SLCO1B1 521T>C基因多態(tài)性對(duì)瑞舒伐他汀鈣降脂療效的影響

張昀赟， 葉小磊， 王美華， 陳季志， 查 芹

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SLCO1B1 521T>C基因多態(tài)性對(duì)瑞舒伐他汀鈣降脂療效的影響

張昀赟1， 葉小磊2， 王美華1， 陳季志1， 查 芹1

目的 觀察SLCO1B1 521T>C基因多態(tài)性對(duì)瑞舒伐他汀鈣降脂療效的影響。方法 納入2015年1月-2015年12月期間我院神經(jīng)內(nèi)科高脂血癥患者，均口服瑞舒伐他汀鈣片10 mg，一次/日，睡前服用。應(yīng)用ARMS-PCR方法探索中國(guó)人群中SLCO1B1 521T>C的基因型分布頻率，并分別檢測(cè)用藥前與用藥后1 w、6 w的血總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，并計(jì)算其變化率。結(jié)果 瑞舒伐他汀治療1 w后，各組TC、TG、LDL-C、HDL-C變化率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。用藥6 w后，TC組和CC組較TT組能顯著降低TC、LDL-C及升高HDL-C水平，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但TC組和CC組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組間TG變化率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 SLCO1B1 521T>C基因變異可增強(qiáng)瑞舒伐他汀鈣降脂療效。

瑞舒伐他汀； SLCO1B1； 基因多態(tài)性； 高脂血癥； ARMS-PCR

他汀類藥物是目前降脂最有效的藥物。但是，不同個(gè)體的獲益程度不盡相同。有研究顯示他汀類藥物調(diào)脂作用存在的個(gè)體間差異可達(dá)70%[1]。不同個(gè)體的療效差異主要取決于藥物代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)的基因多態(tài)性。瑞舒伐他汀鈣作為一種有效、安全的新型他汀類藥物，療效也存在個(gè)體差異[2]。瑞舒伐他汀鈣主要經(jīng)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽(OATP1B1)轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入肝細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮藥效[3]。OATP1B1由SLCO1B1編碼，其中521T>C突變位點(diǎn)具有重要的功能意義。國(guó)內(nèi)外目前關(guān)于SLCO1B1 521T>C多態(tài)性對(duì)瑞舒伐他汀影響的研究較少，且均為藥代動(dòng)力學(xué)相關(guān)研究，藥效學(xué)尚未見(jiàn)于文獻(xiàn)。本研究將探索SLCO1B1 521T>C在中國(guó)人群中的突變頻率，及其對(duì)瑞舒伐他汀鈣調(diào)脂療效的影響，為瑞舒伐他汀臨床個(gè)體化用藥提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2015年1月-2015年12月于我院神經(jīng)內(nèi)科就診的高脂血癥患者。入選病例標(biāo)準(zhǔn)：本院成人高脂血癥患者，肝腎功能正常，總膽固醇(TC)≥5.2 mmol/L或甘油三酯(TG)≥1.7 mmol/L，或低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)≥3.12 mol/L，或高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)≤1.16 mmol/L。口服瑞舒他汀10 mg，一次/日，睡前服用作為唯一調(diào)脂藥物，且給藥前2 w內(nèi)未服用過(guò)其他調(diào)脂藥物。

收集符合上述標(biāo)準(zhǔn)共62例。其中，男34例,女28例，年齡46～86歲，平均(66.16±10.61)歲。

1.2 研究方法

1.2.1 血樣的采集 入選患者接受瑞舒他汀治療前，采集靜脈血1 ml入EDTA抗凝試管，-20 ℃冷藏，統(tǒng)一提取DNA。同時(shí)采集靜脈血2 ml，檢測(cè)TC、TG、LDL-C 及 HDL-C基礎(chǔ)值?；颊咭?guī)律服藥1 w及6 w后，分別于服藥后10 h左右采集靜脈血2 ml，測(cè)定治療后TC、TG、LDL-C 及 HDL-C值。

1.2.2 血液DNA提取 采用Qiagen外周血DNA提取試劑盒提取外周血白細(xì)胞DNA，檢測(cè)DNA質(zhì)量，用滅菌蒸餾水將提取的DNA稀釋一定倍數(shù)作為PCR模板。

1.2.3 基因型檢測(cè)

1.2.3.1 PCR引物建立 SLCO1B1 521T>C目的片段PCR擴(kuò)增引物根據(jù)參考文獻(xiàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)。前向外引物：5’-AAGTAGTTAAATTTGTAATAGAAATGC-3’，反向外引物：5’-GTAGACAAAGGGAAAGTGATCATA-3’；前向內(nèi)引物：5’-GGGTCATACATGTGGATATAAGT-3’，反向內(nèi)引物：5’-AAGCATATTACCCATGAACG-3’。

1.2.3.2 PCR擴(kuò)增體系 PCR擴(kuò)增體系50 μl：10×buffer 5 μl；2.5 mmol/L dTTP、dATP、dGTP、dCTP 共4 μl，2.5 μmol/L引物各1 μl，Taq DNA聚合酶0.5 μl，DNA模板200 ng，雙蒸水補(bǔ)足至50 μl。

1.2.3.3 PCR 反應(yīng)條件 94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，48 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，38個(gè)循環(huán)，72 ℃再延伸5 min。

1.2.3.4 電泳分型 稱取1.25 g瓊脂糖粉放入50 ml電泳緩沖液中，微波加熱至溶解；將溶液冷卻至約60 ℃，加入10 mg/ml溴化乙錠2.5 μl，充分混勻后將倒入膠膜中，插入梳子；移去梳子，根據(jù)需要切割凝膠；將凝膠片放入電泳槽中，槽中加入TBE緩沖液至過(guò)膠面；10 μl DNA樣品與上樣緩沖液混合后，加入樣品槽中，蓋上電泳槽并通電，DNA向陽(yáng)極移動(dòng)，直至溴酚藍(lán)和二甲苯青在凝膠中遷移出適當(dāng)?shù)木嚯x，約需40 min；切斷電源，將凝膠從電泳槽中取出，在紫外燈下檢查并照相。

2 結(jié) 果

2.1 SLCO1B1 521T>C基因型及等位基因分布頻率 62例高脂血癥患者中，T/T、T/C、C/C基因型分別為42例(67.74%)、14例(22.58%)、6例(9.68%)。等位基因C和T的頻率分別為 79.03%和20.97%。

2.2 一般資料比較 3組在年齡、性別、身體質(zhì)量指數(shù)[BMI=體重(kg)/身高2(m)]、高血壓病、糖尿病方面差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表1)。

2.3 SLCO1B1 521T>C不同基因型治療前后血脂的比較 3組用藥前TC、TG、LDL-C、HDL-C水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表2)。用藥1 w后，各組TC、TG、LDL-C、HDL-C變化率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表3)。用藥6 w后，TC組和CC組較TT組能顯著降低TC、LDL-C及升高HDL-C水平，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但TC組和CC組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表4)。各組間TG變化率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表4)。

2.4 不良反應(yīng) 瑞舒伐他汀治療1 w后，所有病例均未出現(xiàn)肝功能損害、腎功能損害、肌酶升高等不良反應(yīng)。治療6 w后，出現(xiàn)肝功能損害共4例，TT組3例，TC組1例，均占7.14%，未出現(xiàn)腎功能損害、肌酶升高等不良反應(yīng)。

表1 一般資料比較

表2 治療前各組血脂水平的比較

表3 治療1 w后各組血脂變化率比較

表4 治療6 w后各組血脂變化率比較

與TC、CC組相比較*P<0.01，△P>0.05

3 討 論

影響藥物藥代-藥效差異的主要因素是藥物的吸收、分布、代謝和排泄。只有約10%瑞舒伐他汀鈣經(jīng)CYP450代謝，大部分以原形排出，因此其調(diào)脂作用的個(gè)體差異可能主要來(lái)自于細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)體[4]。瑞舒伐他汀鈣主要由陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽(OATP1B1)轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入肝細(xì)胞，同時(shí)主要經(jīng)乳腺癌抑制蛋白(BCRP)外排出肝臟[3]。但有研究顯示，中國(guó)健康受試者BCRP野生型組和突變組在AUC、Cmax、總清除率和腎清除率上均無(wú)顯著性差異[5]。OATP1B1由位于染色體12pl2的SLCO1B1編碼，SLCO1B1具有高度的遺傳多態(tài)性，目前研究發(fā)現(xiàn)有功能意義改變的突變位點(diǎn)為521T>C和388A>G[6]。521T>C突變使OATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)能力下降， 388A>G 突變則能升高OATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)能力[6]。但國(guó)內(nèi)外均有研究顯示521T>C突變降低轉(zhuǎn)運(yùn)體轉(zhuǎn)運(yùn)的作用遠(yuǎn)大于388A>G提高的作用，二者同時(shí)發(fā)生突變后，OATP1B1功能意義的改變?nèi)匀皇且?21T>C為主[7,8]。因此，此次試驗(yàn)我們選取SLCO1B1 521T>C位點(diǎn)作為研究對(duì)象。

本研究發(fā)現(xiàn)用藥1 w后，各組TC、TG、LDL-C水平均明顯下降，HDL-C升高，但各組間變化率無(wú)明顯差異。有相關(guān)藥動(dòng)學(xué)研究顯示SLCO1B1 521T>C突變?cè)黾尤鹗娣ニ◇w內(nèi)吸收程度，減慢消除過(guò)程[9]，與此矛盾。但是用藥6 w后，各項(xiàng)指標(biāo)下降/升高均較前顯著，且TC組和CC組較TT組能更顯著降低TC、LDL-C及升高HDL-C水平。瑞舒伐他汀中國(guó)注冊(cè)臨床研究協(xié)作組研究顯示，每日服用10 mg瑞舒伐他汀，6 w可發(fā)揮最大降脂作用[10]。因此，用藥1 w后各組間指標(biāo)變化率無(wú)差異可能與藥物尚未完全起效有關(guān)。本研究中我們發(fā)現(xiàn)肝功能損害現(xiàn)象，TT組和TC組均占7.14%，因此在用藥過(guò)程中仍需關(guān)注肝功能，但SLCO1B1 521T>C基因變異或許對(duì)此無(wú)影響。

綜上所述，SLCO1B1 521T>C基因變異可增強(qiáng)瑞舒伐他汀鈣降脂療效。但本研究樣本量小，降脂療效受其他遺傳因素、生活習(xí)慣等多方面影響，因此，尚需進(jìn)行大樣本，多因素聯(lián)合試驗(yàn)綜合分析。

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Effect of SLCO1B1 521T>C gene polymorphism on lipid lowing of rosuvastatin

ZHANG Yunyun,YE Xiaolei,WANG Meihua,et al.

(Department of Nuerology,The Affiliated Hospital of Ningbo University Medical College,Ningbo 315000,China)

Objective To observe the effect SLCO1B1 521T>C gene polymorphism on lipid lowing of rosuvastatin.Methods From 2015-1 to 2015-12,patients with hyperlipidemia in department of neurology were included.They were treated with rosuvastatin 10 mg,1 times/day,at bedtime. ARMS-PCR was used to explore SLCO1B1 521T>C gene frequency distribution of chinese.The level of cholesterol (TC),triglyceride (TG),low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) and high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) were detected before treatment and 1 week,6 weeks after treatment,and calculate the rates of change.Results After 1 week of treatment,there was no significant difference in the change rate of TC,TG,HDL-C and LDL-C in all the groups (P>0.05).After 6 weeks of treatment,LDL-C,TC of TC and CC groups were significantly lower than TT group.HDL-C of TC and CC groups was higher.There was statistical significance (P<0.01).But there was no significant difference between TC group and CC group (P>0.05).There was no significant difference in the change rate of TG between the groups (P>0.05).Conclusion SLCO1B1 521T>C gene mutation can enhance the effect on lipid lowing of rosuvastatin.

Rosuvastatin; SLCO1B1; Gene polymorphism; Hyperlipemia; ARMS-PCR

1003-2754(2016)06-0533-03

2016-04-12；

2016-05-30

(1.寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，浙江 寧波 315000；2.寧波市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，浙江 寧波 315000)

張昀赟，E-mail：shadow830101@163.com

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