半枝蓮多糖對H22荷瘤小鼠組織蛋白質(zhì)的影響

許曉義 武蕾蕾 李 麗 張曉莉 關(guān)利新 遲硯軍 宋高臣

(牡丹江醫(yī)學院，黑龍江 牡丹江 157011)

?

半枝蓮多糖對H22荷瘤小鼠組織蛋白質(zhì)的影響

許曉義 武蕾蕾 李 麗 張曉莉 關(guān)利新 遲硯軍1宋高臣

(牡丹江醫(yī)學院，黑龍江 牡丹江 157011)

目的 比較半枝蓮多糖(SBPS)對H22荷瘤小鼠組織蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳圖譜的影響。方法 建立H22荷瘤小鼠動物模型，分別取H22荷瘤小鼠和SBPS組小鼠瘤組織，利用雙向電泳技術(shù)分離兩組瘤組織的蛋白質(zhì)，獲得圖譜后通過ImageMaster 5.0軟件分析兩組蛋白表達的差異性。結(jié)果 兩組差異明顯的蛋白點有14個，其中SBPS組6個點高表達，8個低表達；14個點僅在荷瘤組表達，12個點在SBPS組特異表達。結(jié)論 SBPS可以通過調(diào)節(jié)H22肝癌瘤組織中部分蛋白質(zhì)的表達，實現(xiàn)對肝癌的治療作用。

半枝蓮多糖；肝癌

半枝蓮多糖(SBPS)是中藥半枝蓮重要的化學組分，具有提高免疫力以及一定的抗腫瘤作用，并對抗腫瘤藥物起到增效減毒作用〔1,2〕。本文擬利用雙向凝膠電泳技術(shù)，探討SBPS治療肝癌在蛋白質(zhì)組水平的機制。

1 材料與方法

1.1 動物與廇株 昆明種小鼠20只，18～22 g，黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，小鼠轉(zhuǎn)移性腹水型肝癌細胞株H22由中國醫(yī)學科學院腫瘤研究所引進。

1.2 主要試劑與儀器設(shè)備 SBPS(寧波德康生物制品有限公司)，AgNO3(和光純業(yè)工業(yè)株式會社)，IPG Buffer(GE)，Tris(Sigma)，DTT(Sigma)，固相pH梯度干膠條(GE)，Ettan DALT twelve電泳系統(tǒng)(GE)，IPGphor3等電聚焦儀(GE)，ImageMaster 5.0分析軟件(GE)等。

1.3 方法

1.3.1 H22荷瘤小鼠模型建立 無菌條件下抽取接種第6～7天生長良好的H22肝癌小鼠的腹水(活癌細胞數(shù)>97%)，無菌生理鹽水1∶3稀釋，調(diào)整細胞濃度約2×107個/ml，0.2%臺盼藍染色，計活細胞數(shù)大于95%，小鼠右前肢腋部皮下接種0.2 ml/只制備實體瘤模型。設(shè)立荷瘤組與SBPS組，每組10只，SBPS組在接種6 h后每天腹腔注射SBPS 100 mg/kg，荷瘤組給等體積生理鹽水，同條件飼養(yǎng)。

1.3.2 組織收集及樣品處理 將各組小鼠處死，分別取兩組瘤組織各約0.4 cm×0.4 cm，用無菌條件下生理鹽水反復(fù)清洗，液氮保存。取凍存組織，稱重30～90 mg，研磨勻漿后置于450 μl裂解液中混勻。37℃孵育1 h，10℃，40 000 r/min離心15 min，吸取上清液。

1.3.3 雙向凝膠電泳 取兩組小鼠組織樣品，按PI進行第一向固相pH梯度等電聚焦分離，再根據(jù)分子量進行第二向SDS-PAGE分離，獲得兩組蛋白質(zhì)圖譜。

1.3.4 圖像掃描及分析 運用ImageMaster 5.0軟件對蛋白質(zhì)圖譜進行分析，找出差異表達蛋白質(zhì)點。

2 結(jié) 果

2.1 對照組和荷瘤組組織的2-DE圖譜 見圖1。

圖1 荷瘤組 (左)和SBPS組(右)蛋白表達圖譜

2.2 對照組與荷瘤組差異蛋白點分析 見圖2,表1，表2。

圖2 荷瘤組與SBPS組的差異蛋白點

表1 荷瘤組與SBPS組表達量相差3倍以上的蛋白質(zhì)點

“+”表示在SBPS組高表達；“-”表示在SBPS組低表達

表2 荷瘤組與SBPS組特有的蛋白質(zhì)點

3 討 論

半枝蓮作為一種常用的抗腫瘤中藥，已在臨床上應(yīng)用于治療肝癌、胃癌、肺癌、直腸癌、鼻咽癌等，確切療效。SBPS作為半枝蓮抗腫瘤作用的主要成分已從不同角度得到證實，基于我們前期發(fā)現(xiàn)SBPS可明顯抑制小鼠HepA瘤(抑瘤率可達34.35%)〔3〕；其抗肝癌的作用機制體現(xiàn)在可控某些癌基因、抑癌基因和蛋白的表達〔4～6〕；對化療藥物有增效減毒作用〔7～9〕；對肝癌小鼠的免疫功能有調(diào)節(jié)作用〔10〕等，本研究通過雙向凝膠電泳技術(shù)分析差異蛋白表達圖譜，發(fā)現(xiàn)3倍以上變化的點有14個，在SBPS組中6個蛋白點表達上調(diào)，8個下調(diào)；12個蛋白點在SBPS組特異表達，14個表達缺失，說明SBPS的抗肝癌作用可能與這些異常表達的蛋白有關(guān)，這些蛋白為我們進一步研究其抗癌作用靶點提供了重要信息和技術(shù)支持。

1 張 怡，張甘霖，王笑民.中藥多糖抗腫瘤機制研究概況及思考〔J〕.中華中醫(yī)藥學刊，2015；(10)：2321-3.

2 趙鐵華，鄧淑華，楊鶴松，等.半枝蓮總黃酮抗甲型H1N1流感病毒感染的藥效學研究〔J〕.中國藥理學通報，2014；30(1)：147-8.

3 宋高臣，于英君，王喜軍.半枝蓮多糖的抗腫瘤作用及其調(diào)節(jié)免疫的實驗研究〔J〕.世界科學技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2011；13(4)：641-3.

4 宋高臣，張高坤，公長春，等.半枝蓮多糖對HepA荷瘤小鼠抑癌基因表達的影響〔J〕.中國醫(yī)藥導刊，2010；12(6)：1020-1.

5 宋高臣，于水瀾，曾 奇，等.SBPS對荷瘤小鼠癌基因表達的影響〔J〕.中國醫(yī)藥導刊，2010；12(5)：833-4.

6 于水瀾，于英君，許曉義，等.半枝蓮多糖對肝癌小鼠差異表達蛋白質(zhì)影響的實驗研究〔J〕.中醫(yī)藥信息，2014；17(2)：15-8.

7 宋高臣，王桂云，劉洪鳳，等.半枝蓮多糖對環(huán)磷酰胺增效減毒作用的實驗研究〔J〕.中醫(yī)藥信息，2010；27(4)：107-9.

8 宋高臣，徐 薇，張 杰，等.半枝蓮多糖協(xié)同環(huán)磷酰胺治療肝癌的作用機制研究〔J〕.中醫(yī)藥學報，2010；38(4)：48-50.

9 于英君，贠可力，周 群，等.半枝蓮多糖輔助環(huán)磷酰胺對H22小鼠血清IL-2、IL-12含量的影響〔J〕.中醫(yī)藥信息，2009；26(6)：24-6.

10 于英君，周 群，贠可力，等.半枝蓮多糖輔助化療藥物對小鼠血清TNF-α、VEGF表達的影響〔J〕.中醫(yī)藥信息，2010；27(1)：29-31.

〔2016-06-13修回〕

(編輯 郭 菁)

牡丹江市科學技術(shù)計劃項目(Z2014s031)；黑龍江省普通高等學校青年學術(shù)骨干支持計劃項目(1251G066)

1 牡丹江市第一人民醫(yī)院

宋高臣(1971-)，男，教授，博士，主要從事中藥抗腫瘤分子生物學機制研究。

許曉義(1981-)，男，講師，碩士，主要從事中藥抗腫瘤分子生物學機制研究。

R735

A

1005-9202(2016)19-4709-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.19.016