標(biāo)本保存方法和時(shí)間對(duì)促腎上腺皮質(zhì)激素檢測(cè)的影響研究

林 江

(江蘇省江陰市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 214400)

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·臨床研究·

標(biāo)本保存方法和時(shí)間對(duì)促腎上腺皮質(zhì)激素檢測(cè)的影響研究

林 江

(江蘇省江陰市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 214400)

目的 探討標(biāo)本的不同保存方法和時(shí)間對(duì)促腎上腺素皮質(zhì)激素(ACTH)檢測(cè)結(jié)果的影響。方法 試驗(yàn)分3組。1組采集自愿者的乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血標(biāo)本2例，將離心血漿分別放置4 ℃冰箱及室溫(20±5)℃保存，在不同的時(shí)間點(diǎn)取出標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)；1組采集自愿者的EDTA抗凝血標(biāo)本21例，每7例標(biāo)本分別在冰浴、4 ℃冰箱及室溫條件下保存，在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行離心，檢測(cè)血漿ACTH；1組采集自愿者的EDTA抗凝血標(biāo)本2例，將標(biāo)本離心后，放4 ℃冰箱及室溫條件下保存，在不同時(shí)間點(diǎn)取出一定量上層血漿進(jìn)行ACTH檢測(cè)。結(jié)果 血漿標(biāo)本、不同時(shí)間點(diǎn)離心的標(biāo)本、離心后在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)的標(biāo)本，在不同時(shí)間點(diǎn)及不同保存方法組間檢測(cè)結(jié)果在24 h內(nèi)變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 EDTA抗凝標(biāo)本檢測(cè)ACTH時(shí)，標(biāo)本室溫或4 ℃冰箱放置時(shí)，在24 h內(nèi)檢測(cè)結(jié)果變化相對(duì)穩(wěn)定。

促腎上腺皮質(zhì)激素； 標(biāo)本保存； 溫度； 時(shí)間

血標(biāo)本的運(yùn)送與保存是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)分析前質(zhì)量控制的一部分，特別是對(duì)某些激素類檢測(cè)項(xiàng)目，此類檢測(cè)項(xiàng)目半衰期短，降解快，對(duì)標(biāo)本采集、運(yùn)送、檢測(cè)時(shí)間等都有特別要求。促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)是由腺垂體分泌、維持腎上腺正常形態(tài)和功能的重要激素。按照國(guó)際臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化組織要求，采集ACTH標(biāo)本應(yīng)采用冰凍乙二胺四乙酸(EDTA)管，采集后冰浴送檢，低溫離心機(jī)分離血漿和血細(xì)胞，然后立即用塑料或硅化玻璃分裝冷凍保存或冰凍長(zhǎng)期保存[1]。臨床檢測(cè)ACTH多采用節(jié)律試驗(yàn)[2]，按8、16、24 h的時(shí)間點(diǎn)采樣，因此，臨床標(biāo)本運(yùn)送很難按照要求送檢，標(biāo)本到達(dá)檢驗(yàn)科后也未能立即檢驗(yàn)。標(biāo)本運(yùn)送保存條件、放置時(shí)間及檢測(cè)的及時(shí)性等因素可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成的影響，一直困擾著臨床和檢驗(yàn)，而對(duì)其檢測(cè)結(jié)果的影響研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究將對(duì)相關(guān)影響因素進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取門(mén)診自愿者6例，其ACTH值在正常參考范圍內(nèi)；住院患者6例，其中3例患者ACTH值為高值，3例患者ACTH值為低值；本科室自愿者3例，其中ACTH值為正常參考范圍。男8例，女7例，中位年齡32歲。

1.2 儀器與試劑 采用西門(mén)子IMMULITE 1000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀及儀器配套的ACTH檢測(cè)試劑盒。儀器操作嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程進(jìn)行。

1.3 方法 (1)取本院門(mén)診自愿者3例、高值A(chǔ)CTH住院患者1例、低值A(chǔ)CTH住院患者1例，每人晨采集前臂靜脈血2例各4 mL于EDTA抗凝管中，混勻后即刻低溫離心處理(3 500 r/min，5 min)，取血漿于編號(hào)的EP管中，置4 ℃及室溫(20±5)℃環(huán)境下存放，分別于0、2、4、8、12、24 h取150 μL血漿按常規(guī)方法分別進(jìn)行ACTH檢測(cè)，記錄4 ℃及室溫環(huán)境條件下存放不同時(shí)間點(diǎn)血漿標(biāo)本ACTH的檢測(cè)結(jié)果。(2)準(zhǔn)備冰浴，并準(zhǔn)備冰浴的EDTA抗凝管，取本科室自愿者3例、高值A(chǔ)CTH住院患者1例、低值A(chǔ)CTH住院患者1例，每人晨采集前臂靜脈血3組7例各2 mL于EDTA抗凝管中，混勻后置冰浴、4℃及室溫(20±5)℃環(huán)境下存放，分別于0、2、4、8、12、24 h各取1例血標(biāo)本低溫離心處理，按常規(guī)方法進(jìn)行ACTH檢測(cè)，記錄冰浴、4 ℃及室溫環(huán)境條件下不同時(shí)間點(diǎn)分離血漿標(biāo)本ACTH的檢測(cè)結(jié)果。(3)取本院門(mén)診自愿者3例、高值A(chǔ)CTH住院患者1例、低值A(chǔ)CTH住院患者1例，每人晨采集前臂靜脈血2例各4 mL于EDTA抗凝管中，混勻后即刻離心，分別置4 ℃及室溫(20±5)℃環(huán)境下存放，分別于0、2、4、8 、12、24 h取出150 L血漿進(jìn)行ACTH檢測(cè)，記錄4 ℃及室溫環(huán)境條件下不同時(shí)間點(diǎn)血漿標(biāo)本ACTH的檢測(cè)結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 不同保存方法血漿標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)ACTH結(jié)果的影響 EDTA抗凝標(biāo)本檢測(cè)ACTH，分離后得到的血漿標(biāo)本在室溫(20±5)℃及4 ℃放置到24 h時(shí)，各組間檢測(cè)結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.135，P=0.729)。室溫組與4 ℃組間檢測(cè)結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.689，P=0.290)。見(jiàn)表1。

表1 不同保存方法血漿標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)ACTH結(jié)果的影響

2.2 不同保存方法在放置時(shí)間點(diǎn)分離血漿對(duì)ACTH檢測(cè)結(jié)果的影響 EDTA抗凝標(biāo)本檢測(cè)ACTH，冰浴放置、4 ℃放置、室溫放置的標(biāo)本到24 h在不同時(shí)間點(diǎn)分離血漿，各組間檢測(cè)的結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.750，P=0.110)。4 ℃放置、室溫放置與冰浴放置檢測(cè)結(jié)果間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.503，P=0.061)。見(jiàn)表2。

表2 不同保存方法在放置時(shí)間點(diǎn)分離血漿檢測(cè)對(duì)ACTH結(jié)果的影響

2.3 不同保存方法離心后不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)對(duì)ACTH結(jié)果的影響 EDTA抗凝標(biāo)本檢測(cè)ACTH項(xiàng)目時(shí)，標(biāo)本離心分離后，分別在室溫(20±5)℃及4 ℃放置到24 h時(shí)，不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)，各組間檢測(cè)的結(jié)果變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.063，P=0.057)。室溫放置的標(biāo)本呈下降的趨勢(shì)，4 ℃組的結(jié)果無(wú)趨勢(shì)性變化，但是各組間檢測(cè)結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.381,P=0.428)。見(jiàn)表3。

表3 不同保存方法下離心后不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)對(duì)ACTH結(jié)果的影響

3 討 論

ACTH是脊椎動(dòng)物腦垂體分泌的一種多肽類激素，含39個(gè)氨基酸，相對(duì)分子質(zhì)量為4 500×103。其增高可見(jiàn)于原發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能減退癥、異位ACTH綜合征、庫(kù)欣癥、Nelson綜合征、先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥等[3]。ACTH降低可見(jiàn)于垂體前葉功能減退癥、腎上腺皮質(zhì)腺瘤或癌、單純性ACTH缺乏綜合征、醫(yī)源性ACTH減少等[4]。ACTH的臨床意義越來(lái)越引起臨床重視，開(kāi)展此項(xiàng)目的醫(yī)院也越來(lái)越多，而多數(shù)實(shí)驗(yàn)室人員專注于分析階段的質(zhì)量保證，而分析前階段的質(zhì)量環(huán)節(jié)還存在許多問(wèn)題值得探討[5]。

分析前檢驗(yàn)標(biāo)本質(zhì)量是目前影響檢驗(yàn)結(jié)果的最大不確定因素[6]。采用放免競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)ACTH的結(jié)果不穩(wěn)定，體現(xiàn)了ACTH免疫原性低、儲(chǔ)存穩(wěn)定性較差、半衰期短及不同抗原決定族的位阻競(jìng)爭(zhēng)等特性，通常要求標(biāo)本立即分離、收集血漿，并儲(chǔ)存在-20 ℃條件下。多數(shù)醫(yī)院已淘汰放免方法檢測(cè)ACTH，多采用雙抗體夾心化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)。采用新的檢測(cè)技術(shù)及標(biāo)記方法，大大提高了檢測(cè)敏感性和特異性，對(duì)標(biāo)本的要求不再過(guò)分苛刻。有研究證明，ACTH在血漿中可穩(wěn)定較長(zhǎng)時(shí)間。本研究通過(guò)研究標(biāo)本不同貯存條件及處理時(shí)間，分析其對(duì)ACTH檢測(cè)結(jié)果的影響，并期在保證分析前質(zhì)量控制時(shí)，找到適合ACTH測(cè)定標(biāo)本的試驗(yàn)前預(yù)處理便利方法。有關(guān)標(biāo)本運(yùn)送及保存對(duì)ACTH的影響報(bào)道不多。Evans等[7]在研究抗凝血漿于不同保存溫度下檢測(cè)激素類項(xiàng)目標(biāo)本的穩(wěn)定性時(shí)指出，采用放射免疫法檢測(cè)ACTH，采用EDTA抗凝管，標(biāo)本在4 ℃保存時(shí)在18 h內(nèi)的檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定，在30 ℃保存時(shí)結(jié)果可穩(wěn)定8 h。

本研究在考慮標(biāo)本受儲(chǔ)存方式及時(shí)間影響的同時(shí)，也考慮到標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果可能會(huì)受到血細(xì)胞影響。研究中，首先立即離心分離采集的EDTA血標(biāo)本，將分離出的血漿分別放置于4 ℃冰箱及室溫(20±5)℃保存，在不同的時(shí)間點(diǎn)取出進(jìn)行檢測(cè)，并與初次檢測(cè)結(jié)果比較，發(fā)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其次，觀察EDTA抗凝標(biāo)本在冰浴、4 ℃冰箱及室溫保存條件下，于不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行離心檢測(cè)血漿ACTH，并將檢測(cè)結(jié)果與初次檢測(cè)結(jié)果比較，發(fā)現(xiàn)不同組間、不同時(shí)間點(diǎn)間的結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。最后，觀察EDTA抗凝標(biāo)本離心后，于不同時(shí)間點(diǎn)取出一定量血漿進(jìn)行ACTH檢測(cè)，結(jié)果顯示不同時(shí)間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

質(zhì)量的管控貫穿于患者采樣前準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、保存、運(yùn)送等多個(gè)過(guò)程[8]。影響ACTH檢驗(yàn)的可能因素較多，本試驗(yàn)重點(diǎn)研究了標(biāo)本采用不同處置方式時(shí)標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，發(fā)現(xiàn)EDTA抗凝血漿的標(biāo)本檢測(cè)ACTH時(shí)，標(biāo)本室溫或4 ℃冰箱放置在24 h內(nèi)檢測(cè)結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定。筆者認(rèn)為，目前采用西門(mén)子IMMULITE 1000 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀及配套試劑檢測(cè)ACTH時(shí)，標(biāo)本已不需要冰浴保存送檢，在24h內(nèi)檢測(cè)可室溫送檢。但需注意，離心后室溫放置的標(biāo)本，在24 h內(nèi)的變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但血漿檢測(cè)結(jié)果呈下降趨勢(shì)，放置時(shí)間越長(zhǎng)，下降幅度越大。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.22.047

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