NIH-Ⅲb型前列腺炎患者尿液前列腺小體外泄蛋白的測(cè)定及診斷評(píng)價(jià)

邵雪峰，李曉君，劉 鋒，蔣 挺

(蘇州大學(xué)附屬太倉(cāng)醫(yī)院暨太倉(cāng)市第一人民醫(yī)院泌尿外科，江蘇太倉(cāng) 215400)

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·臨床研究·

NIH-Ⅲb型前列腺炎患者尿液前列腺小體外泄蛋白的測(cè)定及診斷評(píng)價(jià)

邵雪峰，李曉君，劉 鋒，蔣 挺

(蘇州大學(xué)附屬太倉(cāng)醫(yī)院暨太倉(cāng)市第一人民醫(yī)院泌尿外科，江蘇太倉(cāng) 215400)

目的 通過檢測(cè)尿液前列腺小體外泄蛋白(PSEP)來評(píng)估其作為慢性前列腺炎診斷標(biāo)記物的臨床價(jià)值。方法 收集NIH-Ⅲb型前列腺炎患者107例和健康對(duì)照96例的尿液標(biāo)本，采用ELISA方法對(duì)收集的尿液樣本進(jìn)行PSEP的檢測(cè)。比較前列腺炎組與對(duì)照組之間尿液PSEP水平的差異。采用受試者工作特征(ROC)曲線計(jì)算靈敏度、特異度并計(jì)算最大約登指數(shù)，得出最佳診斷界值。結(jié)果 兩組尿液PSEP數(shù)據(jù)均呈非正態(tài)分布，前列腺炎組中位PSEP為1.133(0.371～3.580)ng/ mL，顯著高于對(duì)照組0.193(0～0.734)ng/ mL(P<0.01)。對(duì)PSEP檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行ROC曲線擬合，曲線下面積為0.755，診斷界值為1.237 ng/mL，敏感性為51.4%，特異性為88.5%。結(jié)論 尿液PSEP作為NIH-Ⅲb型前列腺炎的輔助診斷指標(biāo)，其診斷效能中等，但具有較高的可操作性和較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

前列腺小體外泄蛋白(PSEP)；慢性前列腺炎；診斷；ELISA

慢性前列腺炎( chronic prostatitis，CP) 是泌尿外科成年男性最常見的疾病之一。1998 年美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院將CP分為3 型：①NIH-Ⅱ型：慢性細(xì)菌性前列腺炎；②NIH-Ⅲ型：CP/慢性骨盆疼痛綜合征，此型根據(jù)前列腺按摩液、精液中白細(xì)胞計(jì)數(shù)又分為炎癥性(NIH-Ⅲa)和非炎癥性(NIH-Ⅲb)兩個(gè)亞型；③NIH-Ⅳ型：無癥狀炎癥性前列腺炎[1]。CP的病因及發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其發(fā)病是各種因素引起的感染、免疫、內(nèi)分泌、神經(jīng)、精神因素等相互作用所導(dǎo)致的炎癥過程[2]。NIH-Ⅱ型前列腺炎有明確致病因素。但NIH-Ⅲ型前列腺炎，尤其是Ⅲb型，診斷主觀性較強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)室檢查方法有限[3]。本研究中，我們檢測(cè)NIH-Ⅲb型患者尿液前列腺小體外泄蛋白(prostatic exosomal protein，PSEP)，并評(píng)估其作為診斷標(biāo)記物的臨床價(jià)值，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 參照中國(guó)泌尿外科疾病診斷治療指南(2014版)中CP臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，采用兩杯法，收集自2014年5月至2015年12月的江蘇省太倉(cāng)市第一人民醫(yī)院就診的NIH-Ⅲb型前列腺炎患者107例和健康對(duì)照96例的尿液標(biāo)本，年齡18～60歲，兩組年齡分布無顯著差異。

排除標(biāo)準(zhǔn)：前列腺癌患者；急性前列腺炎患者；二周內(nèi)置入導(dǎo)尿管者；48 h內(nèi)有性生活者；有嚴(yán)重的肛腸部位疾病，不適合行前列腺按摩檢測(cè)者。

1.2 樣本檢測(cè) CP患者留取按摩前中段尿暫存于-80 ℃冰箱，并常規(guī)行尿常規(guī)、EPS鏡檢及培養(yǎng)，根據(jù)EPS結(jié)果保留NIH-Ⅲb型患者中段尿標(biāo)本待檢。對(duì)照組留取中段尿標(biāo)本，此外行尿常規(guī)檢測(cè)。采用ELISA方法對(duì)收集的尿液樣本進(jìn)行PSEP檢測(cè)。 ELISA試劑盒購(gòu)自昂科生物醫(yī)學(xué)技術(shù)(蘇州)有限公司。

1.3 評(píng)估PSEP 數(shù)據(jù)采用中位數(shù)(四分位距)表示。比較前列腺炎組與對(duì)照組之間尿液PSEP水平的差異。ROC曲線計(jì)算靈敏度，特異度并計(jì)算最大約登指數(shù)，得出Cutoff值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)分析采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。前列腺炎癥患者與正常人的樣本差異比較采用秩和檢驗(yàn)。P<0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組數(shù)據(jù)比較 前列腺癌組與對(duì)照組中位年齡分別為30(25～38)歲及32(27～40)歲，年齡分布無顯著性差異(P>0.05)。兩組尿液PSEP數(shù)據(jù)均呈非正態(tài)分布。前列腺炎組中位PSEP為1.133(0.371～3.580)ng/mL，顯著高于對(duì)照組[0.193(0～0.734)ng/mL,P<0.01]。見表1。

表1 前列腺炎組與對(duì)照組年齡及PSEP的比較

項(xiàng)目前列腺炎組對(duì)照組P值例數(shù)10796年齡[M(范疇),歲]30(25～38)32(27～40)>0.05PSEP[M(范疇),ng/mL]1.133(0.371～3.580)0.193(0～0.734)<0.01*

*Mannwhitney U檢驗(yàn)。

2.2 ROC結(jié)果 對(duì)PSEP檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行受試者工作特征(receiver operating，ROC)曲線擬合，結(jié)果見圖1。ROC曲線下面積為0.755，選擇Youden指數(shù)最大的點(diǎn)對(duì)應(yīng)的界值作為NIH-Ⅲb型前列腺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)，得出Cutoff值為1.237 ng/ mL，對(duì)應(yīng)的診斷敏感性為51.4%，特異性為88.5%。

圖1 前列腺小體外泄蛋白的受試者工作特征曲線

3 討 論

前列腺炎臨床表現(xiàn)缺乏特異性，同時(shí)缺乏客觀準(zhǔn)確的診斷手段，臨床的診療效果一直不理想[4]。在CP診斷標(biāo)記物的研究方面，國(guó)內(nèi)外已取得一定進(jìn)展。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)在神經(jīng)功能中起著至關(guān)重要的作用，在神經(jīng)損傷和神經(jīng)性感染后，NGF都會(huì)迅速再生[5]。從UPOINT分型來看，神經(jīng)功能紊亂是CP的一個(gè)危險(xiǎn)因素。有相關(guān)報(bào)道表明，CP患者前列腺液中的NGF表達(dá)明顯增高[6]，且與患者的主觀癥狀呈正相關(guān)。自身免疫方面，前列腺組織在發(fā)生炎癥時(shí)會(huì)產(chǎn)生特異性抗原，這些抗原會(huì)通過生理屏障和前列腺管進(jìn)入血液中[7]。CP患者細(xì)胞因子水平中，白介素2(interleukin-2，IL-2 )、白介素10(interleukin-10,IL-10)及腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α)明顯升高[8]。NADLER[9]及國(guó)內(nèi)學(xué)者呂玉宏等[10]分別通過對(duì)患者前列腺液及血清中白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在前列腺液及血清中，患者的IL-1β水平均增高。呂玉宏等[10]進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)治療后患者血清中IL-1β表達(dá)下降。

然而上述這些標(biāo)記物都需要通過前列腺按摩采集患者前列腺液進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)際應(yīng)用于臨床診斷仍存在較大局限性：前列腺液臨床取材不便，相當(dāng)一部分患者無法取得前列腺液，同時(shí)前列腺按摩也存在一定痛苦。而尿液取材簡(jiǎn)便，在尿液中尋找到合適的前列腺炎診斷標(biāo)記物可很好地化解這一難題。

前列腺小體(prostasomes)是一種亞細(xì)胞的囊泡狀結(jié)構(gòu)，具有廣泛的生理功能，其直徑40～500 nm，由人類前列腺上皮細(xì)胞通過胞吐作用分泌[11]，然后進(jìn)入前列腺液及尿液[12]。前列腺小體的脂質(zhì)成分以鞘磷脂為主，并含有一定量的核酸成分，如mRNA、miRNA、DNA小片段等。前列腺小體包含的蛋白質(zhì)成分多達(dá)百余種：酶類(35%)，運(yùn)輸、結(jié)構(gòu)類蛋白(19%)，GTP結(jié)合蛋白(14%)，分子伴侶(6%)，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白(17%)以及注釋蛋白(9%)等[13]。前列腺增生、炎癥、腫瘤等病理情況下，前列腺小體的分泌量以及蛋白組學(xué)特征可能產(chǎn)生變化，其中一些蛋白成分已成為前列腺癌的潛在診斷標(biāo)記物[14]。研究顯示，在炎癥狀態(tài)下，前列腺小體外泄蛋白明顯升高，可達(dá)到診斷CP的目的[15]。

本研究中，NIH-Ⅲb型前列腺炎患者尿液中PSEP明顯高于對(duì)照組。ROC曲線分析結(jié)果顯示其曲線下面積為0.755，診斷效能中等。PSEP界值1.237 ng/mL所對(duì)應(yīng)的檢測(cè)敏感性為51.4%、特異性為88.5%。本研究中所納入的病例數(shù)還有所欠缺，相信通過大樣本的數(shù)據(jù)分析，可以得出PSEP的確切診斷界值以及敏感性和特異性。由于NIH-Ⅲb型前列腺炎癥狀不典型，盆腔疼痛綜合征病因廣泛，目前臨床診斷CP往往需要大量輔助檢查進(jìn)行鑒別診斷，且仍有較高的誤診率。因此在臨床應(yīng)用中可適當(dāng)提高PSEP診斷界值，來增加診斷特異性，這樣可能會(huì)對(duì)NIH-Ⅲb型前列腺炎的確診大有益處。

綜上所述，尿液前列腺小體外泄蛋白可以作為NIH-Ⅲb型前列腺炎的臨床輔助診斷指標(biāo)，具有可操作性和較好的臨床價(jià)值。前列腺小體外泄蛋白檢測(cè)方法的應(yīng)用，有可能彌補(bǔ)臨床上診斷NIH-Ⅲb型前列腺炎主觀性強(qiáng)、檢測(cè)方法有一定痛苦等不足，可能為NIH-IIIb型前列腺的診斷提供一種新穎的簡(jiǎn)便易行、非侵入性、無痛的分子檢測(cè)方法，具有較好的臨床應(yīng)用前景。

[1] 那彥群，葉章群，孫穎浩，等.中國(guó)泌尿外科疾病診斷治療指南(2014版) [M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2013:437-438.

[2] PONTARIMA，RUGGIERIMR. Mechanisms in prostatitis/chronic pelvic pain syndrome [J].J Urol，2004，172(3):839-845.

[3] LOTTIF，CORONAG，MONDAININ，et al.Seminal，clinical ancolour-Doppler ultrasound correlations of prostatitis-like symptoms in males of infertile couples[J]. Andrology，2014，2(1):30-41.

[4] MAGRIV，WAGENLEHEHNERFM，MARRASE，et al.Influence of infection on the distribution patterns of NIH-Chronic Prostatitis Symptom Index scores in patients with chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome[J]. ExpTher Med，2013，6(2):503-508.

[5] PEZETS, MCMAHONS B.Neurotrophins:mediators and modulators of pain[J]. Annu Rev Neurosci, 2006,29:507-538.

[6] WATANABE T, INOUEM, SASAKIK, et al. Nerve growth factor level in the prostatic fluid of patients with chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome is correlated with symptom severity and response to treatment[J]. BJU Int, 2011,108(2):248-251.

[7] 范華, 甘肖余. 慢性前列腺炎122例治療體會(huì)[J]. 廣西醫(yī)學(xué), 2005,33(3):416-417.

[8] HEL, WANGY, LONGZ, et al.Clinical significance of IL-2, IL-10, and TNF-alpha in prostatic secretion of patients with chronic prostatitis[J]. Urology, 2010,75(3):654-657.

[9] NADLERR B, KOCHA E, CALHOUNE A, et al. IL-1beta and TNF-alpha in prostatic secretions are indicators in the evaluation of men with chronic prostatitis[J]. J Urol, 2000,164(1):214-218.

[10] 呂玉宏, 張?jiān)俑? 李家承. 慢性前列腺炎患者治療前后血清IL-8、IL-1β和TNF-α檢測(cè)的臨床意義[J]. 放射免疫學(xué)雜志, 2009(06):593-594.

[11] NICKELJC.Recommendations for the evaluation of patients with prostatis[J].World J Urol， 2003， 21(2):75-81.

[12] AALBERTSM, STOUTT A, STOORVOGELW.Prostasomes:Extracellular vesicles from the prostate.[J]. Reproduction, 2013, 147(1):R1-R14.

[13] RONQUISTG. Prostasomes are mediators of intercellular communication :from basic research to clinical implications[J]. J Intern Med, 2012, 271(4):400-413.

[14] BJARTELLA, MONTIRONIR, BERNEYDM, et al.Tumour markers in prostate cancer II:diagnostic and prognostic cellular biomarkers[J]. Acta Oncologica，2011;50 (Suppl 1) 76-84.

[15] 曾燕, 張嬌, 陳艷華,等. 前列腺小體外泌蛋白ELISA檢測(cè)方法的建立和初步評(píng)價(jià)[J]. 實(shí)用醫(yī)藥雜志, 2015, 32(10):885-888.

(編輯 何宏靈)

Detection and diagnostic evaluation of urine prostatic exosomal protein in patients with NIH-Ⅲb prostatitis

SHAO Xue-feng, LI Xiao-jun, LIU Feng, JIANG Ting

(Department of Urology, Taicang Hospital Affiliated to Suzhou University & the First People’s Hospital of Taicang, Taicang 215400, China)

Objective Urine prostatic exosomal protein (PSEP) was detected to evaluate its clinical potential as a diagnostic marker of chronic prostatitis (CP). Methods A total of 107 cases of NIH-IIIb prostatitis and 96 healthy controls were enrolled. Urine samples were collected for ELISA testing. PSEP levels were compared between the two groups. A ROC curve was drawn to calculate the sensitivity, specificity and optimum Youden index, so as to figure out the cut-off value of PSEP. Results The median PSEP of the prostatitis group was 1.133(0.371—3.580) ng/mL, which was higher than that of the control group[0.193 (0—0.734)ng/mL,P<0.01]. The area under the ROC curve was 0.755. The diagnostic cutoff value was 1.237 ng/mL, the sensitivity was 51.4%, and the specificity was 88.5%.Conclusion Urine PSEP as a diagnostic marker of NIH- IIIb prostatitis, shows a medium ability in the diagnosis of CP, but it has good operability and clinical value.

prostatic exosomal protein(PSEP); chronic prostatitis; diagnosis; enzyme linked immunosorbent assay

2016-06-21

2016-08-31

蔣挺，副主任醫(yī)師.E-mail:tcyyurology@163.com

邵雪峰(1970-)，男(漢族)，主任醫(yī)師，碩士.研究方向：前列腺疾病、泌尿系腫瘤.E-mail：sxfsxf703@163.com

R697.33

A

10.3969/j.issn.1009-8291.2016.11.011