板藍(lán)根制劑制備過程中成分變化及其藥效相關(guān)性研究

曹　奎（廣西玉林北流市城南街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心北流537400）

·醫(yī)藥論壇·

板藍(lán)根制劑制備過程中成分變化及其藥效相關(guān)性研究

曹奎（廣西玉林北流市城南街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心北流537400）

目的：探討研究板藍(lán)根制劑制備過程中成分變化及其藥效相關(guān)性。方法：對板藍(lán)根制劑的制備過程進(jìn)行模擬，測定制備過程中各階段的成分質(zhì)量、中間體溶液抗氧化活性分析成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)-藥效活性數(shù)據(jù)的相關(guān)性。結(jié)果：在板藍(lán)根制劑制備過程中，藥物制劑的化學(xué)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)與抗氧化活性呈降低趨勢，尤其是在熱處理環(huán)節(jié)的損失較大，相關(guān)性分析顯示鳥苷、腺苷及靛玉紅這三者的質(zhì)量分?jǐn)?shù)與羥基自由基清除率呈正相關(guān)。結(jié)論：在板藍(lán)根制劑制備過程中，操作水平顯著影響其指標(biāo)組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)和藥效，尤其是濃縮干燥環(huán)節(jié)的影響最大，鳥苷、腺苷及靛玉紅是使藥物發(fā)揮抗氧化活性的重要成分。

板藍(lán)根 板藍(lán)根制劑 制備過程 成分變化 藥效 相關(guān)性

板藍(lán)根制劑的制備過程包括提取、濃縮、醇沉、干燥及制粒等多個環(huán)節(jié)，每個環(huán)節(jié)的操作都可能會影響最終藥效的發(fā)揮。為了研究板藍(lán)根制劑制備過程中成分變化及其藥效相關(guān)性，筆者對板藍(lán)根制劑的制備過程進(jìn)行了模擬，并進(jìn)行了實驗測定。

1　儀器與材料

本次實驗采用了安捷倫科技有限公司生產(chǎn)的Agilent 1260型高效液相色譜儀、德國賽多利斯集團(tuán)生產(chǎn)的電子分析天平、江蘇康健醫(yī)療用品有限公司生產(chǎn)的XH-B型漩渦混合器、鄄城華魯電熱儀器有限公司生產(chǎn)的電熱套、上海愛朗儀器有限公司生產(chǎn)的QSB-2000油浴鍋、昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)的KQ5200型超聲波清洗器、鄭州長城科工貿(mào)有限公司生產(chǎn)的SHB-III循環(huán)水式多用真空泵。對照品采用了鳥苷、尿苷、腺苷、告依春及靛玉紅各20mg，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98％；以及糊精、過氧化氫、水楊酸、七水合硫酸亞鐵、色譜乙腈、雙蒸餾水等。其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定

2.1.1樣品的制備：稱取板藍(lán)根25g，加入250mL水煎煮回流提取兩次，第一次2h、第二次1h，將兩次濾液合并，然后將所得提取液減壓濃縮至一定體積，加入乙醇直至含醇量60％，靜置一段時間后取上清液，將乙醇回收并濃縮至25mL，取10mL濃縮液繼續(xù)濃縮至恒定質(zhì)量，得到干膏樣品，以20mL甲醇進(jìn)行溶解，再取10mL濃縮至流浸膏狀態(tài)，加入糊精制成顆粒，得到提取液、濃縮液、干膏及顆粒4項樣品。各個環(huán)節(jié)所取的溶液均以微孔濾膜濾過，從而得到樣品溶液。

2.1.2對照品樣品的制備：稱取11.7mg尿苷、9.7mg鳥苷、13.5mg腺苷、12.0mg告依春、12.4mg靛玉紅，置于100mL瓶中，以雙蒸水超聲溶解核苷類成分，以甲醇溶解告依春和靛玉紅，定容搖勻，配制成0.117mg/mL尿苷、0.097mg/mL鳥苷、0.135mg/mL腺苷、0.120mg/mL告依春、0.124mg/mL靛玉紅，于4℃下保存?zhèn)溆谩?.1.3色譜條件：色譜柱為Gemini C18110A柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-水，體積流量為1mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為245nm，進(jìn)樣量為20μL。

2.1.4線性關(guān)系考察：取適量對照品樣品置于10mL瓶中進(jìn)行溶解稀釋，取其中1mL以微孔濾膜濾過，按照色譜條件分別進(jìn)樣，記錄質(zhì)量濃度（X）、峰面積積分值（Y），分析后得到各成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍，結(jié)果示尿苷在2.34～29.25μg/mL、鳥苷在1.91～24.25μg/mL、腺苷在2.7～33.75μg/mL、告依春在2.4～30.0μg/mL、靛玉紅在12.4～37.2μg/mL，線性關(guān)系良好。

2.1.5精密度試驗：精密吸取對照品樣品20μL，按照色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果示尿苷的峰面積RSD為1.56％、鳥苷為2.47％、腺苷為2.67％、告依春為1.24％、靛玉紅為2.63％，均＜3％，證明精密度良好。

2.1.6穩(wěn)定性試驗：精密吸取對照品樣品20μL，按照色譜條件進(jìn)樣，每隔4h測定一次，共監(jiān)測24h，結(jié)果示尿苷的峰面積RSD為1.30％、鳥苷為1.67％、腺苷為2.86％、告依春為0.44％、靛玉紅為1.80％，均＜3％，證明穩(wěn)定性良好。

2.1.7重復(fù)性試驗：精密吸取板藍(lán)根6份，制備樣品，按照色譜條件分別進(jìn)樣，結(jié)果示尿苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD為2.80％、鳥苷為0.80％、腺苷為2.63％、告依春為0.26％、靛玉紅為2.57％，均＜3％，證明重復(fù)性良好。

2.1.8回收率試驗：取已測定的板藍(lán)根樣品9份，分別根據(jù)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的100％加入適量對照品，按照色譜條件分別進(jìn)樣，結(jié)果示尿苷的回收率為98.94％、鳥苷為98.07％、腺苷為97.95％、告依春為98.25％、靛玉紅為92.42％，尿苷的RSD為1.12％、鳥苷為2.29％、腺苷為2.54％、告依春為1.55％、靛玉紅為2.68％，證明回收率良好。

2.1.9各成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定：取各樣品20μL，注入高效液相色譜儀，在色譜條件下測定各成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果示各成分的分離度良好。在制備過程中，各成分呈下降趨勢，每一環(huán)節(jié)的操作都可能會影響到指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)。其中尿苷的損失率為39.5％、鳥苷為57.8％、腺苷為47.7％、告依春為67.3％、靛玉紅為56.3％。濃縮環(huán)節(jié)損失最大，其次為干燥、制粒及醇沉。

2.2羥基自由基清除率測定：在96孔板中加入50μL 2.5mmol/L七水合硫酸亞鐵和50μL 2.5mmol/L水楊酸、50μL不同制備階段的提取液、5％過氧化氫，在37℃的水浴鍋中加熱0.5h，于536nm波長下測定吸光度（A0）；再以雙蒸水代替樣品，同樣測定吸光度（A1）。同時加入七水合硫酸亞鐵、水楊酸及不同制備階段的提取液各50μL，加入50μL蒸餾水，測定吸光度（A2）。結(jié)果示在不同制備階段的羥基自由基清除率呈下降趨勢，在濃縮、醇沉及干燥環(huán)節(jié)抗氧化活性顯著下降，羥基自由基清除率下降分別為31.47％、7.61％、2.79％。

2.3成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)-藥效活性數(shù)據(jù)的相關(guān)性：利用偏最小二乘法相關(guān)性分析譜效關(guān)系方程為：Y=-2.09407X1+2.11084X2+ 0.0853001X3-2.58097X4+3.52879X5，其中X代表特征峰峰面積，Y代表羥基自由基清除率，X1代表尿苷、X2代表鳥苷、X3代表腺苷、X4代表告伊春、X5代表靛玉紅?？梢婙B苷、腺苷及靛玉紅這三者的質(zhì)量分?jǐn)?shù)與羥基自由基清除率呈正相關(guān)。

3　討論

板藍(lán)根是菘藍(lán)的干燥根，它是一種中藥材，具有清熱解毒、涼血利咽、解熱鎮(zhèn)痛、活血化瘀之效。近年來，藥理學(xué)研究表明，板藍(lán)根的抗炎及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制主要與其中的生物堿成分和核苷類成分有關(guān)，這些物質(zhì)主要發(fā)揮著消炎抑菌、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤以及干擾病毒核酸合成的作用，具有很強(qiáng)的藥理活性。由于這些成分在板藍(lán)根中占有較高比例，可以作為衡量藥物質(zhì)量的指標(biāo)性成分[1]。

根據(jù)本文結(jié)果顯示：在板藍(lán)根制劑制備過程中，藥物制劑的化學(xué)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)與抗氧化活性呈降低趨勢，尤其是在熱處理環(huán)節(jié)的損失較大，相關(guān)性分析顯示鳥苷、腺苷及靛玉紅這三者的質(zhì)量分?jǐn)?shù)與羥基自由基清除率呈正相關(guān)?？梢缘贸鼋Y(jié)論：在板藍(lán)根制劑制備過程中，操作水平顯著影響著其指標(biāo)組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)和藥效，尤其是濃縮干燥環(huán)節(jié)的影響最大，鳥苷、腺苷及靛玉紅是使藥物發(fā)揮抗氧化活性的重要成分。

[1]林麗君，聶黎行，戴忠，等.板藍(lán)根的研究概況[J].中國藥業(yè)，2015，21∶1-4.

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1672-8351（2016）11-0119-02