山楂總黃酮提取純化工藝研究進(jìn)展

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摘要：山楂總黃酮是傳統(tǒng)中藥金銀花的主要有效成分之一，具有降壓、增加冠脈流量、強(qiáng)心、降血脂和抗動脈粥樣硬化等作用。綜述國內(nèi)近幾年來山楂總黃酮的提取分離純化技術(shù)研究進(jìn)展，為進(jìn)一步開展山楂研究提供參考。

關(guān)鍵詞：山楂；總黃酮；提??；純化

中圖分類號：R932 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2016）07-0051-02

山楂為薔薇科山楂屬植物山里紅（Crataegus pinnatifida Bge.var.maju N.E.Br）或山楂（Crataegus pinnatifida Bge）的干燥成熟果實(shí)，為藥食同源植物。據(jù)報(bào)道，山楂的果、核、葉均含有豐富的黃酮類物質(zhì)，具有降壓、增加冠脈流量、強(qiáng)心、降血脂和抗動脈粥樣硬化等作用，臨床試驗(yàn)證明其療效顯著且安全無毒副作用。國內(nèi)對山楂總黃酮的提取、分離純化工藝等進(jìn)行了大量研究，在查閱收集大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，綜述山楂總黃酮的提取、分離純化工藝研究進(jìn)展，旨在為未來研究提供參考。

1 山楂總黃酮化合物提取方法

1.1 溶劑提取法

溶劑提取山楂總黃酮是較為傳統(tǒng)的提取工藝，按提取介質(zhì)分為水提法和醇提法，按提取方式分為煎煮法、回流法和滲漉法。

黃欣欣等采用響應(yīng)面法優(yōu)化回流提取大果山楂總黃酮的工藝條件，結(jié)果表明：乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度和提取時間對大果山楂總黃酮提取量有極顯著影響；提取溫度與乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時間與提取溫度的交互作用對提取量也有極顯著影響；提取溫度與料液比的交互作用有顯著影響?；亓魈崛〈蠊介傸S酮的最佳工藝條件為：以50%乙醇為提取溶劑，在提取溫度70 ℃、料液比1︰18的條件下提取3.5 h，大果山楂總黃酮提取量達(dá)22.68 mg/g。

蔡向杰等以乙醇為提取試劑，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上確定最佳工藝條件：乙醇濃度為80%，提取溫度為55 ℃，提取時間為2.5 h，提取次數(shù)為3次，山楂總黃酮含量高達(dá)16.085 3 mg/g。

張明采用單因素和正交試驗(yàn)研究不同工藝條件對山楂黃酮提取效率的影響，結(jié)果表明：山楂黃酮提取的最適宜方法為滲漉法，其最佳工藝參數(shù)是溶劑為50%的乙醇，料液比1︰8 （g/mL），浸泡時間72 h，流速為中速（3 mL/min）。

1.2 超聲波輔助提取

超聲波輔助提取是在水浸提的同時加超聲波輔助，不僅縮短提取時間、提高提取率，同時避免高溫對有效成分的影響。郭文娟等通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)確定的超聲輔助提取總黃酮的最優(yōu)提取工藝條件為：料液比1︰25（每克山楂核加入25 mL提取劑，下同），加入體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇，在60 ℃下用250 W超聲輔助提取40 min，山楂核中總黃酮的提取率可達(dá)到7.89%。覃學(xué)謙采用正交試驗(yàn)法，以廣山楂總黃酮的含量為指標(biāo)優(yōu)化超聲提取廣山楂總黃酮工藝條件，確定影響因素依次為提取溶劑體積分?jǐn)?shù)>溶劑用量﹥提取次數(shù)﹥超聲提取時間；經(jīng)優(yōu)化的廣山楂總黃酮提取工藝為：加入16倍量70%乙醇超聲提取3次，每次提取時間40 min，廣山楂總黃酮含量可達(dá)3.49%。李利華等以山楂為原料，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化山楂總黃酮的超聲波輔助提取工藝條件，其結(jié)果表明，乙醇體積分?jǐn)?shù)和超聲浸提溫度對山楂總黃酮提取率具有顯著影響；山楂總黃酮超聲波輔助提取的最佳工藝條件是：乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，超聲浸提溫度50 ℃，浸提時間60 min，料液比1︰60（g︰mL），提取率為7.61%。

1.3 微波輔助提取

微波輔助提取是在水浸提的同時加入微波。與傳統(tǒng)的水浸提法相比，微波輔助提取具有選擇性高、操作時間短、溶劑消耗小、有效成分收率高的特點(diǎn)。郭梅等利用微波輔助提取山楂中黃酮類化合物，采用正交試驗(yàn)優(yōu)化工藝條件，結(jié)果表明，影響山楂黃酮類化合物得率的主次因素順序?yàn)槲⒉ㄝ腿r間>微波功率>料液比>乙醇濃度；最佳的提取工藝參數(shù)為微波功率400 W，萃取時間120 s，乙醇濃度60%，料液比1︰40（g/mL），黃酮類化合物的得率為3.19%。李敏等用微波提取法提取山楂總黃酮，最佳提取工藝條件為乙醇濃度50%、提取時間20 min、微波功率300 W、料液比1︰30（g/mL），總黃酮提取率可達(dá)13.4%。

1.4 酶輔助提取

酶解法提取大棗多糖主要是利用酶解使山楂結(jié)構(gòu)變得松散，降低與原料的結(jié)合力，利于黃酮浸出。劉曉光等采用纖維酶法提取山楂黃酮，考察纖維素酶濃度、pH值、溫度、時間、料液比5個單因素，結(jié)果表明：最佳條件為酶質(zhì)量濃度0.15 mg/mL，酶解pH值5.0，酶解溫度55 ℃，酶解時間90 min，料液比為1︰12（g︰g），黃酮提取率可達(dá)90%，且黃酮類化合物活性依然存在。高文秀等采用復(fù)合酶解法協(xié)同超聲波提取、纖維素酶酶解法協(xié)同超聲波法提取和果膠酶酶解法輔助超聲波法提取山楂中總黃酮，均取得了較高的提取率。

1.5 其它提取方法

除以上常用提取方法外，也有很多研究采用其它提取技術(shù)，如超聲波-微波輔助堿液提取、逆流提取、表面活性劑提取、表面活性劑CTMAB-微波協(xié)同提取、加壓溶劑萃取法提取等，均取得了較好的提取效果。

2 山楂總黃酮的分離純化

2.1 大孔樹脂柱層析

大孔樹脂具有吸附量大、選擇性好、易解吸、易再生、成本低、效率高、特別適于水溶性化合物提取分離等優(yōu)點(diǎn)。利用大孔吸附樹脂分離純化綠原酸，工藝較簡單、成本低、產(chǎn)率高。

張吉祥等比較了10種大孔吸附樹脂對山楂黃酮的靜態(tài)吸附效果，確定D101樹脂最佳工藝參數(shù)為：進(jìn)樣黃酮濃度18.75 mg/mL、pH 3～4、上樣流速1 BV/h、洗脫液乙醇體積分?jǐn)?shù)75%、洗脫液流速1 BV/h；上樣量達(dá)到6 BV時，樹脂達(dá)到吸附平衡，當(dāng)洗脫液用量為3 BV時，達(dá)到洗脫終點(diǎn)；所獲得純化產(chǎn)物中的蘆丁、金絲桃苷和槲皮素總含量達(dá)到65.47%，回收率為86.22%。

李紅丹比較13種大孔樹脂對4種山楂果實(shí)總黃酮的吸附分離效果，選擇HPD722型大孔樹脂最佳純化工藝條件為：上樣流速0.84 mL/min，總黃酮經(jīng)樹脂充分吸附后，加40%乙醇動態(tài)洗脫。經(jīng)HPD722型大孔吸附樹脂純化后，4種山楂的總黃酮、蘆丁、金絲桃苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)和抗氧化活性分別顯著提高。

董恒穎等對ADS系列大孔吸附樹脂分離純化山楂葉總黃酮的工藝條件進(jìn)行篩選，確定ADS-8型大孔吸附樹脂的最佳工藝條件為：上柱液pH值4.5，上柱液總黃酮含量1 000 mg/L，以流速3 BV/h上柱，上樣量100 mL（約5 BV）；所用洗脫劑乙醇體積分?jǐn)?shù)為40%，以2 BV/h的流速洗脫，洗脫劑用量150 mL（約7.5 BV），所得產(chǎn)品的總黃酮含量達(dá)80%。

2.2 其它分離純化方法

除以上常用的樹脂分離純化方法外，還有很多研究采用了其他技術(shù)，如聚酰胺樹脂法、膜技術(shù)偶合樹脂法、不同金屬離子溶液（銅，鋅，鐵，鋁）純化法、微濾-超濾法與醇沉法等，均取得了較好的提取效果。

3 結(jié)語

山楂作為傳統(tǒng)中藥，對機(jī)體具有廣泛作用，是國家第一批藥食兼用植物，具有極高的營養(yǎng)價值和保健作用，其有效成分山楂黃酮類化合物是發(fā)揮作用的主要成分。然而，關(guān)于山楂黃酮類化合物的研究還需進(jìn)一步深入，通過大量的試驗(yàn)研究使山楂用于制藥生產(chǎn)和新型保健用品開發(fā)。

參考文獻(xiàn)

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