丹紅注射液治療糖尿病腎病的臨床效果及對血小板CD 62p、PAC-1表達的影響

李明霞 趙軼峰 王俊芳 左麗娟 張志英 任衛(wèi)東 李秀娟

河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北張家口075000

丹紅注射液治療糖尿病腎病的臨床效果及對血小板CD 62p、PAC-1表達的影響

李明霞 趙軼峰 王俊芳 左麗娟 張志英 任衛(wèi)東 李秀娟

河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北張家口075000

目的探討丹紅注射液治療糖尿病腎病的臨床效果及對血小板CD62p、PAC-1表達的影響。方法選取2014年12月～2015年12月河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院收治的糖尿病腎病患者95例，將其隨機分為觀察組（50例）和對照組（45例）。對照組給予常規(guī)降糖、降壓、降脂藥物治療，觀察組在此基礎(chǔ)上加用丹紅注射液治療，治療2周，觀察兩組治療前后血脂、腎功能相關(guān)指標，并檢測血小板CD62p、PAC-1的表達。結(jié)果觀察組總有效率為90.0%（45/50），對照組總有效率為64.4%（29/45），差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.905，P＜0.01）。兩組治療前血脂、尿蛋白排泄率（UAER）、尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、CD62p、PAC-1比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。對照組治療前后總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），觀察組治療后TC、TG、LDL-C明顯下降，HDL-C明顯升高，且與對照組治療后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。兩組治療后UAER、BUN和SCr均較治療前明顯改善，但觀察組下降更顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。觀察組治療后血小板CD62p、PAC-1陽性表達率明顯低于治療前及對照組治療后（P＜0.05），而對照組治療前后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論丹紅注射液可明顯抑制糖尿病腎病患者CD62p、PAC-1的表達，減少尿蛋白，降低血脂，改善腎功能。

糖尿病腎??；丹紅注射液；CD 62p；PAC-1；臨床療效

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy）是指糖尿病常見的慢性微血管并發(fā)癥，其主要表現(xiàn)為尿白蛋白排泄率增加、進行性腎小球濾過率降低、血壓升高，極易發(fā)展為終末期腎病、慢性腎功能衰竭甚至死亡［1-2］。糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展與遺傳因素、糖、脂類代謝異常、氧化應(yīng)激等多種因素有關(guān)，其中血小板活化引起的微血栓形成是重要因素［3］。

近年來，血小板活化依賴性顆粒表面膜蛋白（p1ate1et activ-ation dependent granu1eex terna1membranc protein，CD62p）和血小板激活復(fù)合物-1（p1ate1et activation comp1ex-1，PAC-1）在糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展中的作用成為研究熱點。CD62p系選擇素家族黏附分子，定位于血小板α顆粒膜表面，血小板活化后，其質(zhì)膜上的糖蛋白發(fā)生分子構(gòu)象的改變，促進血小板間的黏附及聚集［4］。PAC-1是目前最新激活的GPⅡb/Ⅲa特異性單克隆抗體，與活化血小板上的GPⅡb/Ⅱa特異性結(jié)合，是反映血小板活化的重要早期標志物［5］。本研究通過觀察糖尿病腎病患者血糖、血脂、腎功能及血CD62p、PAC-1的表達等情況，旨在探討丹紅注射液在抑制血小板活化、改善腎功能方面的作用，并初步探討其機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年12月～2015年12月河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院（以下簡稱“我院”）內(nèi)分泌科、腎內(nèi)科收治的10年以上2型糖尿病患者95例，研究計劃經(jīng)我院倫理委員會批準，所有患者均書面知情同意參加本研究。糖尿病腎病診斷標準［6-7］：6個月內(nèi)至少連續(xù)2次以上尿蛋白排泄率（UAER）在20～200μg/min之間，排除腎臟病、心衰、腫瘤等其他引起蛋白尿排泄增加的因素。排除標準：服用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）類藥物、慢性心力衰竭、心肌梗死、急性腦血管病、嚴重肝功能異常、尿毒癥、庫欣綜合征、惡性腫瘤等疾病。將所選患者隨機分為觀察組（50例）和對照組（45例），其中觀察組男27例，女23例；平均年齡（55.8±6.3）歲；平均糖尿病病程（14.3±2.4）年；收縮壓（129.15±14.62）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），舒張壓（68.86±9.08）mmHg。對照組男23例，女22例；平均年齡（56.1±7.0）歲；平均糖尿病病程（14.7±2.1）年；收縮壓（129.57±16.97）mmHg，舒張壓（68.75±8.83）mmHg。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

對照組給予常規(guī)降糖、降壓、降脂藥物治療，觀察組在此基礎(chǔ)上應(yīng)用丹紅注射液治療，30 mL溶入0.9% NaC1250 mL中靜脈輸注，1次/d，連續(xù)應(yīng)用2周。

1.3 試劑

CD62p、PAC-1單克隆抗體，F(xiàn)ACS Ca1ibur流式細胞儀及配套Ce11Quest軟件均購于美國Becton dickion公司。血脂試劑盒購于寧波亞太生物技術(shù)有限責(zé)任公司，尿微量白蛋白定量測定試劑盒購于上?？迫A生物工程股份有限公司。

1.4 觀察指標

1.4.1 血脂、肌酐檢測晨起抽取空腹靜脈全血3 mL，采用肝素抗凝，室溫下密封保存，避免劇烈震蕩引發(fā)溶血現(xiàn)象，3000 r/min，離心3min后檢測各組患者治療前后總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、肌酐（SCr）水平。

1.4.2 CD62p、PAC-1及尿蛋白檢測取全血樣本5μL，再加入CD62p PE、PAC-1 FITC各10μL，對照管中加入全血樣本5μL，再加入RGDS、Mouse g1 PE各10μL，混勻，室溫避光孵育10～15 min后，均加入PBE磷酸鹽緩沖液0.5mL稀釋，即刻上機檢測。留取24 h尿液，采用免疫法進行白蛋白定量檢測。

1.4.3 療效判定標準依照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》，顯效：臨床癥狀明顯改善，UAER下降＞70%；有效：臨床癥狀有改善，UAER下降30%～70%；無效：癥狀無改善，UAER下降＜30%?？傆行?（顯效+有效）/總例數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床療效比較

觀察組總有效率為90.0%（45/50），對照組總有效率為64.4%（29/45），兩組比較差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.905，P＜0.01）。見表1。

表1 兩組臨床療效比較（例）

2.2 兩組治療前后血脂水平比較

對照組治療前后TC、TG、HDL-C和LDL-C比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），觀察組治療后TC、TG、LDL-C明顯下降，HDL-C明顯升高，且與對照組治療后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組治療前后血脂水平比較（mmo1/L，x±s）

2.3 兩組治療前后腎功能及血小板相關(guān)因子比較

兩組治療后UAER、BUN和SCr較治療前明顯改善，但觀察組下降更顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。觀察組治療后血小板CD62p、PAC-1陽性表達率明顯低于治療前及對照組治療后（P＜0.05），對照組治療前后變化不明顯，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

3 討論

近年來，糖尿病腎病的發(fā)病率和患病率逐年升高，且有年輕化趨勢，業(yè)已成為威脅人民健康的重大疾病。據(jù)統(tǒng)計2012年在美國透析患者中1/3的原發(fā)病是糖尿病，在我國糖尿病引起終末期腎病、慢性腎衰的比率逐年提高［8］。在糖尿病腎病的發(fā)展過程中，一旦出現(xiàn)腎功能損害，持續(xù)性蛋白尿和腎小球濾過率降低，則病情難以逆轉(zhuǎn)，因而及早干預(yù)治療對于抑制疾病發(fā)展、改善腎功能，具有非常重要的意義。

表3 兩組治療前后腎功能比較（x±s）

表4 兩組治療前后CD62p、PAC-1表達比較（%，x±s）

丹紅注射液內(nèi)含丹參和紅花等提取物，有活血化瘀、通絡(luò)止痛之功效。丹參有肝素樣作用，能抑制血小板聚集，激活纖溶，抗微血栓形成，促進血管內(nèi)皮細胞修復(fù)；能糾正脂代謝紊亂，降低內(nèi)皮素（ET）水平，升高NO含量，有效改善血液流變學(xué)各指標［9］；紅花內(nèi)含紅花黃素，能通過抑制由二磷酸腺苷（ADP）誘導(dǎo)的血小板聚集，抑制凝血；通過增強纖溶酶的活性促進纖維蛋白原溶解而發(fā)揮抗血栓的功效［10-11］。研究顯示丹紅注射液通過抑制核因子κB（NF-κB）、下調(diào)腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細胞介素6（IL-6）等炎性因子減緩糖尿病腎病的發(fā)展演進，保護腎臟功能；丹紅注射液可降低糖尿病腎病患者血漿AngⅡ水平，緩解腎血管張力，增加腎血流量，減少尿白蛋白排泄率，延緩糖尿病腎病病程的進展［12-13］。

CD62p系選擇素家族黏附分子重要成員，定位于血小板α顆粒和血管內(nèi)皮細胞中，正常情況下，CD62p僅少量表達于血小板，當(dāng)長期處于高血糖狀態(tài)時，CD62p快速、大量、穩(wěn)定地表達在血小板膜表面，通過凝集素等細胞表面糖復(fù)合物相互作用，使細胞黏附力增強，介導(dǎo)活化的內(nèi)皮細胞與中性粒細胞、單核細胞亞群等的黏附，參與血栓形成和炎性反應(yīng)［14-15］；PAC-1是血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受體，是Ca2+依賴性異構(gòu)二聚體，正常情況下PAC-1與配體結(jié)合力較低，在高血糖等因素刺激下，血小板活化，PAC-1在質(zhì)膜上表達增加，構(gòu)象發(fā)生改變，與纖維蛋白原及相應(yīng)配體親和力增加，誘導(dǎo)促血小板黏附及相互聚集，形成血栓，因而二者表達增加成為血小板活化的早期特異性標志物［16-18］。

目前國內(nèi)外對丹紅注射液治療糖尿病腎病患者血小板活化功能的臨床研究較少，本研究顯示觀察組治療后TC、TG、LDL-C明顯下降，HDL-C明顯升高，較對照組變化顯著，這與李華等［19］、賈鳳玖等［20］研究結(jié)果一致；觀察組治療后UAER、BUN和SCr較治療前明顯下降，改善程度較對照組更顯著；觀察組治療后血小板CD62p、PAC-1陽性表達率明顯低于治療前，提示丹紅注射液能明顯抑制血小板活化，改善腎功能。

總之，在常規(guī)降糖降脂藥物基礎(chǔ)上輔以丹紅注射液能有效改善糖尿病腎病患者臨床癥狀，提高腎功能，抑制血小板活化，延緩腎損害，因而建議臨床推廣。

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Clinicaleffect of Danhong Injection in the treatment of diabetic nephropathy and its influence on the expression of platelet CD62p，PAC-1

LIMingxia ZHAO Yifeng WANG Junfang ZUO Lijuan ZHANG Zhiying RENWeidong LIXiujuan
Department of Endocrino1ogy，the First Affi1iated Hospita1 of Hebei North University，Hebei Province，Zhangjiakou 075000，China

Objective To investigate the c1inica1 effect of Danhong Injection in the treatment of diabetic nephropathy and its inf1uence on the expression of p1ate1et CD62p，PAC-1.M ethods Ninety five cases with diabetic nephropathy admitted to the First Affi1iated Hospita1of Hebei North University from December 2014 to December 2015 were se1ected and random1y divided into the observation group（50 cases）and the contro1group（45 cases）.The patients in the contro1 group were treated by conventiona1hypog1ycemic，hypotensive and 1ipid-1owering drugs，whi1e the patients in the observation group were treated by Danhong Injection on the basis of conventiona1 therapy for 2 weeks.The b1ood 1ipid，rena1 function indexes of the two groups before and after treatmentwere observed，and the expression of p1ate1et CD62P and PAC-1 were detected.Resu lts The tota1effective rate of the observation group was 90%（45/50），the tota1 effective rate of the contro1k group was 64.4%（29/45），and the difference was high1y statistica11y significant（χ2=6.905，P＜0.01）.There were no significant differences in b1ood 1ipid，urinary protein excretion rate（UAER），serum creatinine（SCr），CD62p，PAC-1 va1ues between the two groups before treatment（P＞0.05）.There were no significant differences of tota1 cho1estero1（TC），triacy1g1ycero1（TG），high density 1ipoprotein cho1estero1（HDL-C）and 1ow density 1ipoprotein cho1esterin（LDL-C）before and after treatment in the contro1group（P＞0.05）.After treatment，TC，TG and LDL-C in the observation group were decreased significant1y，HDL-C was increased significant1y，and the changes in the observation group were more obvious than those in the contro1 group（P＜0.05）.UAER，BUN and SCr of the two groups after treatment were improved more significant1y than those before treatment，whi1e the observa-tion group was decreased more significant1y than those of contro1group，the differences were statistica11y significant（P＜0.05）.The positive rate of CD62p and PAC-1 in the observation group after treatmentwere significant1y 1ower than those before treatment and those of contro1group after treatment（P＜0.05），whi1e those in the contro1 group had no significant differences before and after treatment（P＞0.05）.Conclusion Danhong Injection can significant1y inhibit the expression of CD62p and PAC-1 in patients with diabetic nephropathy，reduce urinary protein，1ower b1ood 1ipid，and improve rena1 function.

Diabetic nephropathy；Danhong Injection；CD62p；PAC-1；C1inica1effect

R587.2

A

1673-7210（2016）07（a）-0092-04

2016-03-14本文編輯：張瑜杰）

河北省衛(wèi)計委醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點課題計劃項目（20150055）。

李明霞（1980.11-），女，碩士，主要從事內(nèi)分泌疾病診療與基礎(chǔ)研究。

任衛(wèi)東（1972.12-），男，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事內(nèi)分泌疾病診療與基礎(chǔ)研究。