均S/N值：克拉瑪依與瑪納斯的結(jié)果相差較大，分別為0.225 8、0.269 1。對比發(fā)現(xiàn)，沙灣和石河子的陽性個體平均S/N值極為接近，分別為0.241 2和0.245 9；其中最大值在瑪納斯區(qū)域?yàn)?.269 1，但都小于0.300 0。結(jié)果見表2。

表2 北疆4個不同區(qū)域17個豬場的PRV gE蛋白抗體分析

2.2 試驗(yàn)豬場不同類型豬群的PRV gE蛋白抗體水平

對北疆地區(qū)的17個規(guī)?；i場PRV gE蛋白抗體檢測發(fā)現(xiàn)，PRV gE蛋白抗體平均陽性率為14.91%，試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)0～10 d、11～20 d、21～30 d仔豬，后備母豬，經(jīng)產(chǎn)母豬，種公豬的PRV gE蛋白抗體陽性率依次為5.88%、7.06%、22.35%、26.88%、9.4%和5.06%。各類型豬群中，PRV gE蛋白抗體陽性率最低是種公豬群，為5.06%；PRV gE蛋白抗體陽性率最高的豬群是后備母豬，為26.88%，其次為21～30 d仔豬22.35%。該試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表3。

表3 各試驗(yàn)豬場不同類型豬群PRV gE蛋白抗體水平

3 討論

3.1 北疆地區(qū)PRV gE蛋白抗體陽性率較低

用PRV gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒對采自北疆地區(qū)的932份血清進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)有139份陽性血清，陽性率為14.91%，比張魯安在2005年報(bào)道的10.1%高[8]，而與張倩等在2013年對青島市的一些豬場檢測的15.42%接近[9]。所有試驗(yàn)豬場中有3個豬場的PRV gE蛋白抗體陽性率高于20%，分別為25.00%、21.43%、21.95%，其余豬場的PRV gE蛋白抗體陽性率都小于20%，最低的為8.57%。PRV在新疆北疆地區(qū)的豬場普遍存在，并沒有哪個豬場的PRV gE蛋白抗體陽性率為0，這說明，雖然北疆地區(qū)PRV gE蛋白抗體陽性率較低，但各豬場PRV存在率為100%。

3.2 加強(qiáng)豬場管理和預(yù)防疾病工作，積極凈化豬場PR

從試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PR在北疆地區(qū)流行較廣，每個豬場都有PR野毒感染的情況。所以，應(yīng)加強(qiáng)各規(guī)?；i場的飼養(yǎng)管理和疾病預(yù)防工作，做好豬場的日常消毒工作，盡早并定期對豬群進(jìn)行PR檢測，一年要進(jìn)行2次，甚至更多，及時(shí)發(fā)現(xiàn)被PRV感染的豬，尤其是種母豬和種公豬被PRV感染時(shí)應(yīng)及早淘汰。因?yàn)镻RV可在豬群中橫向和垂直傳播，必須及早淘汰PRV感染豬，防止豬場健康豬群感染PRV。

3.3 用基因缺失苗對豬群進(jìn)行免疫

目前，國內(nèi)外有效果較好的基因缺失苗用于PR的免疫接種，常有PRV存在的豬場可以對豬群進(jìn)行科學(xué)的全免，合理的免疫是預(yù)防PR的有效措施之一。免疫后，用PRV gE蛋白ELISA抗體檢測法評估豬群的免疫效果，及時(shí)淘汰感染PRV的豬和免疫耐受豬。

[1]白文彬，于康震.動物傳染病診斷學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：70-45.

[2]殷震，劉景華.動物病毒學(xué)[M].第2版.北京：科學(xué)出版社，1997：329-340，998-1002.

[3]陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].第5版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1980：218-220.

[4]于大海，崔硯林.中國進(jìn)出境動物檢疫規(guī)范[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，1997：103-115.

[5]世界動物衛(wèi)生組織.陸生動物診斷實(shí)驗(yàn)和疫苗手冊[M].第5版.農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局譯，2004：45-50.

[6]van nes A.Mathematieal modelling of Pseudorabies virus(syn. Aujeszk's disease virus)outhreaks aids eradieation programmes: a review[J].Vet Q,2001,23(1):21-26.

[7]Pensaert M,Labarque.Aujeszky's disease vaeeination and Differentiation of vaecinated from infectedpigs[J].Dev Biol(Basel), 2004,119:243-254.

[8]張魯安.新疆豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查及病毒株的分離鑒定[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2005.

[9]張倩，楊培培，劉明團(tuán).青島地區(qū)豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查[J].山東畜牧獸醫(yī)，2013（12）：53-54.

（編輯：柳青）

高強(qiáng)度有氧運(yùn)動能延緩衰老

【英國《每日郵報(bào)》網(wǎng)站8月1日報(bào)道】題：耐力運(yùn)動能減緩衰老嗎？

如果真有什么能鼓勵你去健身房，或許就是這個了。一項(xiàng)新研究稱，高強(qiáng)度有氧運(yùn)動可以減緩衰老進(jìn)程

隨著人逐漸變老，我們每條DNA鏈的保護(hù)性端粒會磨損和變短。但新研究發(fā)現(xiàn)，耐力訓(xùn)練能保護(hù)這些端粒，讓它們逃離變短的命運(yùn)。

研究結(jié)果顯示，此類體力活動能生成強(qiáng)化和延長端粒的化學(xué)物質(zhì)，從而使我們能更長久地保持青春。這項(xiàng)研究由比利時(shí)的幾家機(jī)構(gòu)開展，其結(jié)果發(fā)表在本月出版的英國《科學(xué)進(jìn)展》雜志上。

研究人員讓10名志愿者騎健身車45分鐘。他們采集每名志愿者運(yùn)動前后的血樣和肌肉活組織，然后在兩個半小時(shí)后再次采集。

研究人員分析結(jié)果后發(fā)現(xiàn)，一種導(dǎo)致端粒變長的酶的含量增加了。這意味著染色體（以及染色體內(nèi)的DNA）能得到更好的保護(hù)。

我們的DNA被包裹在染色體內(nèi)。每條染色體的兩端各有一個保護(hù)性端粒。在我們的一生中，細(xì)胞不斷分裂和復(fù)制。但在這個分裂過程中，端粒變短，能覆蓋的染色體區(qū)域變小。這導(dǎo)致我們的細(xì)胞開始老化和衰弱。最終，細(xì)胞分裂完全停止，我們走向死亡。

許多科學(xué)家還認(rèn)為，有些人生來端粒較長，因此他們或許注定能活得更久。

在探尋如何保護(hù)染色體的行動中，此類研究—盡管是小規(guī)模的—為醫(yī)學(xué)界帶來了令人興奮的消息。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2016-08-04）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)05-0100-03

2016-05-18

新疆石河子市農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)項(xiàng)目（2013NY04）

劉鴿（1986-），男，山東淄博人，在讀碩士研究生，主要從事動物傳染病的診斷與防治工作.E-mail:1539881644@qq.com

屈勇剛（1971-），男，陜西渭南人，副教授，主要從事動物傳染病診斷與防治工作.E-mail:quyonggang@shzu.edu.cn