基于響應(yīng)面法降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑配方的優(yōu)化

門文卉，陳 晗，林連兵，鄧先余

(昆明理工大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650500)

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基于響應(yīng)面法降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑配方的優(yōu)化

門文卉，陳 晗，林連兵，鄧先余

(昆明理工大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650500)

【目的】 對澤瀉、決明子、絞股藍(lán)等3種中草藥超微粉用量進(jìn)行優(yōu)化組合，探索降低雞蛋膽固醇的中草藥復(fù)方添加劑最佳配方?！痉椒ā?選取澤瀉、決明子、絞股藍(lán)超微粉用量3因素為自變量，以蛋黃膽固醇濃度為響應(yīng)值，采用響應(yīng)面法中Box-Behnken模型，共設(shè)計(jì)17種中草藥復(fù)方添加劑配方，選取190日齡綠殼蛋雞255羽，隨機(jī)均分成17組，分別飼喂添加了17種中草藥復(fù)方添加劑配方的基礎(chǔ)日糧，測定飼喂第28天各組雞蛋蛋黃膽固醇濃度，確定中草藥復(fù)方添加劑最優(yōu)配方。另取190日齡綠殼蛋蛋雞30羽，平均分成2組，空白組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組飼喂基礎(chǔ)日糧+最優(yōu)配方中草藥添加劑，飼喂28 d后測定蛋雞生產(chǎn)性能、雞蛋品質(zhì)、蛋黃膽固醇和甘油三酯濃度、血清生化指標(biāo)、免疫指數(shù)等，評估最優(yōu)中草藥復(fù)方添加劑配方的飼喂效果。【結(jié)果】 響應(yīng)面優(yōu)化得到的降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑的最佳配比為：澤瀉超微粉用量695.49 mg/只，決明子超微粉用量893.14 mg/只，絞股藍(lán)超微粉用量334.13 mg/只，該條件下飼喂28 d后測定的雞蛋膽固醇濃度為2.48 mmol/L。飼喂效果驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，與空白組相比，試驗(yàn)組的料蛋比降低了33.64%，產(chǎn)蛋率提高了11.73%，差異均達(dá)顯著水平(P<0.05)；蛋黃膽固醇和甘油三酯濃度分別降低了69.90%和41.78% (P<0.05)，血清膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇濃度分別下降了52.90%，55.23%和51.85%，并顯著提高了蛋雞的免疫能力(P<0.05)。【結(jié)論】 響應(yīng)面法能夠用于中草藥復(fù)方添加劑配方優(yōu)化；用得到的中草藥復(fù)方添加劑最優(yōu)配方飼喂蛋雞，能顯著降低雞蛋膽固醇濃度，可在實(shí)際生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。

雞蛋；膽固醇；中草藥復(fù)方添加劑；配方優(yōu)化；響應(yīng)面法

隨著生活水平的不斷提高，人們越來越重視飲食結(jié)構(gòu)均衡和食品的安全。雞蛋營養(yǎng)均衡，價(jià)格便宜，深受人們喜愛，蛋黃粉、全蛋粉等產(chǎn)品銷量也逐年增加，但其膽固醇濃度較高，長期大量食用對人類健康可能造成一定威脅。從機(jī)體外攝入大量膽固醇會導(dǎo)致血液中的膽固醇升高，可能誘發(fā)腦血栓、冠狀動脈硬化等心血管疾病。為避免人體從雞蛋中攝取過多的膽固醇并提高雞蛋營養(yǎng)價(jià)值，開展降低雞蛋膽固醇的研究十分必要。近年來有研究在飼料中加入他汀類化學(xué)合成藥物[1]、益生素[2]、微量元素[3]等添加物，或是用生物工程[4]的方法來降低雞蛋膽固醇，但這些方法存在有化學(xué)殘留、效果不顯著或是實(shí)施難度大、短期難以達(dá)到效果等缺點(diǎn)，中草藥資源豐富，毒副作用小，殘留性小，選擇不同的中草藥添加劑并合理配比可能效果更好。

澤瀉為多年沼生澤瀉科植物澤瀉的干燥塊莖，現(xiàn)已分離出三萜、二萜、倍半萜等成分，研究表明澤瀉及其復(fù)方在治療高脂血癥、脂肪肝和免疫復(fù)合物型[5]常見病等有良好的臨床效果，但是澤瀉作為中草藥添加劑應(yīng)用在綠殼蛋雞上尚未見到報(bào)道。決明子為豆科植物決明的干燥成熟種子，含有蒽醌類、脂肪酸類、吡咯酮類等成分，有明確報(bào)道其具有降血脂、降血壓等作用[6]，在飼料添加劑中多起到增強(qiáng)免疫的作用。絞股藍(lán)屬草質(zhì)攀援植物，含有絞股藍(lán)皂苷、黃酮等成分，有著“南方人參”的美譽(yù)，近年來一直是國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)，其抗腫瘤、抗血栓、降血糖、增強(qiáng)免疫力、保肝等作用十分顯著[7]。

中草藥多靶點(diǎn)的作用機(jī)制使其在動物飼料的應(yīng)用上可以得到良好的預(yù)期效果，但是由于藥物成分不清楚，多用經(jīng)驗(yàn)性結(jié)果進(jìn)行飼料添加，使其療效重復(fù)性差，推廣難度大。本研究將上述3種中草藥復(fù)合配比，采用響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)制成中草藥復(fù)方添加劑，確定其降低雞蛋膽固醇最佳復(fù)合配方和飼用效果，以期為中草藥在低膽固醇雞蛋生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器

澤瀉超微粉、決明子超微粉、絞股藍(lán)超微粉，由四川同泰植物化工有限公司提供，超微粉過48 μm(300目)篩后備用；羅氏比色扇、分析天平，上海光正醫(yī)療儀器有限公司產(chǎn)品；游標(biāo)卡尺，上海匯一尺業(yè)有限公司；總膽固醇(CHO酶法)測試盒、甘油三酯試劑盒(酶法)、高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒，均購買于南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗(yàn)動物

選擇190日齡體質(zhì)量和產(chǎn)蛋率相近的健康綠殼蛋雞。

1.3 飼養(yǎng)管理及基礎(chǔ)日糧組成

蛋雞養(yǎng)殖試驗(yàn)在綠色循環(huán)農(nóng)業(yè)實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行。采用三層立體籠飼養(yǎng)，每日喂干粉料2次，每次每羽雞飼喂50 g，自由采食和飲水，保持良好的通風(fēng)及適宜的溫度和濕度。按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行防疫和雞舍消毒?；A(chǔ)日糧參照《中華人民共和國專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》NY/T 33-2004，結(jié)合綠殼蛋雞生長情況，自行設(shè)計(jì)日糧配方如表1所示。

表 1 綠殼蛋雞日糧組成及營養(yǎng)水平

注：每千克(kg)飼料添加維生素A 9 000 IU，維生素D 2 500 IU，維生素E 20 IU，維生素B 1 212 μg，維生素K 2.4 mg，Mn 100 mg，Zn 60 mg，F(xiàn)e 25 mg，Cu 5 mg，Co 0.1 mg。

Note:Per kg of feed provides vitamin A 9 000 IU,vitamin D 2 500 IU,vitamin E 20 IU,vitamin B 1 212 μg,and vitamin K 2.4 mg，Mn 100 mg,Zn 60 mg,Fe 25 mg,Cu 5 mg,and Co 0.1 mg.

1.4 降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑配方優(yōu)化的響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及方法

采用響應(yīng)面分析法(Response Surface Methodology，RSM)尋求最優(yōu)參數(shù)。在前期試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取澤瀉超微粉用量(100～1 000 mg/只)、決明子超微粉用量(150～1 500 mg/只)、絞股藍(lán)超微粉用量(60～600 mg/只)3個(gè)因素為自變量，以雞蛋蛋黃膽固醇濃度作為響應(yīng)值，表觀中草藥復(fù)方添加劑降低雞蛋膽固醇的效果。根據(jù)響應(yīng)面法中的Box-Behnken模型，運(yùn)用Design Expert 8.0設(shè)計(jì)3因素3水平的響應(yīng)面試驗(yàn)，試驗(yàn)因素與水平見表2，共設(shè)計(jì)17組試驗(yàn)，各試驗(yàn)組基礎(chǔ)日糧中中草藥的用量見表3。

表 2 降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑配方優(yōu)化的響應(yīng)面試驗(yàn)的因素與水平

表 3 各試驗(yàn)組基礎(chǔ)日糧中中草藥的用量

將255羽蛋雞隨機(jī)均分為17組，每組15羽。預(yù)飼期14 d，各組統(tǒng)一飼喂基礎(chǔ)日糧，預(yù)飼期結(jié)束時(shí)統(tǒng)計(jì)各組蛋雞所產(chǎn)雞蛋的雞蛋膽固醇濃度，經(jīng)分析無顯著差異開始進(jìn)行正式試驗(yàn)，正式試驗(yàn)期為28 d，試驗(yàn)結(jié)束后，測定蛋黃膽固醇濃度。每組蛋雞除飼喂基礎(chǔ)日糧外，按照響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)添加相應(yīng)的中草藥。

1.5 降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑最優(yōu)配方的驗(yàn)證試驗(yàn)

另選取190日齡體質(zhì)量和產(chǎn)蛋率相近的健康綠殼蛋雞30羽，隨機(jī)均分為試驗(yàn)組和空白組，試驗(yàn)組基礎(chǔ)日糧中添加按最優(yōu)配方配制的降低膽固醇中草藥復(fù)方添加劑，空白組只飼喂基礎(chǔ)日糧，飼喂方法和管理均同1.3。預(yù)飼期2周；結(jié)束后進(jìn)行4周正式試驗(yàn)，收集第28天雞蛋，進(jìn)行蛋黃膽固醇濃度測定。將所建立模型的雞蛋膽固醇濃度預(yù)測值與驗(yàn)證試驗(yàn)的蛋黃膽固醇濃度結(jié)果相對比，進(jìn)行模型驗(yàn)證。

1.6 降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑最優(yōu)配方應(yīng)用效果評估

1.6.1 蛋雞生產(chǎn)性能檢測 驗(yàn)證試驗(yàn)期間每日以組為單位記錄產(chǎn)蛋數(shù)和蛋質(zhì)量，每7 d稱1次余料質(zhì)量，統(tǒng)計(jì)日均產(chǎn)蛋率、日均采食量和料蛋比等指標(biāo)。

日均產(chǎn)蛋率=總蛋數(shù)/(天數(shù)×雞數(shù)量)×100%；

日均采食量=(每周飼喂質(zhì)量-每周余料質(zhì)量)/(天數(shù)×雞數(shù)量)；

料蛋比=總采食質(zhì)量/總蛋質(zhì)量。

1.6.2 雞蛋品質(zhì)檢測 驗(yàn)證試驗(yàn)第28天，隨機(jī)選取試驗(yàn)組和空白組雞蛋各5枚，用分析天平測定蛋質(zhì)量、蛋黃質(zhì)量、蛋殼質(zhì)量，用游標(biāo)卡尺測定蛋形指數(shù)、哈氏單位、蛋殼厚度，用羅氏比色扇測定蛋黃顏色。計(jì)算蛋黃相對質(zhì)量、蛋殼相對質(zhì)量。

蛋黃相對質(zhì)量=蛋黃質(zhì)量/蛋質(zhì)量×100%，

蛋殼相對質(zhì)量=蛋殼質(zhì)量/蛋質(zhì)量×100%。

1.6.3 免疫指數(shù)的測定 待驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)束后，供試雞禁水禁食24 h，每組隨機(jī)抽取3羽雞屠宰，摘取雞胸腺、脾臟和法氏囊，濾紙吸取表面血液，并剝離表面脂肪和結(jié)締組織，最后稱質(zhì)量。按下式計(jì)算免疫器官指數(shù)：

免疫器官指數(shù)=免疫器官質(zhì)量/活體質(zhì)量。

1.6.4 蛋黃膽固醇、甘油三酯濃度的檢測 驗(yàn)證試驗(yàn)第28天，隨機(jī)選取試驗(yàn)組和空白組雞蛋各5枚，分離蛋黃后攪勻，稱取1.00 g蛋黃液，用0.9%生理鹽水溶解，20 mL容量瓶定容待測。利用各試劑盒測定蛋黃中膽固醇、甘油三酯的濃度。

1.6.5 血清生化指標(biāo)檢測 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)束后，供試雞禁水禁食24 h，每組抽取5羽雞翅靜脈采血3～5 mL，4 ℃靜置12 h，4 000 r/min離心10 min，抽取上清液待測。利用各試劑盒測定血清中的膽固醇和甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-CH)和低密度脂蛋白膽固醇(LDH-CH)濃度。根據(jù)Friedewald公式，即極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-CH)濃度=甘油三脂濃度/F(其中F=2.2)，計(jì)算極低密度脂蛋白膽固醇濃度。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Spss 19.0軟件中的ONE-WAY ANOVA進(jìn)行方差分析，采用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P<0.05作為差異顯著性的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑配方模型的建立及顯著性檢驗(yàn)

以澤瀉、決明子、絞股藍(lán)超微粉用量為因素的3因素3水平響應(yīng)面法優(yōu)化試驗(yàn)的結(jié)果見表4。利用Design Expert 8.0 軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，得到雞蛋膽固醇(Y)對澤瀉超微粉用量(A)、決明子超微粉用量(B)、絞股藍(lán)超微粉用量(C)的回歸方程為：Y=2.52-0.45A-0.20B-0.14C+0.095AB-0.017AC+0.17BC+0.88A2+0.80B2+1.2C2，用該回歸方程預(yù)測的蛋黃膽固醇濃度見表4。

回歸方程中各變量對響應(yīng)值影響的顯著性用F檢驗(yàn)判定，概率P值越小，則顯著性程度越高，P<0.01為極顯著，P<0.05為顯著。對該模型進(jìn)行方差分析和擬合度檢驗(yàn)，結(jié)果見表5。由表5可知，模型的F值為99.05，P<0.001，說明該模型方程極為顯著，模型不失擬(P=0.53>0.05)，這說明該方程在被研究的回歸區(qū)域擬合較好；對回歸模型的顯著性分析可知因素C的P值為0.023，小于0.05，對降低膽固醇效果影響顯著；因素A、B的P值分別為<0.000,0.004，小于0.01，對結(jié)果影響極顯著；BC的P值為0.037，表明因素B和C交互性影響顯著，而其他因素兩兩交互效應(yīng)不顯著。A2、B2、C2的P值均小于0.001，影響均達(dá)極顯著水平。模型決定系數(shù)為0.99，校正決定系數(shù)為0.98；模型的變異系數(shù)較低，為3.41，說明該模型相關(guān)性較好，試驗(yàn)誤差小，可以用此模型對中草藥復(fù)方添加劑配比進(jìn)行分析和預(yù)測。

表 4 降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑配方優(yōu)化的響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

表 5 降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑配方優(yōu)化的響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果方差分析

2.2 配方中3種中草藥超微粉用量及其交互作用對雞蛋膽固醇濃度的影響

圖1顯示，雞蛋膽固醇濃度隨決明子超微粉用量(B)、澤瀉超微粉用量(A)、絞股藍(lán)超微粉用量(C)的增加而下降，到達(dá)中心值后隨之上升。等高線形狀可以反映各因素交互作用強(qiáng)弱[8]。由圖1還可知，決明子超微粉(B)與絞股藍(lán)超微粉(C)用量2因素等高線為橢圓形，交互作用明顯明顯，當(dāng)決明子超微粉用量為825 mg/只、絞股藍(lán)超微粉用量為330 mg/只時(shí)，雞蛋的膽固醇濃度最低；A與B兩因素、A與C兩因素等高線呈近似圓形，交互作用不明顯。

2.3 降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑最優(yōu)配方的驗(yàn)證

響應(yīng)面優(yōu)化分析結(jié)果表明，降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑的最佳配方為澤瀉超微粉用量695.49 mg/只，決明子超微粉用量為893.14 mg/只，絞股藍(lán)超微粉用量為334.13 mg/只，預(yù)測雞蛋膽固醇濃度為2.46 mmol/L。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，用上述配方飼喂蛋雞28 d后，檢測雞蛋膽固醇濃度為2.48 mmol/L，與預(yù)測值2.46 mmol/L十分接近，表明所建立模型可以較好地預(yù)測降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑各成分的用量。

A.澤瀉超微粉用量Superfine comminution of Alisma orientale;B.決明子超微粉用量Superfine comminution ofSemen cassia;C.絞股藍(lán)超微粉用量Superfine comminution of Gynostemma pentaphyllum

圖 1 配方中3種中草藥超微粉用量及其交互作用對雞蛋膽固醇濃度影響的響應(yīng)面和等高線圖

Fig.1 Response surfaces and contour plots of additive formulation of three herbs and their interactions on egg cholesterol concentration

2.4 降低雞蛋膽固醇中草藥復(fù)方添加劑最優(yōu)配方的應(yīng)用效果評估

2.4.1 蛋雞生產(chǎn)性能 由表6可以看出，與空白組相比，試驗(yàn)組產(chǎn)蛋率由53.43%提高到65.16%，提高了11.73%，日均采食量由77.57 g增加到89.45 g，增加了13.28%；料蛋比由2.86下降到2.14，下降了33.64%，以上3個(gè)指標(biāo)在2個(gè)處理組間差異均顯著(P<0.05)。

表 6 中草藥復(fù)方添加劑對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，標(biāo)相同或不標(biāo)字母表示差異不顯著 (P>0.05)。表8和表9同。

Note:Different lowercase letters in the same column indicate significant difference (P<0.05),same or no letters indicate insignificant difference (P>0.05).Table 8 and 9 are same below.

2.4.2 雞蛋品質(zhì) 由表7可知，與空白組對比，試驗(yàn)組蛋質(zhì)量、蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼相對質(zhì)量差異不顯著(P>0.05)，蛋黃顏色、蛋黃相對質(zhì)量均明顯提高，且差異達(dá)顯著水平(P<0.05)。

表 7 中草藥復(fù)方添加劑對雞蛋品質(zhì)的影響

注：同行數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，標(biāo)相同或不標(biāo)字母表示差異不顯著(P>0.05)。

Note:Different lowercase letters in the sameline indicate significant difference (P<0.05),same or no letters indicate insignificant difference (P>0.05).

2.4.3 免疫指數(shù) 免疫器官指數(shù)是利用免疫器官質(zhì)量與活體質(zhì)量比值反映中草藥復(fù)方添加劑對蛋雞免疫能力的作用效果。由表8可知，中草藥復(fù)方添加劑使蛋雞的各種免疫器官指數(shù)均有所增加。試驗(yàn)組雞胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)分別為3.16，2.79和1.99，較空白組分別提高了0.23，0.67和0.23，且差異顯著(P<0.05)。

表 8 中草藥復(fù)方添加劑對蛋雞免疫器官指數(shù)的影響

2.4.4 蛋黃膽固醇和甘油三酯濃度 測定結(jié)果表明，與空白組相比，試驗(yàn)組蛋黃膽固醇濃度由8.24 mmol/L下降到2.48 mmol/L，下降了5.76 mmol/L；甘油三酯濃度由14.29 mmol/L下降到 8.32 mmol/L，下降了5.97 mmol/L。2個(gè)處理組之間2個(gè)指標(biāo)均具有顯著性差異(P<0.05)。

2.4.5 血清生化指標(biāo) 中草藥復(fù)方添加劑對蛋雞血清生化指標(biāo)的影響見表9。

表 9 中草藥復(fù)方添加劑對蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

由表9可知，與空白組相比，試驗(yàn)組血清膽固醇濃度下降52.90%，甘油三酯濃度下降55.23%,低密度脂蛋白膽固醇濃度下降51.85%,極低密度脂蛋白膽固醇濃度下降32.62%，高密度脂蛋白膽固醇濃度上升75.6%，二者的5項(xiàng)血清生化指標(biāo)均具有顯著性差異(P<0.05)。

3 討 論

中草藥可以通過改變飼料成分能改善雞群的生產(chǎn)性能[9]。王海波等[10]報(bào)道，以黃芪、麥芽、決明子、雞矢藤等4味中藥組成的1%復(fù)方添加劑，能提高仔雞的平均日增重(提高2.7%)，耗料增重比下降11.2%。周貞兵等[7]研究表明，絞股藍(lán)作為添加劑飼喂金陵花雞，與對照組相比飼料利用率提高35.1%，日增重提高49%，差異達(dá)極顯著水平。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，添加了中草藥的試驗(yàn)組的產(chǎn)蛋率和日均采食量均顯著增加，可能是因?yàn)橹胁菟幪赜械那逑隳艽龠M(jìn)雞群的進(jìn)食，加快消化并提高采食量。

胸腺為細(xì)胞免疫器官，脾臟為外周免疫器官，法氏囊是體液免疫器官。免疫器官指數(shù)能直觀反映蛋雞的免疫水平。中草藥能在一定程度上提高機(jī)體免疫水平，Jiang等[11]報(bào)道，貫葉連翹提取物可以提高小雞體內(nèi)抗體水平而調(diào)節(jié)免疫，達(dá)到治療禽流感的目的。Hueza等[12]報(bào)道，在肉雞日糧中加入0.75%的決明子，飼喂42 d發(fā)現(xiàn)其可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的活性，增加雞體內(nèi)的過氧化氫含量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與空白組相比，試驗(yàn)組蛋雞胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均顯著提高。蛋雞約2月齡時(shí)法氏囊最發(fā)達(dá)，以后隨著性器官日漸成熟而逐步萎縮，大量試驗(yàn)顯示[12-15]，雞體內(nèi)的免疫細(xì)胞B細(xì)胞主要來源于法氏囊。本研究中，中草藥復(fù)方添加劑能提高蛋雞免疫能力的原因，可能是因?yàn)槠淠艽龠M(jìn)蛋雞免疫器官良好生長發(fā)育，并且延緩了免疫器官的萎縮，可以直接加強(qiáng)機(jī)體的體液免疫功能和器官免疫功能。

高密度脂蛋白膽固醇為血清蛋白之一，可輸出膽固醇促進(jìn)膽固醇的代謝，所以現(xiàn)在作為動脈硬化預(yù)防因子而受到重視。高密度脂蛋白膽固醇運(yùn)載周圍組織中的膽固醇，再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出。所以高密度脂蛋白膽固醇是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護(hù)因子，俗稱“血管清道夫”。低密度脂蛋白膽固醇是一種運(yùn)載膽固醇進(jìn)入外周組織細(xì)胞的脂蛋白顆粒，可被氧化成低密度脂蛋白，當(dāng)?shù)兔芏戎鞍啄懝檀迹绕涫茄趸揎椀牡兔芏戎鞍诐舛雀邥r(shí)，它攜帶的膽固醇積存在動脈壁上，時(shí)間長久易引起動脈硬化。因此低密度脂蛋白膽固醇被稱為“壞膽固醇”。本試驗(yàn)中，配制的中草藥復(fù)方添加劑能顯著降低蛋黃和血清中的膽固醇和甘油三酯濃度，可顯著降低血清低密度脂蛋白膽固醇濃度，并升高高密度脂蛋白膽固醇濃度。中醫(yī)臨床辯證一般認(rèn)為，高脂血癥主要是氣滯血瘀、肝腎虧虛、脾虛痰濕等證引起[16]，在治療時(shí)應(yīng)辨證施治，多用補(bǔ)益肝腎、健脾化濕、活血化瘀、清熱通便、消食化痰類藥物。本研究中，中草藥復(fù)方添加劑中用到的澤瀉具有利水、清濕熱和泄熱等功效，可用于治療小便不利、水腫脹滿、泄瀉尿少、痰飲眩暈、熱淋澀痛以及高血脂癥等病癥；決明子入腎經(jīng)和肝經(jīng)，有消積通便、清肝益腎、逐痰化濁降脂功效[17]；絞股藍(lán)歸肝脾，具有健脾祛痰、利濕化瘀、降濁功效[18]。從中藥臨床辯證關(guān)系和藥代學(xué)角度上考慮，本研究所選用的中草藥均可到良好的結(jié)果，與預(yù)期效果相吻合。

張文濤[19]指出，澤瀉可以減輕肝臟脂質(zhì)蓄積，具有減小脂肪空泡，減輕細(xì)胞炎癥浸潤的作用。盧錕剛等[20]將決明子、丹參、絞股藍(lán)配伍使用，能顯著降低高脂血癥小鼠血中的膽固醇和甘油三酯濃度，升高血清中高密度脂蛋白膽固醇濃度。Qi等[21]報(bào)道，將山楂和決明子提取物配伍飼喂小鼠，能顯著降低小鼠的腎臟指數(shù)、肝臟指數(shù)和血清低密度脂蛋白膽固醇濃度，極顯著提高血清高密度脂蛋白膽固醇濃度。本研究中，中草藥復(fù)方添加劑降低膽固醇的作用效果與上述文獻(xiàn)報(bào)道一致，很好地達(dá)到了預(yù)期目標(biāo)?，F(xiàn)代臨床藥理研究表明，澤瀉的主要成分為三萜類化合物，能抑制外源性膽固醇和甘油三酯的吸收，影響內(nèi)源性膽固醇代謝，加速三酰甘油的水解或影響肝臟對其的合成，同時(shí)升高高密度脂蛋白膽固醇濃度，清運(yùn)動脈壁的膽固醇，促進(jìn)肝臟脂質(zhì)的代謝和排泄[22]。決明子中主要成分為蒽醌類化合物，具有降血脂的作用，有研究指出其可以減少膽固醇的吸收，促進(jìn)脂類轉(zhuǎn)運(yùn)和排泄，并可以降低膽固醇合成酶的活性或減少乙酰輔酶A的生成[6]。絞股藍(lán)主要成分為絞股藍(lán)皂苷，具有抗腫瘤、降血脂、延長細(xì)胞壽命的作用[23]。3種中草藥的配合使用能達(dá)到降低血清脂質(zhì)水平的預(yù)期效果。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)利用響應(yīng)面法對用于降低雞蛋膽固醇濃度的中草藥復(fù)方添加劑配方進(jìn)行了優(yōu)化，得到：中草藥復(fù)方添加劑的最佳配方為：澤瀉、決明子、絞股藍(lán)超微粉用量分別為695.49，893.14，334.13 mg/只，預(yù)測雞蛋膽固醇濃度為2.46 mmol/L。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，在該條件下飼喂蛋雞28 d驗(yàn)證結(jié)果和預(yù)測值吻合較好，說明優(yōu)化效果顯著，進(jìn)一步證明本研究建立的回歸模型有效可靠。應(yīng)用效果的評估結(jié)果顯示，與不使用中草藥添加劑的空白組相比，添加中草藥復(fù)方添加劑可以顯著提高蛋雞的生產(chǎn)性能，降低蛋黃、血清膽固醇和甘油三酯濃度，降低血脂濃度，增強(qiáng)蛋雞免疫能力。

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Optimization of recipe for compound Chinese herb additives to reduce cholesterol content in egg by response surface methodology

MEN Wenhui,CHEN Han,LIN Lianbin,DENG Xianyu

(College of Life Science and Technology,Kunming University of Science and Technology,Kunming,Yunnan 650500,China)

【Objective】 This study aimed to optimize the contents of superfine comminution ofAlismaorientale,SemencassiaandGynostemmapentaphyllumin compound Chinese herb additives to reduce the content of cholesterol in egg.【Method】 Using contents ofAlismaorientale,SemencassiaandGynostemmapentaphyllumpowder as independent variables and egg yolk cholesterol concentration as response variable,Box-Behnken model of response surface method was used with 17 compound additive formulas for Chinese herbal medicine.A total of 255 190-day old green-shell chicken were chosen and divided into 17 groups.The optimal recipe of Chinese herbal additives was determined by detecting the content of cholesterol in the egg after 28 days.Another 30 chicken were divided randomly into two groups,the blank group was only fed with based diet,and the experimental group were fed with basal diet and optimal recipe of Chinese herbal additives.After 28 days,the performance,egg quality,egg yolk cholesterol levels,serum biochemical parameters,and immune index were measured to assess the effect of Chinese herb additives.【Result】 The best Chinese herb additives composition ofAlismaorientale,SemencassiaandGynostemmapentaphyllumwere 695.49 mg,893.14 mg,and 334.13 mg per chicken,respectively.The egg cholesterol concentration was 2.48 mmol/L under these composition conditions after 28 days.Compared with control group,the feed-egg ratio was dropped by 33.64% (P<0.05),the egg-laying rate was increased by 11.73% (P<0.05),and the egg yolk cholesterol and triglyceride levels were dropped by 69.90% and 41.78% (P<0.05),respectively.The immune index was significantly increased (P<0.05).Serum cholesterol,triglycerides,and low-density lipoprotein-cholesterol concentrations were decreased by 52.90%,55.23%,and 51.85%.【Conclusion】 Response surface methodology could be adopted for the optimization of Chinese herb additive formulation,and the obtained formulation lowered cholesterol eggs significantly and suitable for application.

egg;cholesterol content;Chinese herb additives;formulation optimization;response surface methodology

時(shí)間:2016-10-20 16:36

10.13207/j.cnki.jnwafu.2016.12.006

2015-07-17

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(20110024)；云南省科技創(chuàng)新強(qiáng)省計(jì)劃項(xiàng)目(2014AB015)

門文卉(1990-),女,安徽馬鞍山人,在讀碩士，主要從事中草藥及微生物在綠色循環(huán)農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用研究。 E-mail：502340804@qq.com

鄧先余(1972-),男,湖南懷化人,副教授，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事綠色循環(huán)農(nóng)業(yè)研究。 E-mail：dengxy1008@126.com

S831.5

A

1671-9387(2016)12-0035-10

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