“募絡配穴”針刺干預對急性缺氧應激損傷的保護作用*

李永平，曹志東，張 瑩，王文娟，灑玉萍，武 娟

(青海大學，青海 西寧 810000)

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“募絡配穴”針刺干預對急性缺氧應激損傷的保護作用*

李永平，曹志東，張 瑩，王文娟，灑玉萍，武 娟

(青海大學，青海 西寧 810000)

目的 探討手厥陰心包經(jīng)“募絡配穴”針刺干預對急性缺氧應激損傷的影響及其作用機制。方法 采用常壓密閉缺氧和高原低壓缺氧實驗動物模型，觀察穴位針刺干預對常壓密閉缺氧實驗小鼠存活時間；檢測高原低壓缺氧實驗大鼠血清LD、MDA含量和LDH、SOD 活性，并觀察對模型大鼠心臟組織顯微結構的影響。結果 針刺干預膻中、內關有明顯的抗缺氧作用，與對照組比較，可顯著延長常壓缺氧小鼠的存活時間，降低大鼠血清LD、MDA含量、LDH活性，升高SOD活性，改善心肌組織結構。結論 針刺膻中、內關，具有提高實驗動物缺氧耐受的作用， 能預防高原缺氧對機體的損傷，可能與血清SOD活性提高、膜脂質過氧化產(chǎn)物MDA含量降低、機體乳酸積累減少有關。為“募絡配穴”治療缺氧相關疾病提供了依據(jù)。

募絡配穴 針刺 干預 缺氧 保護

配穴法為針灸療效的關鍵因素之一，為臨床醫(yī)生針灸組方常用的方法，體現(xiàn)了穴位之間的相互聯(lián)系及穴位的特異性療效。募穴是臟腑之氣匯聚于胸腹部的腧穴，絡穴溝通表里兩經(jīng)，主治表里兩經(jīng)病證。募穴和絡穴在臨床上單獨應用可以治療相應臟腑的病證，查閱文獻未見兩者配伍應用的報道。本研究根據(jù)中醫(yī)經(jīng)絡理論對急性缺氧的認識，立足“氣虛血瘀”的基本病機，選擇最先受累的臟器心為研究抓手，取手厥陰心包的募穴膻中和絡穴內關配伍，組成“募絡配穴法”，探討“募絡配穴”針刺干預對急性缺氧的影響及其作用機制。探明募絡配穴的協(xié)同效應，為這一新的的配穴方法臨床應用提供實驗依據(jù)。為高原缺氧研究提供新的干預措施。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

KM小鼠24只，雌雄各半，體重20±2 g，購自甘肅中醫(yī)學院科研實驗中心，許可證號SCXK(甘)2011-0001；SD大鼠42只，雌雄各半，體重200±20 g，購自西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心，許可證號SCXK(陜)2012-003。

1.1.2 主要試劑

LD試劑盒、LDH試劑盒、SOD試劑盒、MDA試劑盒(南京建成生物工程公司)；鈉石灰(上海納輝干燥試劑廠)。

1.1.3 主要儀器

RT-6000型酶標儀、RT-3000自動洗板機(深圳雷杜)，TU-1810紫外分光光度計(普析通用)，TGL16臺式冷凍離心機(湖南湘儀)，TH-86-150-WA超低溫保存冰箱(北京天寒)，YDS-10型液氮罐(成都金鳳)。

1.2 方法

1.2.1 穴位針刺干預對常壓密閉缺氧小鼠存活時間的影響

取小鼠24只，適應飼養(yǎng)3日后分為：①空白對照組；②非穴位針刺組；③穴位針刺組，非穴位針刺組選擇一個非穴位部位每天針刺1次，穴位針刺組根據(jù)“動物針灸穴位圖譜”選擇膻中、內關每天采用傳統(tǒng)補法針刺并留針10 min，于末次針刺后 1 h將各組小鼠分別放入裝有5 g鈉石灰的125 mL廣口瓶中(每瓶只放1只小鼠)，用凡士林涂抹封閉，使之不漏氣，立即計時至小鼠停止呼吸為止，記錄小鼠存活時間。

1.2.2 穴位針刺干預對急性高原缺氧模型大鼠相關生化指標的影響

取42只SD大鼠，適應飼養(yǎng)3日后分為：低海拔對照組(12只、在青海大學醫(yī)學院中醫(yī)藥省級重點實驗室飼養(yǎng))；高海拔急性缺氧組(共30只，運往青海省果洛州達日縣造模，海拔：4100m)。高海拔急性缺氧組又分為缺氧模型組、非穴位針刺組(非穴位部位針刺)、穴位針刺組(毫針針刺膻中穴、內關穴)，每組10只。非穴位針刺組、穴位針刺組在西寧(海拔：2250m)先針刺7 d，然后將缺氧實驗大鼠運至青海省果洛州達日縣(海拔：4100m)行實地自然環(huán)境造模。在缺氧造模的同時繼續(xù)針刺治療。針刺干預3 d即用20%烏拉坦(20g 溶于100mL 蒸餾水，劑量：1mL/200g)麻醉大鼠后，將大鼠固定于泡沫板，用圖釘固定四肢。腹主動脈采血，離心(4000r/min)血清，放入凍存管，保存在液氮中，運回實驗室通過ELISA法檢測大鼠血清中乳酸(LD)、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)等生化指標，探討針刺干預對高原缺氧的保護作用。

1.2.3 穴位針刺干預對急性高原缺氧模型大鼠心臟組織顯微結構的影響

通過大鼠心臟組織病理切片，觀察急性高原缺氧對模型大鼠心臟組織肌纖維、小血管、細胞及細胞器腫脹破損情況，反映針刺干預對高原缺氧大鼠的保護作用。

1.2.4 統(tǒng)計方法

2 結果

2.1 穴位針刺干預對常壓密閉缺氧小鼠存活時間的影響

Table 1 Effect of acupuncture intervention on the survival time of mice in normal pressure airtight induced ±s)

續(xù)表：

組別n存活時間(min)穴位針刺組810．15±1．09▲F7．476P0．004

與空白組比較，▲P<0.01.

表1結果顯示，穴位膻中、內關針刺預處理有明顯的抗缺氧作用。與空白對照組比較，可顯著延長常壓缺氧小鼠的存活時間(P<0.01)。

2.2 穴位針刺干預對急性高原缺氧模型大鼠相關生化指標的影響

Table 2 Effects of acupuncture intervention on the serum LD MDA content and LDH SOD activity in acute high altitude ±s)

與低海拔對照組比較，*P<0.001；與模型組比較，▲P<0.05、▲▲P<0.001.

表2結果顯示，與低海拔對照組相比，缺氧模型組大鼠血清LD、MDA含量明顯升高，LDH、SOD 活性顯著升高(P<0.001)。穴位膻中、內關針刺組與缺氧模型組比，大鼠血清LD、MDA 含量顯著降低(P<0.001)，LDH活性顯著降低(P<0.05)，SOD 活性顯著升高(P<0.001)。

2.3 穴位針刺干預對急性高原缺氧模型大鼠心臟組織顯微結構的影響

a b

c d

a：低海拔對照組大鼠心肌組織結構、肌纖維排列整齊(×400)；b、c：模型組、非穴位針刺組大鼠心肌組織結構、心肌肌纖維間距增加，出現(xiàn)波浪狀收縮，同時伴有間質水腫，肌纖維出現(xiàn)斷裂(×400)；d ：穴位針刺組大鼠心肌組織結構、心肌肌纖維出現(xiàn)輕微的波浪狀收縮，未見肌纖維斷裂

圖1 穴位針刺干預對急性高原缺氧模型大鼠心臟組織顯微結構的影響

Figure 1 Effects of Acupuncture intervention on the myocardial ultrastructure of experimental mice of acute high altitude hypoxia

3 討論

缺氧是一種普遍的生理應激，細胞對缺氧應激反應是一個復雜的、精細的調控過程，經(jīng)歷一系列生物學應答反應的改變，通過引起蛋白組和基因組水平的改變，調控維持氧平衡所必需的相應蛋白的表達，激活無氧代謝以及其他信號通路，調控細胞分化、凋亡和壞死等過程。[1-2]

高原環(huán)境是一個“天然缺氧實驗室”，將大鼠暴露在高海拔缺氧環(huán)境中，細胞內ATP消耗， 酶活力下降，有氧呼吸產(chǎn)生的ATP量減少。為彌補能量缺失，糖酵解作用加強，作為催化糖酵解環(huán)節(jié)中丙酮酸轉化為LD的酶，乳酸脫氧酶LDH活力在缺氧后顯著提高，同時LD累積，含量提高[3-4]。缺氧導致機體總抗氧化能力下降，體內產(chǎn)生大量自由基，引起強烈的脂質過氧化作用并產(chǎn)生大量的脂質過氧化產(chǎn)物MDA，使細胞受到損傷，組織器官功能下降，刺激SOD活性增高，以清除自由基代謝產(chǎn)物， 但隨著缺氧損傷的進行，產(chǎn)生的自由基可直接損傷抗氧化酶，使SOD等酶活力降低[5-6]?，F(xiàn)有資料表明，急性缺氧LDH和SOD的活力可以增高或降低[7-9]，所得矛盾結果的原因可能和動物種屬的不同，缺氧嚴重程度以及實驗條件的差異有關。本研究顯示，穴位膻中、內關針刺干預有明顯的抗缺氧作用，對缺氧大鼠心肌具有一定的保護作用。其作用機制可能與降低缺氧大鼠耗氧量，使缺氧心肌LD的累積減少，提高SOD活性， 減輕自由基過量生成與脂質過氧化作用，減輕缺氧所造成的心肌組織病理學損傷等有關。

急性缺氧應激損傷在中醫(yī)學中無相對應的病名，根據(jù)不同病情階段的臨床表現(xiàn)，可以將其歸屬中醫(yī)學的“心悸”“胸痹”“頭痛”“眩暈”“水氣”“血證”等，屬于中醫(yī)氣虛癥范疇，中醫(yī)學認為，氣虛無力，血運失常，在高原低壓缺氧數(shù)小時內就會產(chǎn)生急性氣滯血瘀證[10-11]。根據(jù)其發(fā)病機制，治療主要以補氣推動血氣運行為核心。中醫(yī)認為心主血脈。因此，本研究選擇手厥陰心包經(jīng)的募穴膻中和絡穴內關配伍，提出“募絡配穴”這一新的配穴方法，探討穴位針刺干預對缺氧應激損傷的保護作用及其作用機制。募穴是臟腑之氣匯聚于胸腹部的腧穴，膻中作為心包募穴，又是八會穴之氣會，善治一切氣病，具有補上焦、寬胸膈、降氣通絡之功效[12]。絡穴溝通表里兩經(jīng)，主治表里兩經(jīng)病證，內關穴作為心包經(jīng)絡穴，通過絡脈與三焦經(jīng)直接相貫通，絡心系，代心行事， 其功能多表現(xiàn)在心主血脈，著重治療心血管疾病。內關又是八脈交會穴之一，通于陰維脈，在胸腹部與六經(jīng)相互維系，凡邪犯心包，影響三焦氣機紊亂的病證皆可取本穴[13]。本實驗結果顯示，手厥陰心包經(jīng)“募絡配穴”針刺干預具有很好的抗缺氧作用，對急性缺氧應激損傷心肌具有良好的保護作用，為“募絡配穴”針刺干預法的臨床應用提供了實驗依據(jù)。

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The protective effects of “Combination of Mu and Luo Acupoints” acupuncture intervention in acute hypoxia stress injury*

Li Yongping，Cao Zhidong，Zhang Ying，Wang Wenjuan，Sa Yuping，Wu Juan

(Qinghai University，Xining，Qinghai 810000)

Objective To discuss the effect of pericardium meridian “Combination of Mu and Luo Acupoints” on acute hypoxia stress injury and its mechanism.Methods Using experimental animal model of normal pressure airtight hypoxia and plateau low pressure hypoxia.To observe the survival time of mice after acupuncture intervention for normal pressure airtight hypoxia.To test the serum LD MDA content and LDH SOD activity in experimental mice of plateau low pressure hypoxia and to observe the influence on the myocardial ultra-structure.Results The acupuncture intervention RN17 and PC6 acupoint showed obvious effect on hypoxia.To compare with control group.It significantly prolonged the survival time of the mice underwent normal pressure hypoxia.It reduced the serum LD MDA contents and the activity of LDH.Moreover，it increased the SOD activity. It could improve the structure of myocardial tissue.Conclusion The acupuncture RN17 and PC6 acupoints can increase the hypoxia tolerance and prevent the body injury because of plateau hypoxia.It may be related to the increase of SOD activity in serum，the MDA contents decrease in membrane lipid peroxidation and the lactic acid accumulation of body.It provides the basis for “Combination of Mu and Luo Acupoints” treating oxygen related diseases.

Combination of Mu and Luo Acupoints Acupuncture Intervention Hypoxia Protection

*：青海省衛(wèi)計委中藏醫(yī)藥研究項目(項目編號：2015105)；青海大學中青年科研基金項目(2014-QYY-7) 李永平(1978～)，男，漢族，甘肅籍，副教授，碩士生導師

R

A

10.13452/j.cnki.jqmc.2016.03.003

2016-02-08