北疆地區(qū)規(guī)模化豬場豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體水平檢測與分析

劉鴿，張培生，于會舉，張倩，屈勇剛

（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子832003）

北疆地區(qū)規(guī)?；i場豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體水平檢測與分析

劉鴿，張培生，于會舉，張倩，屈勇剛

（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子832003）

為了解新疆北疆地區(qū)2014年1月至2016年4月期間的豬場豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體水平及PCV2野毒感染情況，試驗從北疆地區(qū)的18個規(guī)?；i場中采集血樣984份，檢出免疫抗體陽性個體902份，占91.67%。18個試驗豬場中有11個豬場的抗體陽性率在90%以上，占61.11%，免疫抗體陽性率超過85%的豬場有17個；種公豬的抗體陽性率最高，為98.78%。研究結(jié)果表明：北疆地區(qū)的豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性率較高，整體免疫水平較好，但也存在豬圓環(huán)病毒2型野毒感染或免疫失敗的情況；0～30 d仔豬的免疫抗體陽性率雖然較高，但有隨日齡增大而免疫水平下降的趨勢。希望試驗研究成果在一定程度上對養(yǎng)豬企業(yè)的生產(chǎn)工作有所幫助。

PCV2；ELISA；抗體水平；陽性率

豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus,PCV）是引起豬圓環(huán)病毒病的病原。PCV屬圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬的單股負(fù)鏈DNA病毒，該病毒是目前發(fā)現(xiàn)的動物病毒中最小的一種。據(jù)抗原性和基因組成的不同，PCV可以分為兩個血清型：PCV1、PCV2，兩個血清型PCV均在豬群中存在，但只有PCV2具有致病性[1-2]。豬群被PCV2感染后，不但引起豬圓環(huán)病毒病，還可引起免疫抑制，造成其他豬病的繼發(fā)感染[3]，引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、肺炎、母豬繁殖障礙、肥育豬皮炎腎病綜合征等[4]。豬圓環(huán)病毒病最早在20世紀(jì)90年代初發(fā)現(xiàn)于加拿大，1996年在歐洲一些國家暴發(fā)，現(xiàn)在在世界上普遍流行。目前，我國各地豬場感染PCV2情況十分普遍，有的可高達(dá)96%[5]。隨著養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的不斷擴(kuò)大，對PCV2的研究越來越受到人們的重視[6]。PCV抗體在豬群中普遍存在，采用豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒可快速、準(zhǔn)確地對豬群進(jìn)行檢測。

新疆養(yǎng)豬事業(yè)在近幾年有了飛速發(fā)展，規(guī)?；⒓s化程度越來越高，尤其是從2015年下半年開始。北疆地區(qū)養(yǎng)豬量占全疆的絕大部分，因此研究北疆豬病情況對全疆有較為準(zhǔn)確的參考作用。在2014年1月至2016年4月期間，本試驗研究從北疆地區(qū)（巴州、克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯、奇臺等不同區(qū)域）的18個現(xiàn)代規(guī)模豬場采樣，進(jìn)行豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體檢測并做出分析，希望對各養(yǎng)豬企業(yè)的生產(chǎn)工作有所幫助。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗樣品來源2014年1月至2016年4月期間，從新疆北疆地區(qū)（巴州、克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯、奇臺等不同區(qū)域）的18個現(xiàn)代規(guī)模豬場采集984份血樣，其中包括不同類型豬群（0～30 d仔豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬）。

1.1.2 試驗所需材料和必備儀器豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒（武漢科前生物，20130101）、自動酶標(biāo)儀（美國Bio Tek）、一次性獸用采血器（5 mL）、微量移液器（Eppendorf公司）、恒溫培養(yǎng)箱、平板震蕩儀等。

1.2 試驗方法

1.2.1 采集試驗樣品方法試驗樣品采集過程保證規(guī)范性操作。用5 mL一次性獸用采血器從豬的前腔靜脈一次性采血3～4 mL/頭，室溫靜置，析出血清，收納于放有冰袋的保溫箱或采樣箱中，帶回實驗室進(jìn)行分析。從每份血樣中吸取1 mL血清于已經(jīng)滅菌處理的EP管（1.5 mL）中，做到逐管準(zhǔn)確標(biāo)記，在適當(dāng)規(guī)程的離心機(jī)中離心（合適的離心條件：4 000 r/min，時間為8~10 min），放到-20℃冰箱中保存?zhèn)溆没蚣纯虣z測。也要盡快對放到冰箱中的待檢血清進(jìn)行檢測，以防較長的時間對試驗結(jié)果造成大的影響。

1.2.2 豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測方法將濃縮的洗滌液恢復(fù)到室溫，搖動（目的是使沉淀的鹽溶解），作20倍稀釋（稀釋好的洗滌液可在2~8℃存放7 d）。待檢血清按1∶40的體積稀釋，對照血清按1∶4的體積稀釋。用洗滌液對需要用到的抗原包被板微孔洗滌2次后，分別取稀釋好的100 μL待檢血清和對照血清加于對應(yīng)抗原包被板微孔中。要求陰、陽對照各設(shè)兩孔，每個待檢樣各設(shè)一孔。搖勻，經(jīng)37℃恒溫箱中溫育30 min，洗滌5次。移取100 μL酶標(biāo)二抗于各孔中，再次在37℃中孵育30 min后，再次洗滌5次。接下來，分別在每個孔中各加50 μL底物A和50 μL底物B，在室溫條件下避光10 min后，在每孔中加50 μL終止液。在10 min之內(nèi)測OD630nm值（測定前在平板震蕩器上輕輕震蕩一下）。

1.2.3 試驗結(jié)果判定用酶標(biāo)儀測定各孔的OD630nm值。本試驗成立必須滿足的條件是：陽性對照孔的平均OD630nm值≥0.7，陰性對照孔的平均OD630nm值＜0.3。

待測樣品OD630nm值＞0.42，則該血清判為陽性；若0.42≥OD630nm值≥0.38，則該血清樣品被判為可疑；待檢血清OD630nm值＜0.38，則判為陰性。

1.2.4 試驗結(jié)果分析用統(tǒng)計分析中最為常見的SPSS軟件、Excel軟件對本試驗的數(shù)據(jù)進(jìn)行準(zhǔn)確的統(tǒng)計分析，計算PCV2抗體陽性率、可疑率、陰性率，陽性個體的平均OD630nm值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 試驗結(jié)果

2.1 試驗豬場的豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性率、可疑率、陰性率

豬場編號A~R分別代表18個現(xiàn)代規(guī)模豬場。試驗采集的984份血清樣品中檢出豬圓環(huán)病毒2型免疫陽性抗體的有902份，其陽性率為91.67%。統(tǒng)計18個試驗豬場的試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，陽性率最高的為96.48%，陽性率最低的為84.21%；陽性率超過90%的豬場有11個，占試驗豬場的61.11%；陽性率超過85%的豬場有17個（也就是說，18個豬場中只有1個豬場的抗體陽性率低于85%），占試驗豬場的94.44%，但所有試驗豬場的抗體陽性率均在84%以上；984份血清樣品中檢出6份可疑血清樣品，占所有試驗血清樣品的0.61%；檢出抗體陰性的血清樣品有76份。試驗結(jié)果見表1。

2.2 免疫抗體陽性個體的平均OD630nm值

18個試驗豬場中，檢出豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性個體的平均OD630nm值均在0.700以上；平均OD630nm值在0.85以上的有15個豬場，占所有試驗豬場的83.33%；平均OD630nm值在0.95以上的有11個豬場，占試驗豬場的61.11%；有5個豬場的豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性個體的平均OD630nm值大于1.000。試驗結(jié)果見表2。

表1 試驗豬場豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體ELISA檢測結(jié)果

表2 試驗豬場豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性個體的OD630nm值

2.3 北疆地區(qū)試驗豬場不同類別豬群的豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體水平

統(tǒng)計試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，984份試驗樣品中檢出902份豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性血清樣品，陽性率為91.67%；0～30 d仔豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的抗體陽性個體數(shù)分別為258、239、324、81份，而其免疫抗體陽性率依次為95.56%、80.74%、96.43%、98.78%。從統(tǒng)計試驗結(jié)果不難發(fā)現(xiàn)，豬群結(jié)構(gòu)中抗體陽性率最高的為98.78%，是種公豬；最低的為后備母豬，免疫抗體陽性率為80.74%，但免疫抗體陽性率都高于80%；4種豬群結(jié)構(gòu)中抗體陽性率大于95.00%的有3種，占總豬群結(jié)構(gòu)的75%。統(tǒng)計結(jié)果見表3。

表3 不同類別豬群抗體陽性率

2.4 試驗豬場所有0～30 d仔豬豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性率

試驗采集的270份0～30 d仔豬血樣中，有258份呈免疫抗體陽性，陽性率為95.56%。其中，0～10 d、11～20 d、21～30 d仔豬樣品數(shù)均為90份，其陽性數(shù)依次為89、86、83份，對應(yīng)的抗體陽性率依次為98.89%、95.56%、92.22%?？梢园l(fā)現(xiàn)，0～10 d仔豬的抗體陽性率最高，為98.89%；21～30 d仔豬抗體陽性率最低，為92.22%；0～30 d仔豬的抗體陽性率隨日齡增長有下降趨勢，但抗體陽性率均高于92.00%。結(jié)果見表4。

表4 0～30 d仔豬豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性率

3 討論

3.1 北疆試驗豬群的豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體水平較高

使用豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒檢測984份血清樣品，發(fā)現(xiàn)有902份呈陽性，免疫抗體陽性率為91.67%，其有較高的整體免疫水平，高于河南、湖南一些地區(qū)的免疫抗體水平[7-8]。試驗研究發(fā)現(xiàn)，18個豬場中有11個豬場的抗體陽性率在90%以上，占61.11%，也就是超過一半豬場的抗體水平較高；抗體陽性率最低的豬場為84.21%，也在84%以上；免疫抗體陽性率超過85%的豬場有17個。984份血清中發(fā)現(xiàn)6份可疑血清，可疑率為0.61%，不足1%，處于較低水平，需對這些血清重復(fù)檢測，以確定其準(zhǔn)確的陰、陽性。檢出15個豬場豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性個體的平均OD630nm值在0.85以上，5個豬場的平均OD630nm值大于1.000。檢出76份陰性血清，陰性率為7.72%，不足10%，且每個試驗豬場均檢出豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陰性個體。這就說明：北疆地區(qū)的豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性率較高，整體免疫水平較好，但也存在豬圓環(huán)病毒2型野毒感染或免疫失敗的情況，應(yīng)加強(qiáng)防控措施。

3.2 試驗豬場的不同類別豬群間存在差異

統(tǒng)計試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0～30 d仔豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的不同類別豬群中豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體水平存在差異，種公豬的抗體陽性率最高，為98.78%；其次為經(jīng)產(chǎn)母豬，為96.43%；后備母豬的抗體陽性率僅為80.74%，也低于0～30 d仔豬的抗體陽性率（95.56%）。4種豬群結(jié)構(gòu)中有3/4的豬群免疫抗體陽性率大于95.00%。研究0～30 d仔豬豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體陽性率發(fā)現(xiàn)：0～10 d仔豬的免疫抗體陽性率最高，為98.89%；其次為11～20 d仔豬，為95.56%；21～30 d仔豬的抗體陽性率最低，為92.22%。不難發(fā)現(xiàn)：0～30 d仔豬的免疫抗體陽性率雖然較高，但有隨日齡增大而免疫水平下降的趨勢，可能與母源抗體有一定關(guān)系。

3.3 加強(qiáng)豬群管理，把好疾病預(yù)防關(guān)

本試驗研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，北疆地區(qū)的豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體水平較高，但鑒于PCV2在國內(nèi)豬場流行較廣，建議采取及時有效的免疫預(yù)防工作，搞好豬場的環(huán)境消毒工作，防患于未然[9]。對種公豬和繁殖母豬做到全免，根據(jù)各豬場自身特點，在適當(dāng)時間對仔豬進(jìn)行免疫接種，應(yīng)科學(xué)積極地調(diào)整本豬場的免疫程序[10]。

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[4]陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].第5版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：231-233.

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（編輯：郭玉翠）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)05-0105-03

2016-05-24

新疆石河子市農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)項目（2013NY04）

劉鴿（1986-），男，山東淄博人，在讀碩士研究生，主要從事動物傳染病診斷與防治工作.E-mail：1539881644@qq.com

屈勇剛（1971-），男，陜西渭南人，副教授，主要從事動物傳染病診斷與防治工作.E-mail：quyonggang@shzu.edu.cn