支氣管內(nèi)超聲引導(dǎo)針吸活檢標(biāo)本檢測3種microRNA對肺癌分型的價值

李璽，林勁松，陳桂陽，陳明真，盧燕珊，榮福

（廣東省佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，廣東 佛山 528300）

支氣管內(nèi)超聲引導(dǎo)針吸活檢標(biāo)本檢測3種microRNA對肺癌分型的價值

李璽，林勁松，陳桂陽，陳明真，盧燕珊，榮福

（廣東省佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，廣東 佛山 528300）

目的 探討支氣管內(nèi)超聲引導(dǎo)針吸活檢術(shù)（EBUS-TBNA）獲取標(biāo)本聯(lián)合檢測3種microRNA對肺癌分型的價值。方法 收集2014年10月-2016年1月在該院住院的肺癌患者35例，同期收集肺部良性病變者20例為對照組，經(jīng)EBUS-TBNA獲取標(biāo)本，用實(shí)時定量PCR方法檢測其miRNA-21、miRNA-205、miRNA-375的表達(dá)水平，評價其在肺癌病理分型的價值。結(jié)果 肺癌組EBUS-TBNA標(biāo)本miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的相對表達(dá)量明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P ＜0.01）。miRNA-21在腺癌患者EBUS-TBNA標(biāo)本中的表達(dá)水平明顯高于肺鱗癌，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）；miRNA-205在肺鱗癌患者EBUS-TBNA標(biāo)本中的表達(dá)水平明顯高于肺腺癌，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）；miRNA-375在小細(xì)胞肺癌患者EBUS-TBNA標(biāo)本中的表達(dá)水平明顯高于鱗癌和腺癌，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.01）。根據(jù)受試者工作特征曲線（ROC），miRNA-21取1.955為診斷肺腺癌的臨界值時，其敏感度和特異度分別為65.00%和100.00%；miRNA-205取2.305為診斷肺鱗癌的臨界值時，其敏感度和特異度均分別為91.67%和100.00%。結(jié)論 EBUS-TBNA標(biāo)本行miRNA檢測是可行的，聯(lián)合檢測miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375有助于肺癌的診斷和病理分型。

支氣管內(nèi)超聲；經(jīng)支氣管針吸活檢；微小RNA；肺癌；診斷；分型

2015年我國估算有73.3萬例新發(fā)肺癌病例和60.0萬例死亡病例，居惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率的首位，與美國相比，中國肺癌的預(yù)后更差、生存期更短［1］。支氣管內(nèi)超聲引導(dǎo)針吸活檢術(shù)（endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration，EBUS-TBNA）是臨床上常用的細(xì)針穿刺技術(shù)，對肺癌的診斷有良好的價值且安全性較好［2］。但在所有的肺癌小標(biāo)本中，診斷為非小細(xì)胞癌組織學(xué)亞型不明確（non-small cell carcinoma not otherwise specified，NSCC-NOS）約占30.00%～50.00%，隨著分子靶向治療的發(fā)展，世界衛(wèi)生組織建議減少NSCC-NOS的診斷［3］。目前大量研究表明，微小RNA（microRNA）有助于肺癌分型［4］。本研究收集中低分化肺癌患者經(jīng)EBUS-TBNA獲取的小標(biāo)本，通過實(shí)時定量PCR方法檢測其miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375，探討miRNA在肺癌病理分型中的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料

所有研究對象均為2014年10月-2016年1月在廣東省佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院住院肺癌患者（肺癌組）35例。其中，男24例，女11例；年齡33～75歲，平均年齡（59.71±9.88）歲；鱗癌12例，腺癌20例，小細(xì)胞肺癌3例。所有肺癌患者檢查前均未行放化療或靶向治療。同期收集有肺部良性病變且無腫瘤病史的患者（對照組）20例。其中，男11例，女9例，年齡26～79歲，平均年齡（58.00±15.32）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有研究對象都簽署了知情同意書。

1.2EBUS-TBNA取材

1.2.1儀器 日本Olympus公司內(nèi)鏡設(shè)備：包括常規(guī)纖支鏡、超聲內(nèi)鏡、圖像處理系統(tǒng)及配套的穿刺針。

1.2.2術(shù)前準(zhǔn)備 ①術(shù)前完善血常規(guī)、凝血功能、心電圖和胸部CT等檢查；②禁飲食6 h以上。

1.2.3EBUS-TBNA-TBNA標(biāo)本的獲取 局麻下經(jīng)鼻腔入鏡或全麻下經(jīng)喉罩入鏡，將內(nèi)鏡探頭置于擬穿刺部位，打開超聲圖像，確定穿刺病點(diǎn)，穿刺，穿入后可見病灶內(nèi)穿刺針強(qiáng)回聲。抽吸獲取標(biāo)本后固定，送常規(guī)病理檢查。在同一穿刺點(diǎn)再次穿刺，將標(biāo)本置入EP管中，隨后放進(jìn)-80℃冰箱保存。每個穿刺點(diǎn)穿刺3～6次。穿刺后禁飲食2 h，密切觀察有無并發(fā)癥發(fā)生。

1.3miRNA檢測

當(dāng)患者肺內(nèi)原發(fā)灶活檢經(jīng)兩名高年資病理科醫(yī)生一致診斷為鱗癌、腺癌或小細(xì)胞肺癌，其EBUSTBNA標(biāo)本見中低分化癌細(xì)胞但未能明確病理類型時，病理科對EBUS-TBNA標(biāo)本進(jìn)一步行免疫組化甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（thyroid transcription factor，TTF-1）和P63檢查，同時-80℃保存標(biāo)本行miRNA檢查。

1.3.1主要試劑、儀器和耗材 TRIzol? Reagent（Life technologies）、RNase free吸頭和RNase free EP管（Axygen）、K2800核酸分析儀（北京凱奧）、Agarose（Biowest）、Nucleic Acid Stain 核酸染料（北京鼎國昌盛）、電泳儀（北京君意）、全自動凝膠成像分析系統(tǒng)（上海培清）、冷凍離心機(jī)（珠海黑馬）、Geneseed? First Strand cDNA Synthesis Kit和Geneseed? qPCR SYBR?Green Master Mix（Geneseed）、實(shí)時熒光定量PCR儀（ABI 7500）。

1.3.2RNA RNA提取 ①標(biāo)本融化后充分混勻，取300.0μl EBUS-TBNA樣本，加入1.0 ml Trizol后，室溫靜置5 min，使其充分裂解；②按200.0μl氯仿/ml Trizol的比例加入氯仿，用手劇烈振蕩15 s，室溫放置15 min；③4℃，12 000 g離心15 min；④溶液分為3層，RNA溶解在水相中，把上層水相吸引出來，移至另一離心管中；⑤按1.0 ml 75%乙醇/ml Trizol的比例加入75%乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀；⑥4℃ 7 500 g離心5 min，盡量棄上清；⑦室溫晾干5～10 min，加入40.0μl DEPC水溶解沉淀；⑧RNA質(zhì)量和完整性檢測：測OD值定量RNA，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測 RNA完整性。

1.3.3引物合成 廣州吉賽生物科技有限公司合成。

1.3.4 .3.4 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 20.0 μl反應(yīng)體系：2 ×RT Mix 5.0 μl，Geneseed? Enzyme Mix 1.0 μl，has-miR-21 RT引物0.5 μl，has-miR-205 RT引物0.5 μl，has-miR-375 RT引物0.5 μl，U6 RT引物0.5 μl，Total RNA 1 μg，加RNase free dd H2O至20.0 μl。反應(yīng)條件：25℃ 5 min，50℃ 30 min，85℃ 5 min。

1.3.5實(shí)時定量PCRPCR實(shí)驗 用SYBE-GREEN法。20.0μl反應(yīng)體系：Geneseed? qPCR SYBR? Green Master Mix 10.0 μl，F(xiàn)orward primer（10 μmol/L）0.5 μl，Reverse primer（10 μmol/L）0.5μl，50x ROX Reference Dye 2 0.4 μl，模板DNA 2，加滅菌蒸餾水至20.0μl。反應(yīng)程序設(shè)置：預(yù)變性95℃ 5 min，循環(huán)反應(yīng)40個循環(huán)95℃ 10 s、60℃（采集信號）34 s，熔解曲線95℃15 s，60℃ 60 s，95℃ 15 s。

1.3.6實(shí)時定量PCRPCR數(shù)據(jù)處理 以U6為內(nèi)參。根據(jù)2-△△Ct公式計算目標(biāo)基因表達(dá)情況?！鰿t=Ct目標(biāo)miRNACtU6，△△Ct=肺癌組△Ct-對照組△Ct=肺癌組（Ct目標(biāo)miRNACtU6）-對照組（Ct目標(biāo)miRNA- CtU6）=X。則肺癌組樣本內(nèi)miRNA的表達(dá)水平為對照組樣本內(nèi)的2-X倍。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。所有計量資料均進(jìn)行正態(tài)性檢驗，正態(tài)分布資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗。多組間比較，方差齊用LSD和SNK-q檢驗、方差不齊用Kruskal-Wallis檢驗。資料不符合正態(tài)分布時采用秩和檢驗。P ＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。作受試者工作曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）來評價miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375診斷肺癌和肺癌病理分型的能力，分別計算曲線下面積（AUC）來評估其診斷效能，并確定臨界值及其相關(guān)的靈敏度、特異度。

2 結(jié)果

2.1miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375在肺癌組和對照組EBUS-TBNA標(biāo)本的相對表達(dá)量

肺癌組EBUS-TBNA標(biāo)本miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的相對表達(dá)量明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P ＜0.01）。見表1。

2.2EBUS-TBNA標(biāo)本檢測miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375對肺癌的診斷價值

作ROC曲線來評價EBUS-TBNA標(biāo)本中miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的相對表達(dá)量對肺癌的診斷價值。miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的曲線下面積（area under curve，AUC）分別為0.944（95%可信區(qū)間：0.877～1.000）、0.973（95%可信區(qū)間：0.936～1.000）和0.991（95%可信區(qū)間：0.975～1.000），AUC均在0.900以上，提示有較高的準(zhǔn)確性。miRNA-21取1.635為診斷肺癌的臨界值時，其敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為82.86%、95.00%和77.86%；miRNA-205取1.475為診斷肺癌的臨界值時，其敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為94.25%、95.00%和89.29%；miRNA-375取4.505為診斷肺癌的臨界值時，其敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為100.00%、90.00%和90.00%。上述數(shù)據(jù)表明EBUSTBNA標(biāo)本的miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375相對表達(dá)量對診斷肺癌有較高的診斷效能。

表1 miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的相對表達(dá)量

表1 miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的相對表達(dá)量

組別miRNA-21miRNA-205miRNA-375肺癌組（n =35）2.038±0.6322.203±0.68314.137±10.717對照組（n =20）1.103±0.3271.109±0.2792.245±1.558 t值7.128.486.45 P值0.0000.0000.000

2.3EBUS-TBNA標(biāo)本的miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的表達(dá)水平對肺癌病理分型的價值

EBUS-TBNA標(biāo)本miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375在肺鱗癌、腺癌和小細(xì)胞肺癌的相對表達(dá)量不全相同，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P ＜0.01），見表2。進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，miRNA-21在鱗癌患者EBUS-TBNA標(biāo)本的表達(dá)水平明顯低于腺癌，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）；miRNA-205在鱗癌患者EBUS-TBNA標(biāo)本的表達(dá)水平明顯高于腺癌，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）；miRNA-375在小細(xì)胞肺癌患者EBUS-TBNA標(biāo)本的表達(dá)水平明顯高于鱗癌和腺癌，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P ＜0.05）。

2.4非小細(xì)胞肺癌患者EBUS-TBNA標(biāo)本檢測miRNA-21對肺腺癌的診斷價值，并與免疫組化指標(biāo)TTF-1比較

作ROC曲線來評價miRNA-21診斷肺腺癌的價值，miRNA-21的AUC為0.854（95%可信區(qū)間：0.718～0.990）；取1.955為診斷臨界值時，以肺癌原發(fā)灶活檢的組織病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，miRNA-21診斷肺腺癌的Kappa值為0.582，一致性一般，與肺腺癌的TTF-1陽性表達(dá)（圖1）比較，其診斷腺癌的特異度同TTF-1，但敏感度低于TTF-1。見表3。

表2 肺癌EBUS-TBNA標(biāo)本miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的相對表達(dá)量

表2 肺癌EBUS-TBNA標(biāo)本miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的相對表達(dá)量

組別miRNA-21miRNA-205miRNA-375鱗狀細(xì)胞癌（n =12）1.552±0.198 2.905±0.622 12.932±6.379腺癌（n =20）2.286±0.670 1.788±0.336 10.430±4.795小細(xì)胞肺癌（n =3）2.330±0.684 2.393±0.462 43.673±7.460 F值12.6922.24-H值--46.75 P值0.0010.0000.000

2.5非小肺癌患者EBUS-TBNA標(biāo)本檢測miRNA-205對肺鱗癌的診斷價值，并與免疫組化指標(biāo)P63比較

作ROC曲線來評價miRNA-205診斷肺鱗癌的價值，miRNA-205的AUC為0.971（95%可信區(qū)間：0.920～1.000），取2.305為診鱗癌的臨界值時，以肺癌原發(fā)灶活檢的組織病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，miRNA-205診斷肺鱗癌的Kappa值為0.932，一致性較好，與肺鱗癌的P63陽性表達(dá)（圖2）比較，其診斷鱗癌的特異度和敏感度均高于P63。見表4。

圖1 TTF-1表達(dá)于肺腺癌的細(xì)胞核 （SP法，×400）

圖2 P63表達(dá)于肺鱗癌的細(xì)胞核 （SP法，×400）

表3 EBUS-TBNA標(biāo)本檢測miRNA-21和TTF-1診斷肺腺癌的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值和Youden指數(shù)

表4 EBUS-TBNA標(biāo)本檢測miRNA-205和P63診斷肺鱗癌的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值和Youden指數(shù)

3 討論

近些年來，隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，對肺癌的準(zhǔn)確分型要求越來越高。一方面肺癌的分子靶向治療要求更精確的組織學(xué)分類，如表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）/間變性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）/受體酪氨酸激酶（ROS proto-oncogene 1，receptor tyrosine kinase，ROS1）等基因活化主要發(fā)生在腺癌，程序性死亡受體-1（programmeddeath-1，PD-1）單抗Nivolumab僅僅在晚期鱗癌中獲批；另一方案培美曲塞和貝伐單抗等藥物僅在非鱗非小細(xì)胞肺癌中獲批。如果鱗癌患者使用貝伐單抗或培美曲賽治療可能出現(xiàn)嚴(yán)重甚至致死性的不良反應(yīng)，而小細(xì)胞肺癌使用貝伐單抗作用不大。明確病理分型是肺癌個體化藥物治療的基礎(chǔ)。肺癌手術(shù)切除標(biāo)本可以準(zhǔn)確的病理分型和進(jìn)行詳盡的分子生物學(xué)研究，但術(shù)后多年后復(fù)發(fā)的患者并不能用之前手術(shù)切除標(biāo)本進(jìn)行分析，因為轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)灶的生物學(xué)特點(diǎn)可能與原發(fā)灶不同；另外，約2/3的患者在進(jìn)行肺癌診治時已是晚期，無法獲取手術(shù)切除的組織標(biāo)本，多數(shù)能取到的就是纖支鏡活檢或細(xì)針穿刺標(biāo)本。EBUSTBNA是一項常用的肺癌診斷和分型的細(xì)針穿刺技術(shù)，能夠使大部分肺癌得到準(zhǔn)確的診斷［2］，但同時也有一部分無法分型或錯誤分型［5］，尤其是低分化癌、活檢小標(biāo)本所含腫瘤細(xì)胞不多、缺乏組織結(jié)構(gòu)或組織本身的有較大異質(zhì)性時，準(zhǔn)確分型的難度就更大［6-7］。免疫組化在一定程度上能提高肺癌分型的準(zhǔn)確性，但免疫組化方法也有其不足［8-10］，其診斷和分型的能力有限。因此，有必要尋求一種新型的、更加準(zhǔn)確的肺癌分型方法。近年來對miRNA的研究為解決之一難題提供了契機(jī)。

國外多項研究表明，檢測肺癌手術(shù)切除標(biāo)本的miRNA可以成功的鑒別肺鱗癌和腺癌，其準(zhǔn)確度達(dá)90.00%～100.00%［6，11-14］。GILAD等［11］研究451份肺癌及肺部良性病變標(biāo)本的8種miRNAs（miRNA-106a、miRNA-125a、miRNA-129、miRNA-205、miRNA-21、miRNA-7、miRNA-375和miRNA-29b）發(fā)現(xiàn)，miRNA準(zhǔn)確鑒別肺部良性腫瘤、小細(xì)胞肺癌、鱗狀細(xì)胞癌和腺癌的準(zhǔn)確度達(dá)93.70%，即使是臨床上難以鑒別的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本通過檢測miRNAs也能準(zhǔn)確的進(jìn)行病理分型。PATNAIK等［6］研究發(fā)現(xiàn)，使用常規(guī)的組織學(xué)方法進(jìn)行非小細(xì)胞肺癌的病理分型，有21.00%是無法分型或錯誤分型的，聯(lián)合檢測miRNA-205和miRNA-375可提高準(zhǔn)確鑒別肺鱗腺癌率至96.00%。有研究人員使用PCR方法檢測肺癌組織和正常肺組織的石蠟包埋標(biāo)本的miRNA-205和miRNA-375的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，miRNA-205在鱗癌中的表達(dá)水平明顯上調(diào)，miRNA-375在小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)水平明顯上調(diào)［12］。LEBANONY等［13］評價miRNA-205和miRNA-21的表達(dá)水平對鑒別肺鱗腺癌的意義，他們發(fā)現(xiàn)miRNA-205在鱗腺癌中的表達(dá)水平明顯升高，被認(rèn)為是肺鱗癌的特異性生物標(biāo)志物，其準(zhǔn)確分型的敏感性為96.00%，特異性為90.00%，AUC為0.960。BISHOP等［14］旨在比較miRNA-205和miRNA-21的表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌顯微鏡下病理結(jié)果聯(lián)合免疫組化結(jié)果的吻合率，發(fā)現(xiàn)結(jié)果100.00%吻合。目前多個研究證實(shí)了miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375有助于肺癌分型，其他miRNA是否有助于肺癌的分型尚需進(jìn)一步研究驗證。因此，本研究選取了上述3種miRNAs進(jìn)行研究，且是檢測EBUSTBNA標(biāo)本而不是肺癌手術(shù)標(biāo)本。本研究結(jié)果顯示：miRNA-375在小細(xì)胞肺癌EBUS-TBNA標(biāo)本的表達(dá)水平明顯高于鱗癌和腺癌，提示miRNA-375可以鑒別小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌；在非小細(xì)胞肺癌中，miRNA-21在腺癌EBUS-TBNA標(biāo)本的表達(dá)水平明顯高于鱗癌，而miRNA-205在腺癌患者的EBUS-TBNA標(biāo)本的表達(dá)水平明顯低于鱗癌，提示miRNA-21和miRNA-205具有鑒別肺鱗腺癌的能力。聯(lián)合檢測EBUS-TBNA標(biāo)本的miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375，對肺癌病理分型有較高的價值。

目前免疫組化被認(rèn)為是肺癌分型有效的補(bǔ)充手段，TTF-1是肺腺癌公認(rèn)的免疫組化標(biāo)志物，P63是肺鱗癌公認(rèn)的標(biāo)志物。將無明確腺癌或鱗癌形態(tài)特征，且不表達(dá)肺癌常見表面標(biāo)志物的一類腫瘤定義為NSCC-NOS，此時，需要結(jié)合患者的影像學(xué)特征，排除肺轉(zhuǎn)移瘤的可能。這種形態(tài)學(xué)腫瘤，若其TTF-1表達(dá)陽性，則稱之為NSCC-NOS，傾向于腺癌；若P63表達(dá)陽性，則稱之為NSCC-NOS，傾向于鱗癌［3］。本研究對miRNA-21、miRNA-205鑒別肺鱗腺癌的效能和免疫組化指標(biāo)TTF-1、P63相比較，發(fā)現(xiàn)miRNA-21對診斷腺癌的特異度同TTF-1、但敏感度略低于TTF-1，而miRNA-205對診斷鱗癌的敏感度和特異度均優(yōu)于P63。

本研究還比較了35例肺癌患者和20例肺部良性病變患者的EBUS-TBNA標(biāo)本的miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)肺癌患者EBUS-TBNA標(biāo)本的miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375的相對表達(dá)量明顯高于肺部良性病變者，它們的敏感度和特異度分別為82.86%和95.00%、94.25%和95.00%、100.00%和90.00%，表明它們對肺癌的診斷有較高的價值。與既往研究結(jié)果相符［15-16］。

本研究證明了EBUS-TBNA標(biāo)本進(jìn)行miRNA的檢測是可行的。EBUS-TBNA獲取標(biāo)本的miRNA-21、miRNA-205和miRNA-375表達(dá)水平對肺癌的診斷和病理分型均有較大價值，尤其是對于無法獲取肺癌原發(fā)灶標(biāo)本而僅能獲取EBUS-TBNA標(biāo)本的患者或常規(guī)病理無法準(zhǔn)確分型的中低分化肺癌患者，其應(yīng)用價值更大，進(jìn)一步提高EBUS-TBNA技術(shù)的臨床應(yīng)用價值，對肺癌患者的個體化精準(zhǔn)治療有一定的指導(dǎo)意義。但本研究樣本量小，尤其是小細(xì)胞肺癌僅3例，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量驗證。

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（吳靜 編輯）

Classifi cation of lung cancer using three microRNAs in endobronchial ultrasound-guided tranbronchial needle aspiration samples

Xi Li， Jing-song Lin， Gui-yang Chen， Ming-zhen Chen， Yan-shan Lu， Fu Rong
（Department of Respiratory Medicine， the First People’s Hospital， Shunde， Guangdong 528300， China）

Objective To explore the signifi cance of three microRNAs expression in endobronchial ultrasoundguided transbronchial needle aspiration （EBUS-TBNA） samples for classification of lung cancer. Methods With qRT-PCR， the expression of miRNA-21， miRNA-205 and miRNA-375 were detected in EBUS-TBNA samples of 35 lung cancer patients. A group of 20 patients with benign mediastinal lymphadenopathy served as a control. The value of miRNA expressions for classifi cation of lung cancer was evaluated. Results The expressions of miRNA-21，miRNA-205 and miRNA-375 were significantly higher in EBUS-TBNA samples of lung cancer patients than those in control samples. The expressions of miRNA-21 were signifi cantly higher in EBUS-TBNA samples of lung adenocarcinoma than those in lung squamous cell carcinoma. The expressions of miRNA-205 were significantly higher in EBUS-TBNA samples of lung squamous cell carcinoma than those in lung adenocarcinoma. The expressions of miRNA-375 were signifi cantly higher in EBUS-TBNA samples of small cell lung cancer than those in non- smallcell lung cancer. ROC curve analysis showed that taking 1.945 as a cutoff value， the sensitivity and specifi city for miRNA-21 expression in EBUS-TBNA samples of lung adenocarcinoma were 65.00% and 100.00%； taking 2.305 as a cutoff value， the sensitivity and specifi city for miRNA-205 expression in EBUS-TBNA samples of lung squamous cell carcinoma were 91.67% and 100.00%. Conclusion EBUS-TBNA samples were suitable for detection of miRNA. Detecting miRNA-21， miRNA-205 and miRNA-375 expression could help diagnosis and classifi cation of lung cancer.

endobronchial ultrasound； transbronchial needle aspiration； microRNA； lung cancer； diagnosis；sub-classifi cation

R734.2

A

10.3969/j.issn.1007-1989.2016.10.014

1007-1989（2016）10-0060-06

2016-05-04

榮福，E-mail：rongfu828@sina.com；Tel：13702349838