小鼠腦缺氧后SA1在神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá)變化

盧 佳 高艷斌 馬 可 陳志明 王治軍

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院眼科，吉林 長(zhǎng)春 130033)

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小鼠腦缺氧后SA1在神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá)變化

盧 佳 高艷斌1馬 可2陳志明3王治軍4

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院眼科，吉林 長(zhǎng)春 130033)

目的 檢測(cè)小鼠腦缺氧后SA1在神經(jīng)細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)變化。方法 將60只小鼠共分為10組，采用手術(shù)方式結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈，分別于術(shù)后3、6、9、12 h、1、3、5、7 d處死。逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增SA1 cDNA，應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)其轉(zhuǎn)錄表達(dá)變化。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組6 h后SA1表達(dá)增高，其表達(dá)量隨時(shí)間延長(zhǎng)增高(P<0.05)。結(jié)論 SA1在小鼠腦缺氧后表達(dá)增高，說(shuō)明腦缺氧后細(xì)胞染色體黏附發(fā)生改變。

腦缺氧；SA1

在細(xì)胞分裂過(guò)程中，染色體完整復(fù)制后均勻分配到子代細(xì)胞中對(duì)于遺傳的穩(wěn)定性至關(guān)重要，不正確的染色體分離與腫瘤的發(fā)生、發(fā)育異常及老化密切相關(guān)〔1,2〕。黏附復(fù)合物在染色體分離過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用〔3〕。盡管染色體間黏附在細(xì)胞復(fù)制過(guò)程中建立，但黏附復(fù)合物在G1期即通過(guò)SA1和SA2蛋白裝配到染色體上，故SA1蛋白在細(xì)胞染色體的正確分離調(diào)控過(guò)程中發(fā)揮無(wú)法替代的作用〔4,5〕。但關(guān)于SA1蛋白在腦缺氧后的表達(dá)變化卻未見報(bào)道。本研究擬探討SA1表達(dá)與小鼠腦缺氧后不同時(shí)間段的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組及模型建立 雄性ICR小鼠100只，隨機(jī)分為正常對(duì)照及腦缺氧組。腦缺氧組分別于術(shù)后3、6、9、12 h、1、3、5、7 d(n=6)處死，共計(jì)8組，每組6只。處死后取腦組織并迅速置于液氮中速凍，2 min后取出保存于-80℃冰箱中。采用手術(shù)結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈，用 10%水合氯醛深度麻醉，剪去頸部皮毛，消毒皮膚后沿中線切開皮膚，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈后，結(jié)扎后縫合皮膚，置鼠籠(37℃，給氧氣)喂養(yǎng)。正常對(duì)照組僅切開頸部皮膚，不做任何處理。

1.2 RNA提取 按照100 mg/ml Trizol試劑將裂解腦組織在室溫孵育10 min；加0.2 ml氯仿后混勻，室溫孵育10 min后，12 000 r/min(4℃)離心10 min。吸取上層水相置于另一EP管中，加等量異丙醇，室溫孵育10～20 min,12 000 r/min(4℃)離心10 min。加1 ml 75%乙醇進(jìn)行洗滌，12 000 r/min(4℃)離心5 min，棄上清；沉淀室溫下自然干燥；用DEPC水溶解RNA沉淀。采用RT-PCR試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄PCR。

1.3 RT-PCR檢測(cè) 取0.2 ml薄壁PCR管，分組編號(hào)。向各管中加入2×qPCR TaqMix 12.5 μl，10 μmol/L各基因正反向引物混合物1 μl。引物序列GAPDH正義TGTGGGCATCAATGGATTTGG，反義ACACCATGTATTCCGGGTCAAT，片段長(zhǎng)度116 bp，溫度61℃,SA1正義TGGCAGCGAGCTTGAAGAAA，反義CCACCTCAAATAATGTGACAGGC，片段長(zhǎng)度206 bp，溫度62℃。管中不加模板用作陰性對(duì)照。各管補(bǔ)加水至25 μl?；靹蛑糜跓晒舛縋CR儀中。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

在實(shí)驗(yàn)組中，SA1在顱腦缺氧后表達(dá)持續(xù)增高；而對(duì)照組腦組織中SA1表達(dá)量穩(wěn)定；SA1在小鼠腦缺氧6 h后表達(dá)增高，缺氧1 d后達(dá)峰值。見表1。

表1 SA1在小鼠缺氧后轉(zhuǎn)錄表達(dá)變化

3 討 論

染色體的正確分離與基因遺傳穩(wěn)定性密切相關(guān)，不正確的染色體分離會(huì)導(dǎo)致非整倍體細(xì)胞的產(chǎn)生，從而引起發(fā)育異常、凋亡發(fā)生甚至腫瘤的產(chǎn)生。SA1蛋白對(duì)于細(xì)胞分裂過(guò)程中染色體的正確分離有重要作用，源于其在有絲分裂G1期可介導(dǎo)黏附復(fù)合物裝配于染色體上。黏附復(fù)合物由SMC3、SMC1、SCC1及SCC3構(gòu)成，目前認(rèn)為上述復(fù)合物可形成環(huán)狀拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，從而將姐妹染色體包繞于其中，盡管SA1及SA2將黏附復(fù)合物裝配于染色體的具體機(jī)制仍然不清，但SA1在染色體分離調(diào)控過(guò)程中的重要作用已被眾多學(xué)者所證實(shí)〔6,7〕?；蚪M測(cè)序結(jié)果證實(shí)，SA1基因突變可直接導(dǎo)致發(fā)育性疾病的產(chǎn)生。但其與腦缺氧的關(guān)系卻未見有報(bào)道，本研究證實(shí)，在急性腦缺氧神經(jīng)細(xì)胞中，SA1的表達(dá)量隨時(shí)間改變而發(fā)生改變，提示腦缺氧后神經(jīng)細(xì)胞的染色體分離會(huì)受到很大影響，而對(duì)腦缺氧后染色體分離調(diào)控的研究可能對(duì)腦組織修復(fù)具有重要意義。

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〔2016-05-26修回〕

(編輯 曲 莉)

吉林省科技廳國(guó)際科技合作項(xiàng)目(20160414048GH)

1 長(zhǎng)春市公安司法鑒定中心 2 吉林大學(xué)第一醫(yī)院兒科急診

3 吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)系 4 吉林大學(xué)第一醫(yī)院小兒外科

王治軍(1979-)，男，主治醫(yī)師，主要從事小兒外科疾病的診治研究。

盧 佳(1979-)，女，主治醫(yī)師，主要從事眼科常見病及眼科病理學(xué)研究。

R36

A

1005-9202(2016)19-4711-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.19.017