龍葵超聲波乙醇提取物抑菌作用研究

姜雪琪，張衛(wèi)東

(佳木斯大學生命科學學院，黑龍江佳木斯 154007)

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龍葵超聲波乙醇提取物抑菌作用研究

姜雪琪，張衛(wèi)東*

(佳木斯大學生命科學學院，黑龍江佳木斯 154007)

[目的]研究龍葵乙醇提取物的抑菌作用。[方法]以天然植物龍葵為原料，采用超聲輔助乙醇提取龍葵生物活性成分，將提取物配置成50、100、150、200 mg/mL 4種不同濃度的溶液，利用濾紙瓊脂擴散法研究不同濃度龍葵生物成分對枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌3種菌種生長的影響。[結果]一定濃度的龍葵乙醇提取液對3種菌種均有抑制作用，且隨著龍葵提取液質量濃度的增加，3種菌種的抑菌效果越顯著，其中對金黃色葡萄球菌抑制效果最明顯。[結論]龍葵提取液具有一定的抑菌作用，且抑菌效果隨著龍葵提取液濃度的增加而增強。

龍葵；乙醇；菌種；抑菌

龍葵(SolanumnigrumL.)為茄科Solanaceace屬，一年至多年生草本野生植物，在全國各地均有分布。龍葵的生物成分主要是龍葵堿[1]。龍葵性寒，味苦、微甘，有小毒，歸肺、胃、膀胱經，主治瘡癰腫毒、皮膚濕疹、尿路感染、慢性支氣管炎、類風濕性關節(jié)炎和前列腺炎等疾病，全草可入藥，有抗腫瘤、抗炎、抗過敏、抗菌、解熱鎮(zhèn)痛等藥理作用[2-4]。傳統(tǒng)的龍葵生物堿提取方法有水或酸水法、醇類溶劑提取法、沉淀法、親脂性有機溶劑提取法等。用水或酸水提取法，提取液體積較大，濃縮困難[5]。沉淀法操作繁瑣，成本高，且得到純品較難。親脂性有機溶劑提取法適合于提取脂溶性生物堿，適用范圍比較窄。由于大多數生物堿均能溶于甲醇或乙醇，可采用醇類溶劑提取法，乙醇為最常用的溶劑提取[6]。隨著科技的發(fā)展，近幾年出現的一些新的技術，如超聲場強化、超臨界流體萃取，已應用于中藥有效成分的提取過程中[7]。有研究表明，應用這些新技術提取中藥龍葵有效成分的方法具有產率高、純度高、提取速度快等優(yōu)點，有廣闊的應用前景[8]。該試驗利用超聲波對龍葵乙醇提取法獲取龍葵的生物堿粗提物，研究不同濃度龍葵粗提溶液對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌生長的影響，探討龍葵粗提的抑菌作用。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 龍葵購自佳木斯中醫(yī)院藥局，菌種來自佳木斯大學微生物實驗室。

1.2 試驗方法

1.2.1 龍葵提取液的提取和滅菌。磨碎的龍葵粉末放入90%酒精溶液中浸泡，12 h后施加超聲波進行提取，60 ℃情況下提取30 min，對提取液進行蒸餾得到白色物質，將得到的白色物質封口放入高壓滅菌鍋中進行滅菌，滅菌后的龍葵生物粗提放在室溫中進行保存。

1.2.2 培養(yǎng)基的制備。常規(guī)MS培養(yǎng)基，pH 5.8，121.3 ℃下，滅菌20 min，37 ℃培養(yǎng)箱放置1 d后確定無菌后再使用。

1.2.3 菌種活化。菌種轉接至試管活化，培養(yǎng)3～5 d后冰箱保藏。

1.2.4 提取物和菌種的共培養(yǎng)。將濾紙剪成0.5 cm直徑的圓紙片，將濾紙片放入盛有龍葵粗提物的燒杯中進行浸泡，高壓滅菌后，無菌放置在劃線接菌后的培養(yǎng)基中，在37 ℃的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間3 d。然后取出觀察測量濾紙片周圍的抑菌圈大小。

1.2.5 枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌對龍葵乙醇提取物的敏感性測試。采用瓊脂擴散紙片法[9]測定抑菌圈直徑。通過測定抑菌圈直徑檢測枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌對龍葵乙醇提取物的敏感性。體外抑菌定性結果的判定標準[10]：抑菌圈直徑<10 mm，表示不敏感；抑菌圈直徑為10～15 mm，表示中度敏感；抑菌圈直徑為16～20 mm，表示高度敏感。

2 結果與分析

從表1可知，一定濃度的龍葵提取液對枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用，隨著龍葵提取液質量濃度的增加，3種菌種的抑菌圈直徑呈增大趨勢，當龍葵提取液濃度≤150 mg/mL時，枯草芽孢桿菌對其表現為不敏感，濃度≥200 mg/mL時，對其表現為中度敏感；當龍葵提取液≤100 mg/mL時，大腸桿菌對其表現為不敏感，濃度≥150 mg/mL時，對其表現為中度敏感；當龍葵提取液≤50 mg/mL時，金黃色葡萄球菌對其表現為不敏感，濃度為100～150 mg/mL時，對其表現為中度敏感，濃度≥200 mg/mL時，對其表現為高度敏感。通過對龍葵提取液不同濃度產生的提取液進行差異顯著性分析，發(fā)現不同濃度的龍葵提取液產生的抑菌圈直徑之間差異顯著。

表1 枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌對龍葵乙醇提取物的敏感性測試

注：同列數據后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)?！?”表示不敏感，“+”表示中度敏感，“++”表示高度敏感。

Note：Different lowercases in the same column stand for significant difference(P<0.05).- stands for insensitivity，+ indicates medium sensitivity，++ indicates high sensitivity.

3 小結與討論

試驗結果顯示，不同濃度的龍葵提取液產生的抑菌圈之間差異顯著，表明一定濃度的龍葵乙醇提取液對枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用，且隨著龍葵提取液質量濃度的增加，3種菌種的抑菌效果越顯著，其中，龍葵乙醇提取液對金黃色葡萄球菌的抑制效果最明顯。

試驗采用的龍葵提取物為粗提物，目前對龍葵抑菌活性成分的分析及其抑菌活性成分之間的相互作用效應的研究較少，日后可對龍葵活性成分進一步分離純化及對其抑菌活性成分的結構進行解析，也可將龍葵與其他中草藥混合再測試其抑菌效果，對臨床應用提供更準確的依據。此次試驗還應用了索氏提取法對龍葵進行粗提取，但由于試驗條件的限制導致對龍葵生物成分的提取率非常低，超聲波提取法的提取率非常高，所以舍棄了索氏提取法改用超聲波提取法進行試驗。

[1] 閆鳳鳴.化學生態(tài)學[M].北京：科學出版社，2001：200-201.

[2] 徐東花，于春月，韓成花.龍葵的化學成分及其藥理作用研究[J].黑龍江中醫(yī)藥，2007，50(2)：46.

[3] 趙錦慧，盛東峰，張永亮，等.龍葵水提物對2種常見致病菌的抑制作用研究[J].周口師范學院學報，2013，30(2)：73-75.

[4] 王春霞，田莉，田樹革，等.龍葵果提取物的體外抑菌效果[J].湖北農業(yè)科學，2012，51(17)：3748-3750.

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Study on Antibacterial Effect of Ultrasonic Ethanol Extracts ofSolanumnigrum

JIANG Xue-qi, ZHANG Wei-dong*

(School of Life Science, Jiamusi University, Jiamusi, Heilongjiang 154007)

[Objective] The aim was to study antibacterial effect of ethanol extracts ofSolanumnigrum. [Method]With natural plantSolanumnigrumL. as raw material, by ultrasonic assisted ethanol extraction of bioactive constituents inSolanumnigrum, then configured to 50, 100, 150, 200 mg/mL 4 different concentrations of solution, using filter paper agar diffusion method to study effects of different concentrations ofSolanumnigrumbiological components onBacillussubtilis,EscherichiacoliandStaphylococcusaureusgrowth.[Result] The results indicated that a certain concentration ofSolanumnigrumethanol extracts had inhibitory effects on three bacteria. With the increasing concentration ofSolanumnigrumethanol extracts, the antibacterial effects were more obvious, especially onStaphylococcusaureus. [Conclusion]Solanumnigrumextract has certain antibacterial effects, and the inhibitory effect increased with increasing concentration of the extracts.

Solanumnigrum; Ethanol; Bacteria; Antibacterial

姜雪琪(1990-)，女，黑龍江佳木斯人，碩士研究生，研究方向：植物進化生態(tài)學。*通訊作者，副教授，碩士，碩士生導師，從事植物進化生態(tài)學研究。

2016-09-02

S 58

A

0517-6611(2016)31-0125-01