血清胸腺嘧啶核苷激酶1水平與肺癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

孫達(dá)統(tǒng) 王 琳 曾愛輝

(海南省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,海南 ?？?570311)

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血清胸腺嘧啶核苷激酶1水平與肺癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

孫達(dá)統(tǒng) 王 琳 曾愛輝

(海南省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,海南 ?？?570311)

目的 探討肺癌患者血清胸腺嘧啶核苷激酶(TK)1與肺癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。方法 肺癌患者80例為肺癌組，取66例健康者為對照組，采用化學(xué)發(fā)光法檢測TK1表達(dá)，并收集患者臨床病理特征與1、3年生存情況。結(jié)果 肺癌患者中TK1陽性率為40.00%(32/80)，顯著高于健康對照組的13.64%(9/66)(P<0.05)，肺癌患者TK1陽性率在性別、吸煙史、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理類型上未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TMN分期有關(guān)(P<0.05)；肺癌TK1陽性與陰性患者在1年生存率上未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，但3年生存率陽性患者明顯低于陰性患者(P<0.05)。結(jié)論 血清TK1在肺癌患者中高表達(dá)，并與患者發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TMN分期密切相關(guān)，且預(yù)后生存率低。因此，血清TK1可作為指導(dǎo)肺癌臨床分期及判斷預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測指標(biāo)。

胸腺嘧啶核苷激酶；肺癌

有研究報(bào)道胸腺嘧啶核苷激酶(TK)1在惡性腫瘤中陽性率較高，能提高腫瘤的早期診斷〔1〕。TK1與腫瘤細(xì)胞的生長增殖密切相關(guān)，是胸腺嘧啶核苷合成的關(guān)鍵酶之一，由于惡性腫瘤細(xì)胞DNA合成增加，TK1也隨之增加，是評估細(xì)胞增殖速度的重要標(biāo)志之一〔2〕。但TK1在提示肺癌患者病理特征及揭示患者預(yù)后的報(bào)道較少。本研究擬分析肺癌患者血清中TK1水平與病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年6月至2013年6月我院收治的肺癌初治患者80例，所有患者均經(jīng)病理診斷為原發(fā)性肺癌，且此前未接受過肺癌相關(guān)化療、放療及手術(shù)治療；排除嚴(yán)重感染未控制者、懷孕或伴隨其他惡性腫瘤者，男51例，女29例；平均年齡(51.43±12.74)歲。非小細(xì)胞肺癌69例(鱗癌30例，腺癌39例)，Ⅰ期28例，Ⅱ期11例，Ⅲ期5例，Ⅳ期25例；小細(xì)胞肺癌11例，其中局限3例，廣泛期8例。另取入組本院體檢中心健康人群66例作為健康對照組，男42例，女24例，平均年齡(50.95±13.38)歲。兩組平均年齡及性別比未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.989)。本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會審批，且患者知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 TK1檢測方法 抽取受試者晨起空腹全血5 ml，高速離心后取上層血清備用。將內(nèi)含硝酸纖維素膜的模板平放于濾紙上，將待測血清每樣品3 μl點(diǎn)樣到標(biāo)準(zhǔn)品后面膜上，室溫下自然晾干。將配置好的稀釋液震蕩洗膜2次，每次5 min。棄去稀釋液，加入封閉液，繼續(xù)震蕩封閉1 h，并加入一抗(TK1-IgY)，4℃過夜。次日棄去反應(yīng)液并漂洗3次后，加入二抗(生物素化抗IgY二抗)，室溫下震蕩40 min。棄去反應(yīng)液并洗液漂洗3次后，加鏈霉親和素-酶復(fù)合物并震蕩1 h，然后繼續(xù)棄反應(yīng)液并洗滌3次。加入電化學(xué)反應(yīng)發(fā)光試劑過膜浸潤。最后將膜放入化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，上述步驟重復(fù)3次，取均值。采用TK1診斷試劑盒(深圳華瑞同康生物技術(shù)公司)：血清TK1>2 pmol/L定義為陽性〔3〕。

1.2.2 標(biāo)本的采集與隨訪 收集所有患者年齡、性別、臨床病理學(xué)特征等數(shù)據(jù)。肺癌早期定義為非小細(xì)胞肺癌TNM分期Ⅰ/Ⅱ期與小細(xì)胞肺癌局限期，晚期定義為非小細(xì)胞肺癌TNM分期Ⅲ/Ⅳ期及小細(xì)胞肺癌廣泛期。采用電話隨訪方式，分別于患者診斷肺癌后1年與3年時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行電話隨訪。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 肺癌組與健康對照組TK1陽性率對比 肺癌組中TK1陽性患者32例(40.00%)，健康對照組患者中9例(13.64%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.446，P=0.000)。

2.2 肺癌組患者TK1陽性與臨床病理特征的關(guān)系 肺癌組患者TK1陽性率與性別、吸煙史、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理類型無明顯相關(guān)(P>0.05)，而與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TMN分期有關(guān)(P<0.05)。見表1。

表1 肺癌組患者TK1陽性與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 肺癌患者TK1陽性與生存率的關(guān)系 肺癌TK1陽性患者〔20例(62.50%)〕與陰性患者〔38例(79.17)%〕1年生存率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，但3年生存率陽性患者〔13例(40.63%)〕明顯低于陰性患者〔33例(68.75%)〕(P<0.05)。

3 討 論

TK是胸腺嘧啶核苷轉(zhuǎn)化成單磷酸胸腺嘧啶的關(guān)鍵酶〔4〕，在機(jī)體中有兩種同工酶，分別是TK1和TK2，編碼TK1的基因位于人染色體17號q21-22位點(diǎn)上，分子量為96 kD，是一個(gè)四聚體，在胎兒發(fā)育以后逐漸降低，直至成人只存在極低量的TK1〔5〕。研究證實(shí)，TK1與細(xì)胞分裂密切相關(guān)，在細(xì)胞分裂周期中，G1-S-G2期TK1含量逐步增高，直至G2期到達(dá)頂峰。因而，TK1 mRNA與TK1可稱為細(xì)胞增殖的標(biāo)記物〔6〕。Alegre等〔7〕研究證實(shí)在肺癌患者中，TK1是一項(xiàng)特異性較高的細(xì)胞增殖標(biāo)記物，可一定程度上提示肺癌的發(fā)生發(fā)展，可用于輔助肺癌的診斷。Korkmaz等〔8〕發(fā)現(xiàn)TK1水平的高低在提示肺癌患者的預(yù)后上也具有一定臨床價(jià)值〔9〕。

本研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了血清TK1水平有助于臨床肺癌的診斷。國外有學(xué)者研究表明：血清TK1陽性與乳腺癌患者TNM分期、腫瘤壞死、血管侵犯等密切相關(guān)，且多變量分析提示血清TK1是乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)〔9〕。在預(yù)后分析上，本研究發(fā)現(xiàn)雖然TK1陽性組患者與陰性組患者在3年生存率上出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這可能是因?yàn)門K1作為一個(gè)單磷酸胸腺嘧啶的關(guān)鍵酶，一定程度上提示了DNA復(fù)制和細(xì)胞增殖的活性。TK1陽性患者肺癌細(xì)胞增殖活性高于TK1陰性患者，因此遠(yuǎn)期預(yù)后較TK1陰性患者更差。Huang等〔10〕報(bào)道高TK1水平的乳腺癌患者5年生存期遠(yuǎn)低于低TK1水平的患者，且高TK1水平與腫瘤復(fù)發(fā)密切相關(guān)。結(jié)合本研究分析結(jié)果，提示血清TK1可在肺癌患者中作為判斷肺癌預(yù)后的一個(gè)輔助臨床指標(biāo)。

1 Lopez-Martinez B，Vilchis-Ordonez A，Salazar-Garcia M，etal.Thymidine kinase：a biomarker for recently diagnosed acute leukemia in pediatric patients according to the cell line involved〔J〕.Arch Med Res，2015;46(8):630-4.

2 Ji Y，Wu XB，Chen JY，etal.Serum thymidine kinase 1 levels correlate with clinical characteristics of esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Int J Clin Exp Med，2015；8(8)：12850-7.

3 Chen ZH，Huang SQ，Wang Y，etal.Serological thymidine kinase 1 is a biomarker for early detection of tumours--a health screening study on 35，365 people，using a sensitive chemiluminescent dot blot assay〔J〕.Sensors(Basel)，2011；11(12)：11064-80.

4 Gatt ME，Goldschmidt N，Kalichman I，etal.Thymidine kinase levels correlate with prognosis in aggressive lymphoma and can discriminate patients with a clinical suspicion of indolent to aggressive transformation〔J〕.Anticancer Res，2015；35(5)：3019-26.

5 Timm J，Bosch-Navarrete C，Recio E，etal.Structural and kinetic characterization of thymidine kinase from leishmania major〔J〕.PLoS Negl Trop Dis，2015；9(5)：e3781.

6 Fiala O，F(xiàn)inek J，Buchler T，etal.The association of serum carcinoembryonic antigen，carbohydrate antigen 19-9，thymidine kinase，and tissue polypeptide specific antigen with outcomes of patients with metastatic colorectal cancer treated with bevacizumab：a retrospective study〔J〕.Target Oncol，2015；10(4)：549-55.

7 Alegre MM，Weyant MJ，Bennett DT，etal.Serum detection of thymidine kinase 1 as a means of early detection of lung cancer〔J〕.Anticancer Res，2014；34(5)：2145-51.

8 Korkmaz T，Seber S，Okutur K，etal.Serum thymidine kinase 1 levels correlates with FDG uptake and prognosis in patients with non-small cell lung cancer〔J〕.Biomarkers，2013；18(1)：88-94.

9 Nisman B，Allweis T，Kadouri L，etal.Comparison of diagnostic and prognostic performance of two assays measuring thymidine kinase 1 activity in serum of breast cancer patients〔J〕.Clin Chem Lab Med，2013；51(2)：439-47.

10 Huang ZH，Tian XS，Li R，etal.Elevated thymidine kinase 1 in serum following neoadjuvant chemotherapy predicts poor outcome for patients with locally advanced breast cancer〔J〕.Exp Ther Med，2012；3(2)：331-5.

〔2016-03-03修回〕

(編輯 袁左鳴)

孫達(dá)統(tǒng)(1977-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事肺部惡性腫瘤臨床診治方面的研究。

R734

A

1005-9202(2016)19-4799-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.19.057