豬甲狀腺球蛋白誘導(dǎo)小鼠毒性彌漫性甲狀腺腫模型的建立

周 馳，玄振玉，鄒珊珊，劉丹鳳，雷 瑜

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)藥理學(xué)教研室，上海201203；2.上海玉森新藥開發(fā)有限公司，上海201203）

豬甲狀腺球蛋白誘導(dǎo)小鼠毒性彌漫性甲狀腺腫模型的建立

周 馳1，玄振玉2，鄒珊珊2，劉丹鳳1，雷 瑜1

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)藥理學(xué)教研室，上海201203；2.上海玉森新藥開發(fā)有限公司，上海201203）

目的通過注射豬甲狀腺球蛋白（PTG）制備小鼠毒性彌漫性甲狀腺腫（GD）模型，探索其模型發(fā)病率及穩(wěn)定性。方法模型組C57BL6/N小鼠每只每周皮下多點(diǎn)注射PTG 25μg，共計(jì)6次。免疫攻擊完成后測(cè)量心率和耗氧量；之后每2周進(jìn)行血清三碘甲腺原氨酸（T3）水平的測(cè)定，以模型組小鼠血清T3水平高于正常對(duì)照組小鼠T3的x+3s為造模成功，共計(jì)12周。第12周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死小鼠測(cè)定脾和胸腺指數(shù)、血清甲狀腺球蛋白抗體和甲狀腺過氧化物酶抗體，并對(duì)甲狀腺組織進(jìn)行病理觀察。結(jié)果PTG免疫6次后，與正常對(duì)照組小鼠相比，模型組小鼠心率加快（P＜0.01），耗氧量增多（P＜0.01），血清T3水平升高（P＜0.01），其雄鼠發(fā)病率約為77.7%，雌鼠發(fā)病率約為88.8%。在免疫結(jié)束后的12周內(nèi)，模型組血清T3水平始終高于正常對(duì)照組，雄性模型組T3水平有下降趨勢(shì)，而雌性模型組血清T3始終保持相對(duì)穩(wěn)定的高水平狀態(tài)。結(jié)論本法制備小鼠GD模型造模時(shí)間短，發(fā)病率高，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，是較為理想的GD造模方法。

豬甲狀腺球蛋白；毒性彌漫性甲狀腺腫；動(dòng)物模型

一般認(rèn)為毒性彌漫性甲狀腺腫（Graves病，Graves disease，GD）是一種甲狀腺自身免疫性疾病，以基礎(chǔ)代謝率增高、自主神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征［1］。隨著現(xiàn)代社會(huì)生活壓力加大，GD的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重危害人類的身體健康。但GD的發(fā)病機(jī)制迄今尚不明確。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型對(duì)于發(fā)病機(jī)制的剖析和治療方案的研究有著極其重要的意義，尤其對(duì)于自身免疫性疾病，動(dòng)物模型對(duì)耐受機(jī)制及免疫干預(yù)療法等的研究有著不可估量的作用。1996年Shimojo等［2］用編碼人類促甲狀腺激素受體的cDNA免疫攻擊AKR/N小鼠，得到第一個(gè)真正意義上的GD動(dòng)物模型。近10余年來，人們通過不同方法免疫小鼠［3］，建立了不同的GD小鼠模型，但這些模型的發(fā)病率較低且穩(wěn)定性差。因此，建立發(fā)病率高、穩(wěn)定性好的GD動(dòng)物模型非常必要。

甲狀腺球蛋白（thyroglobulin，TG）是甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞分泌的一種蛋白質(zhì)，是濾泡腔內(nèi)膠質(zhì)的主要組成部分［4］，本身就是甲狀腺的一種自身抗原，其產(chǎn)生的TG抗體（TG antibody，TGAB）是自身免疫性疾病一個(gè)重要指標(biāo)。近幾年，Endo和Kobayashi［5］通過注射豬TG（porcine TG，PTG）建立了新的GD模型，但其成功率僅為30%，且未進(jìn)行雌雄發(fā)病率差異和穩(wěn)定性考察。本研究在此基礎(chǔ)上縮短抗原攻擊時(shí)間，提高免疫頻率，增加注射部位，并進(jìn)行模型穩(wěn)定性的探討，以期建立發(fā)病率高且穩(wěn)定性好的GD模型。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

PTG（批號(hào)018K7012V）和完全弗氏佐劑（批號(hào)SLBJ2846V），美國(guó)Sigma公司；烏來糖（批號(hào)30191228），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；［125I］三碘甲腺原氨酸（triiodothyronine，T3）放射免疫分析藥盒、［125I］TGAB放射免疫分析藥盒和［125I］甲狀腺過氧化物酶抗體（thyroid peroxidase antibody，TPOAB）放射免疫分析試劑盒，北京北方生物技術(shù)研究所有限公司；磷酸鹽緩沖液（PBS，批號(hào)15052601），上海西唐生物科技有限公司。JA5003A電子天平，上海精天電子儀器有限公司；RM6240型多道生理信號(hào)采集儀，成都儀器廠；CY-12C型便攜式數(shù)字測(cè)氧儀，北京天創(chuàng)尚邦儀器設(shè)備有限公司；SN-697放射免疫γ計(jì)數(shù)器，中國(guó)科學(xué)院上海原子核研究所日環(huán)儀器廠；Scanspeed mini離心機(jī)，丹麥Labogene公司。

1.2 PTG抗原乳劑及免疫動(dòng)物模型的制備

取PTG溶解于PBS中與完全弗氏佐劑按照1∶1比例混勻，配置成PTG濃度為0.5 g·L-1的乳劑。C57BL6/N小鼠，體質(zhì)量約20 g，雌雄各半，購(gòu)買并飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心〔SPF級(jí)飼養(yǎng)室，許可證號(hào)SCXK（滬）：2007-0005〕。飼養(yǎng)環(huán)境為溫度20～24℃，濕度50%～70%，小鼠自由進(jìn)食、飲水，自然晝夜節(jié)律光照。動(dòng)物福利及實(shí)驗(yàn)均符合上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心相關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例。

60只C57BL6/N小鼠分為正常對(duì)照組24只和模型組36只，每組雌雄各半。模型組小鼠每只每次皮下多點(diǎn)注射PTG抗原乳劑共計(jì)50μL，正常對(duì)照組小鼠以PBS代替，每周1次，共計(jì)6次。免疫攻擊完成后進(jìn)行心率、耗氧量和T3水平觀察，并開始每2周1次眼內(nèi)眥取血，分離血清測(cè)定T3，以模型組小鼠T3水平高于正常對(duì)照組T3的x+3s為造模成功，持續(xù)觀察12周，于最后1周腹腔注射烏拉坦0.75 g·kg-1麻醉小鼠，下腔靜脈取血。處死小鼠，測(cè)定脾和胸腺指數(shù)，并定性判斷血清中TGAB和TPOAB的陽(yáng)性率。

1.3 小鼠外觀和體質(zhì)量變化的觀察

實(shí)驗(yàn)期間密切觀察小鼠的一般活動(dòng)及行為狀態(tài)。在6次免疫攻擊過程中，每周免疫注射后第7天記錄1次小鼠體質(zhì)量的變化。在免疫造模完成后，每周記錄1次小鼠的平均進(jìn)食情況，連續(xù)12周。

1.4 心率檢測(cè)

免疫6次后，腹腔注射烏拉坦0.75 g·kg-1麻醉小鼠，RM6240多道生理信號(hào)儀記錄心率。

1.5 耗氧量檢測(cè)

免疫6次后，將每只小鼠分別放入500 mL的密閉抽濾瓶中，將抽濾瓶外通玻璃管與50 mL注射器用膠皮套與三通閥相連。10 min后用注射器通過三通閥吸取瓶?jī)?nèi)空氣30 mL，注入CY-12C測(cè)氧儀，測(cè)氧儀顯示為抽濾瓶中氣體的氧含量，氧含量消耗值（%）=21%-剩余氧含量，小鼠的耗氧量=氧含量消耗值（%）/體質(zhì)量（g）。

1.6 放射免疫法測(cè)定血清T3，TPOAB和TGAB水平

免疫攻擊完成后每2周1次眼內(nèi)眥取血，800×g離心15 min，吸取血清，采用放射免疫法定量測(cè)定血清中的T3；定性測(cè)定TPOAB和TGAB，以P/N＜2.1定義為陰性，2.1≤P/N≤4.0定義為弱陽(yáng)性，P/N＞4.0定義為強(qiáng)陽(yáng)性，操作均按放免試劑盒說明書進(jìn)行。

1.7 免疫臟器指數(shù)測(cè)定

在免疫攻擊完成后的第12周麻醉處死小鼠，迅速解剖取出脾和胸腺并稱重，計(jì)算脾和胸腺質(zhì)量（mg）與體質(zhì)量（g）的比值，即為脾和胸腺的臟器指數(shù)。

1.8 甲狀腺組織病理觀察

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出甲狀腺，置于10%甲醛固定，切片，HE染色，光鏡下觀察病理改變。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 GD模型小鼠一般行為狀態(tài)變化

實(shí)驗(yàn)過程中，正常對(duì)照組小鼠始終未見活動(dòng)、行為及毛色的異常。模型組小鼠在免疫攻擊5周后開始出現(xiàn)多動(dòng)不安和互相攻擊的情況，并伴有一定的脫毛現(xiàn)象，糞便也較多，但隨著時(shí)間延長(zhǎng)其多動(dòng)不安的行為有所改善。

2.2 GD模型小鼠體質(zhì)量和進(jìn)食量變化

圖1結(jié)果顯示，在免疫攻擊6次期間，模型組小鼠的體質(zhì)量較正常對(duì)照組略輕，其中在第4次免疫后雄性模型組體質(zhì)量明顯減輕（P＜0.01）。圖2結(jié)果顯示，在免疫造模完成后的12周內(nèi)，模型組小鼠的平均進(jìn)食量較正常對(duì)照組增多（P＜0.01）。提示該模型可使小鼠的體質(zhì)量增加減緩和進(jìn)食量增多。

Fig.1 Effect of immunization with porcine thyroid globulin（PTG）on body mass of Graves disease（GD）mice.The mice in modelgroup received multi-point subcutaneous injection of PTG 25μg once a week for 6 weeks，meanwhile the mice in control groups were given PBS 50μL.Body mass was measured at the 7th day after each PTG injection.n=12（control），18（model）.**P＜0.01，compared with corre?sponding controlgroup.

Fig.2 Effect of immunization with PTG on food con?sumption of GD model mice. See Fig.1 for the mouse treat?ment. Food consumption was measured after the end of immunization，once a week for 12 weeks.Mean food consumption= mass of consumptive food（g）/number of mice.（control），18（model）. **P＜0.01，compared with corresponding control group.

2.3 GD模型小鼠心率變化

表1結(jié)果顯示，在免疫攻擊6次后，模型組小鼠心率與正常對(duì)照組小鼠比較明顯加快（P＜0.01），提示PTG免疫可使小鼠心率加快。

Tab.1 Heart rate of GD model mice after immunization with PTG for 6 times

2.4 GD模型小鼠耗氧量變化

表2結(jié)果顯示，在免疫攻擊6次后，模型組小鼠耗氧量與正常對(duì)照組小鼠比較明顯增多（P＜0.01），提示PTG免疫可使小鼠耗氧量增多。

Tab.2 Oxygen consumption of GD model mice after immunization with PTG for 6 times

2.5 GD模型小鼠免疫臟器指數(shù)變化

表3結(jié)果顯示，在免疫攻擊完成12周后，模型組小鼠脾系數(shù)與正常對(duì)照組小鼠相比無(wú)明顯差異，但胸腺系數(shù)明顯下降（P＜0.01）。

2.6 GD模型小鼠發(fā)病率的性別差異

表4結(jié)果顯示，在免疫攻擊6次后，雌雄模型組小鼠與正常對(duì)照組小鼠比較血清T3水平明顯增加，（P＜0.01）。以模型組小鼠血清T3水平高于正常對(duì)照組血清T3的x+3s為造模成功，雄性小鼠發(fā)病率為77.7%，雌性小鼠發(fā)病率為88.8%（表5），提示該模型的發(fā)病率有性別差異。

2.7 GD模型小鼠穩(wěn)定性觀察

圖3結(jié)果顯示，不同性別模型組小鼠在免疫攻擊完成后12周內(nèi)，與同性別正常對(duì)照組小鼠相比，血清T3濃度始終保持在高水平。表5結(jié)果表明，雄性小鼠的發(fā)病高峰較雌性小鼠早2周出現(xiàn)，雄性模型小鼠的血清T3水平下降速度較雌性快，而雌性模型小鼠在12周內(nèi)始終保持相對(duì)較高的血清T3水平。

2.8 GD模型小鼠血清TPOAB和TGAB水平的性別差異

在免疫攻擊完成12周后，雌雄正常對(duì)照組小鼠無(wú)1例出現(xiàn)TGAB和TPOAB陽(yáng)性。從表6中可以看出，雌雄模型小鼠的不同抗體水平變化不一，雄性模型小鼠較雌性模型小鼠出現(xiàn)多例強(qiáng)陽(yáng)性TGAB（P＜0.05），還出現(xiàn)2例強(qiáng)陽(yáng)性TPOAB，但雌性模型小鼠未出現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性，兩者比較無(wú)顯著性差異。

2.9 GD模型小鼠甲狀腺組織病理變化

正常對(duì)照組雌性小鼠甲狀腺濾泡大小大致相同，多呈橢圓形，邊界清晰；濾泡內(nèi)膠質(zhì)較均勻，濾泡上皮細(xì)胞多呈低柱狀，核圓形（圖4A）。模型組雌性小鼠甲狀腺濾泡腫大明顯且濾泡大小不一，呈不規(guī)則變化；濾泡膠質(zhì)內(nèi)有眾多小空泡產(chǎn)生，少數(shù)濾泡膠質(zhì)稀薄甚至缺失，濾泡間隙變寬；濾泡上皮細(xì)胞明顯受壓，變成低立方形，核稍大且多位于基底部（圖4B）。

Tab.3 Effect of immunization with PTG on organ index of GD model mice

Tab.4 Serum T3level of mice after immunization with PTG for 6 times

Tab.5 Morbidity ofmice in different genders during 12 weeks after 6 times PTG injection

Fig.3 Variation of serum T3level in GD model mice after 6 times of PTG injection.See Fig.1 for the mouse treatment. The serum T3of mice was measured every two weeks for 12 weeks after the end of PTG injection.A：male group；B：female group.

Tab.6 Effect of immunization with PTG on serum TG antibody（TGAB）and thyroid peroxidase antibody（TPOAB）levels of GD modelmice

Fig.4 Histopathological changes of thyroid glands of GD modelfemale mice immunized with PTG（HE staining×400）. See Fig.1 for the mouse treatment.Histopathologicalchanges were observed atthe 12th week after the end of PTG injection.The red arrow showed folliclar space wide.The black arrow showed acinarcolloid thin.

3 討論

本研究結(jié)果表明，模型組小鼠在PTG免疫攻擊6次后，血清T3水平升高，造成交感神經(jīng)興奮，出現(xiàn)了以心率加快、耗氧量增多、體質(zhì)量減輕和進(jìn)食量增多為特征的基礎(chǔ)代謝率加快現(xiàn)象，這與GD患者在臨床上的表現(xiàn)一致［6］，但免疫結(jié)束后，其體質(zhì)量與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。

脾作為免疫器官是產(chǎn)生B淋巴細(xì)胞的主要場(chǎng)所，主要參與體液免疫；而胸腺是產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞的主要場(chǎng)所，主要參與細(xì)胞免疫。胸腺和脾系數(shù)是反映其各自功能的重要指征，系數(shù)的增減變化在一定程度上反映了機(jī)體的免疫功能狀況［7］。本課題組曾發(fā)現(xiàn)在6次免疫結(jié)束后，模型組小鼠的脾系數(shù)較對(duì)照組明顯增大，而胸腺系數(shù)只略減小。在本研究中，PTG作為外來抗原攻擊機(jī)體時(shí)，脾分泌大量B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)抗體進(jìn)行機(jī)體防御，很可能導(dǎo)致脾系數(shù)增大；而在免疫完成后12周內(nèi)，由于未繼續(xù)給予小鼠外來抗原，脾不再大量分泌B淋巴細(xì)胞，模型組小鼠的脾系數(shù)與正常對(duì)照組相比已無(wú)顯著性差異。但模型組小鼠的胸腺系數(shù)較正常對(duì)照組顯著變小。此結(jié)果再次證實(shí)，GD的產(chǎn)生可能與細(xì)胞免疫或體液免疫的失衡有關(guān)［8］。對(duì)于本模型而言，無(wú)論是在免疫結(jié)束之時(shí)還是在免疫結(jié)束后12周，其細(xì)胞免疫/體液免疫始終處于減弱狀態(tài)。

本研究采用了與Endo等［5］實(shí)驗(yàn)相同的C57BL6/N品系小鼠，一方面提高免疫攻擊的頻率，即將原來每2周免疫攻擊1次縮短為每周免疫攻擊1次，總的免疫攻擊次數(shù)不變；另一方面采用皮下多點(diǎn)注射［9］替代原來單一注射比目魚肌，使模型的發(fā)病率由Endo方法的30%提高至約80%。

此外，現(xiàn)有GD免疫模型研究對(duì)象多為雌性動(dòng)物，其原因是GD多發(fā)于女性，與雌激素水平有密切聯(lián)系［10］，可得到發(fā)病率較高的模型。但僅用雌性動(dòng)物作為研究GD發(fā)病機(jī)制和藥效學(xué)研究的對(duì)象不合理且不全面，畢竟GD在男性也有一定發(fā)病率，故在免疫模型上比較發(fā)病率性別的差異是有意義的。本研究發(fā)現(xiàn)，通過PTG誘導(dǎo)的GD模型，其雄性小鼠在免疫完成后的發(fā)病率為77.7%，而雌性小鼠為88.8%。雌、雄小鼠在免疫造模完成后的12周內(nèi)血清T3水平均出現(xiàn)先升高后下降的現(xiàn)象，但雄性小鼠的血清T3水平下降趨勢(shì)明顯，而雌性小鼠始終保持相對(duì)較高的穩(wěn)定狀態(tài)。

分析雌、雄小鼠發(fā)病率和穩(wěn)定性差異的原因，一方面可能是雄鼠比雌鼠易產(chǎn)生具有水解TG作用的TGAB，而TG作為甲狀腺中的一種碘化糖蛋白既是合成T3的原料也是儲(chǔ)存T3的場(chǎng)所，TG經(jīng)水解后可生成T3［11］。因此，在免疫完成后，雄鼠比雌鼠先達(dá)到T3水平高峰，而后又因后期雄鼠TG含量的減少導(dǎo)致T3分泌的減少，出現(xiàn)了后期雄鼠T3水平比雌鼠下降快的現(xiàn)象；另一方面可能是雄鼠也易產(chǎn)生TPOAB，而過氧化物酶是催化碘的氧化和酪氨酸碘化過程中不可缺少的物質(zhì)［12］，故由于雄鼠甲狀腺過氧化物酶含量減少，導(dǎo)致了碘的氧化和酪氨酸碘化過程的受阻，使得T3合成和分泌通路被阻斷，進(jìn)一步加快了雄鼠在后期T3水平的下降。

GD作為一種與情志等多種因素有關(guān)的自身免疫性疾病，發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，對(duì)于該病的治療原則也很難確立。而對(duì)于用免疫方法建立GD動(dòng)物模型，一直認(rèn)為難度較大，可復(fù)制性亦較低，在國(guó)內(nèi)成功開展的報(bào)道較少，更鮮見相關(guān)模型應(yīng)用于藥效學(xué)研究。本研究通過改良后的造模方法使得GD小鼠的發(fā)病率增高，并且模型小鼠在免疫結(jié)束后12周內(nèi)始終保持較高的血清T3水平，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。本法制備的模型小鼠呈現(xiàn)的癥狀與GD臨床癥狀相似且穩(wěn)定，造模時(shí)間縮短，可作為較理想的藥效研究的造模方法之一。

［1］Zhang MX.Thyroid Disease Diagnosis and Treatment（甲狀腺疾病診斷學(xué)）［M］.Beijing：China MedicalScience Press，2005：96-105.

［2］Shimojo N，Kohno Y，Yamaguchi K，Kikuoka S，Hoshioka A，NiimiH，et al.Induction of Graves-like disease in mice by immunization with fibroblasts transfected with the thyrotropin receptor and a classⅡmolecule［J］.Proc NatlAcad SciUSA，1996，93（20）：11074-11079.

［3］Li QM，Wei JP.Research overview of Graves disease animal model building methods［J］.J Med Res（醫(yī)學(xué)研究雜志），2013，42（8）：18-22.

［4］Torréns JI，Burch HB.Serum thyroglobulin measure?ment：utility in clinical practice［J］.Endocrinol Metab Clin North Am，2001，30（2）：429-467.

［5］Endo T，KobayashiT.Immunization with thyroglobulin in?duces Graves′-like disease in mice［J］.J Endocrinol，2009，202（2）：217-222.

［6］Qiao J，LiJT，Qu GY.Electrocardiogram analysis of 133hyperthyroidism patients［J］.China PracticalMed（中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥），2015，10（5）：38-39.

［7］Liu Q，Liu XG，Wu S.Experimental study of the change on thymus index and spleen index in rats with insufficiency of the lung-qi of pulmonary emphysema［J］.J Gansu College TraditChin Med（甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)），2006，23（1）：20-23.

［8］Liu M，Pan JF.The study ofthe effectofthyroxine on T，B cells abnormalities in Graves′disease patients［J］. Chin J Immunol（中國(guó)免疫學(xué)雜志），1999，15（7）：321-323.

［9］Ye DM，Wang P，Chen J.Development of murine model of experimental autoimmune thyroiditis［J］. Acta Acad Med Wannan（皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)），2015，34（1）：10-12.

［10］Wang S，Mao S，Zhao G，Wu H.Relationship between estrogen receptor and Graves′disease［J］. Chin J Surg（中華外科雜志），2000，38（8）：619-621.

［11］CuiSL，Yu J，Shoujun L.Iodine intake increases IP-10 expression in the serum and thyroids of rats with experimentalautoimmune thyroiditis［J］.IntJ Endocri?nol，2014，2014：581069.

［12］Andrade VA，Gross JL，Maia AL.The effect of methimazole pretreatmenton the efficacy ofradioactive iodine therapy in Graves'hyperthyroidism：one-year follow-up ofa prospective，randomized study［J］.J Clin Endocrinol Metab，2001，86（8）：3488-3493.

Preparation ofmouse modelof Graves disease using porcine thyroid globulin

ZHOUChi1，XUANZhen-yu2，ZOUShan-shan2，LIUDan-feng1，LEIYu1
（1.Department of Pharmacology，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China；2.ShanghaiYouseen Drug Development Corporation，Shanghai 201203，China）

OBJECTIVE To prepare the Graves disease（GD）mouse model through porcine thyroid globulin（PTG）injection and investigate the morbidity and stability of the model.METHODS C57BL6/N mice in modelgroup received multi-pointsubcutaneous injection of PTG 25μg each week，six times in all.Afterthe end ofimmunization，theirheartrate and oxygen consumption were measured and serum triiodothyronine（T3）levelwas determined every two weeks.A modelwas considered successfulif serum T3levelwas higherthan x+3s ofthe controlgroup.Observation ofthe modellasted 12 weeks.Atthe 12th week，spleen and thymus gland indices，serum thyroid globulin antibodies and thyroid peroxidase antibodies were measured，and the thyroid glands were taken for pathologicalobservation.RESULTS After six times of immunization，mice in modelgroup showed increased heart rate（P＜0.01），oxygen consumption（P＜0.01）and T3level（P＜0.01）compared with controlgroup.The morbidity was 77.7%for male mice and 88.8%forfemales.In addition，T3levelin modelgroup remained higherthan thatin control group within 12 weeks afterimmunization.The T3leveltended to decrease in male mice，butremained ata relatively stable higherlevelin females.CONCLUSION This method is suitable for GDmodeling due to its shortmodel-making time，high morbidity and long durability.

porcine thyroid globulin；Graves disease；animalmodel

XUAN Zhen-yu,E-mail:xuanzhenyu@163.com

R965.1

A

1000-3002-（2016）05-0582-06

10.3867/j.issn.1000-3002.2016.05.016

2015-08-03接受日期：2016-02-18）

（本文編輯：齊春會(huì)）

周馳（1990-），男，碩士研究生，主要從事中藥藥理學(xué)研究。

玄振玉，E-mail：xuanzhenyu@163.com