盧立康唑醇質(zhì)體透皮性實驗研究

樊建峰，林碧雯，李恒進（解放軍總醫(yī)院皮膚科，北京 100853）

盧立康唑醇質(zhì)體透皮性實驗研究

樊建峰，林碧雯，李恒進（解放軍總醫(yī)院皮膚科，北京 100853）

目的：探討盧立康唑醇質(zhì)體的透皮性，為其新制劑開發(fā)提供理論參考。方法：通過檢測盧立康唑醇質(zhì)體、脂質(zhì)體、軟膏、45%水醇溶液經(jīng)大鼠皮膚的48 h藥物滲透累積量、藥物滯留量及透皮速率，比較不同制劑的透皮性差異。結(jié)果:盧立康唑24 h單位面積累積透皮量醇質(zhì)體優(yōu)于其他劑型（P ＜ 0.05），盧立康唑48 h單位面積累積透皮量：醇質(zhì)體/軟膏＞脂質(zhì)體/45%水醇溶液（P ＞ 0.05）。透皮速率大小順序為：醇質(zhì)體＞軟膏＞ 45%水醇溶液＞脂質(zhì)體（P ＜ 0.05)。盧立康唑藥物滯留量順序為：醇質(zhì)體/軟膏＞脂質(zhì)體＞ 45%水醇溶液（P ＜ 0.05），但醇質(zhì)體與軟膏在全層皮膚中滯留量差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。結(jié)論：盧立康唑醇質(zhì)體透皮性優(yōu)于脂質(zhì)體、軟膏、45%水醇溶液，有良好的體外透皮性，可作為藥物載體。

盧立康唑醇質(zhì)體；透皮性；滲透累積量；藥物滯留量；透皮速率

盧立康唑（luliconazole）是日本Nihon Nohyaku公司于2005年研制的一種咪唑類抗真菌藥物。該藥主要通過阻斷麥角固醇的生物合成，發(fā)揮抗真菌作用。大量實驗研究結(jié)果表明，盧立康唑在體外抗菌活性、真菌動物模型及臨床實驗中均顯示了廣譜強效的抗菌作用，目前國外有外用脂質(zhì)體制劑用于臨床，但尚無醇質(zhì)體制劑的研究及臨床應用。由于醇質(zhì)體制劑較脂質(zhì)體制劑有更好的透皮性，筆者通過研究盧立康唑醇質(zhì)體經(jīng)大鼠皮膚的藥物滲透累積量、藥物滯留量及透皮速率三項指標，比較盧立康唑醇質(zhì)體與軟膏、脂質(zhì)體及水醇溶液之間透皮性的差別，初步考察醇質(zhì)體作為藥物載體的透皮性能的優(yōu)缺點，為盧立康唑新制劑的開發(fā)提供理論參考。

1　實驗材料

1.1實驗動物

SD大鼠24只，SPF級，雄性，二級動物，體質(zhì)量250 ～ 300 g，由軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK-（軍）2012-0004。

1.2實驗儀器與藥品

探頭式超聲破碎乳化儀（美國Fisher Scientific公司）；德國Sigma 3-18K高速冷凍離心機（德國Sigma公司）；Agilent 1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；RYJ-12B 型Franz擴散池（上海黃海藥檢儀器有限公司）。

盧立康唑醇質(zhì)體、脂質(zhì)體、45%乙醇水溶液（自制），盧立康唑軟膏（海南海靈化學制藥有限公司）。

2　方法

2.1藥物含量的測定

采用HPLC法分別測量盧立康唑醇質(zhì)體樣品、脂質(zhì)體樣品、水醇溶液樣品中的盧立康唑藥品含量。

2.2離體鼠皮的制備

取體質(zhì)量為250 ～ 300 g，正常SD大鼠24只，實驗前24 h用8%硫化鈉進行腹部脫毛，并用0.9%氯化鈉注射液洗凈，飼養(yǎng)。

用手術(shù)刀剝離腹部皮膚，分離皮下組織和脂肪，剃毛器再次剔除毛發(fā)，選用無破損皮膚浸泡于0.9%氯化鈉注射液中，放置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?4 h內(nèi)使用。實驗前仔細檢查鼠皮的完整性。

2.3體外大鼠皮膚透皮實驗及滲透累積量測定

取預先制備好的離體鼠皮，將皮膚水平架放好，角質(zhì)層向供給池，皮下組織向接收池。接收池加滿接收液，排空氣泡，平衡30 min。

更換接收液。供給池加不同制劑處方的盧立康唑（藥品含量固定1 mg），其含量足夠維持穩(wěn)態(tài)，并使角質(zhì)層面完好接觸給藥制劑。用封口膜覆蓋密封供給池，用小磁粒不斷攪拌接收液以確保藥物均勻分散。擬在0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、48 h測定藥物透皮量。實驗時間為48 h。

每個時間點從接收池取出1 mL，同時取出同體積新鮮接收液補回且進行稀釋校正，采用HPLC法測定藥物峰面積，代入標準曲線求出藥物濃度，計算累積滲透量和透皮速率。根據(jù)每個取樣點樣品的濃度，計算單位面積累積滲透量Q，見公式：

將整套擴散池裝置放在恒溫磁力攪拌器上，磁力攪拌速度350 r·min-1，溫度保持在37 ℃。

2.448 h藥物滯留量測定

48 h后，取下皮膚，用水洗凈，濾紙使其干燥。去除角質(zhì)層：透明膠帶反復黏貼鼠皮表面20次，將膠帶浸入20 mL甲醇中，提取藥物24 h，再超聲提取3次，每次15 min，0.45 μm的微孔濾膜過濾后采用HPLC法對藥物含量進行測定。此為角質(zhì)層中盧立康唑藥物滯留量。每個制劑采用6個不同透皮實驗，結(jié)果用（）表示。

2.5統(tǒng)計學分析

3　結(jié)果

3.1滲透累積量

結(jié)果表明，盧立康唑24 h單位面積累積透皮量醇質(zhì)體優(yōu)于其他劑型（P ＜ 0.05），48 h單位面積累積透皮量：醇質(zhì)體/軟膏＞脂質(zhì)體/45%水醇溶液（P ＞0.05）。詳見表1。

表1　盧立康唑各制劑48 h總滲透累積量. mg·mL-1，n = 6，Tab 1　The cumulative transdermal amount of luliconazole with different dosages for 48 h.mg·mL-1,n = 6,

表1　盧立康唑各制劑48 h總滲透累積量. mg·mL-1，n = 6，Tab 1　The cumulative transdermal amount of luliconazole with different dosages for 48 h.mg·mL-1,n = 6,

時間/h　醇質(zhì)體　脂質(zhì)體　軟膏　45%水醇溶液0.5　0.004 5±0.003 1　0.006 7±0.010 2　0.000 6±0.001 1　0.010 7±0.018 8 1 0.005 6±0.006 3　0.007 4±0.012 4　0.003 4±0.006 4　0.019 7±0.032 8 2 0.025 9±0.015 8　0.010 9±0.023 3　0.009 9±0.014 1　0.034 8±0.050 8 3 0.046 3±0.027 3　0.019 5±0.042 8　0.018 4±0.021 6　0.054 7±0.066 6 4 0.072 4±0.035 7　0.038 1±0.038 3　0.029 5±0.030 1　0.067 6±0.070 1 6 0.129 4±0.052 3　0.080 8±0.143 4　0.053 1±0.053 0　0.098 5±0.087 7 8 0.169 9±0.049 8　0.088 1±0.127 7　0.080 4±0.068 7　0.124 1±0.094 0 12　0.268 6±0.077 1　0.126 4±0.200 1　0.145 8±0.123 8　0.170 2±0.107 0 24　0.508 9±0.032 5　0.291 6±0.201 7　0.333 0±0.193 5　0.309 5±0.122 2 48　0.661 8±0.041 9　0.511 5±0.195 7　0.571 9±0.206 2　0.449 8±0.085 7

3.2滲透速率

透皮速率大小順序為：醇質(zhì)體＞軟膏＞ 45%水醇溶液＞脂質(zhì)體，盧立康唑醇質(zhì)體的穩(wěn)態(tài)流速為（7.625 3±0.465 0） μg·cm-2·h-1，與軟膏、脂質(zhì)體和乙醇水溶液3種制劑相比，醇質(zhì)體的透皮速率分別提高了1.57、1.81和1.63倍。表明盧立康唑醇質(zhì)體在滲透性能方面顯著優(yōu)于傳統(tǒng)脂質(zhì)體、水醇溶液及軟膏（P ＜0.05）。結(jié)果見圖1，滲透速率J = Q/Δt （Δt為取樣點的時間間隔）。

3.348 h藥物滯留量

結(jié)果表明：透皮研究48 h后，盧立康唑各劑型在全層皮膚中測得盧立康唑滯留量順序為：醇質(zhì)體/軟膏＞脂質(zhì)體＞體積分數(shù)45%乙醇溶液（P ＜ 0.05），但醇質(zhì)體與軟膏在全層皮膚中滯留量并無顯著性差異（P ＞0.05）。48 h后盧立康唑醇質(zhì)體、脂質(zhì)體與軟膏在角質(zhì)層中滯留量無統(tǒng)計學差異（P ＞ 0.05），醇質(zhì)體及軟膏制劑較水醇溶液在角質(zhì)層滯留量大，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；脂質(zhì)體與水醇溶液在角質(zhì)層滯留量差異無統(tǒng)計學差異（P ＞ 0.05）。詳見表2。

圖1　盧立康唑不同劑型24 h透皮擬合曲線A – 醇質(zhì)體，B – 軟膏，C – 脂質(zhì)體，D – 45%水醇溶液Fig 1　The transdermal fitting curve of luliconazole with different dosages in 24 hA – ethosome,B – ointment,C – lipidosome,D – 45% hydroalcoholic solution

4　討論

淺部真菌感染是發(fā)病率較高的一種皮膚病，部分患者難以治愈，尤其是足癬。因為大部分外用抗真菌藥物都需要2 ～ 4周的治療時間。由于皮膚角質(zhì)層屏障的存在，一般經(jīng)皮外用藥物難以攜帶大量藥物進入皮膚深層，抗菌效果欠佳。盧立康唑是一種新型的咪唑類抗真菌藥物[1]，有較強的抗真菌作用，療程短，目前國外有脂質(zhì)體制劑上市。

醇質(zhì)體作為囊泡型載體，可增加藥物的經(jīng)皮滲透性，延緩藥物的釋放，其主要有2個方式發(fā)揮促滲機制[2]：①穿透機制：完整的醇質(zhì)體囊泡作為藥物載體，因自身含有類細胞膜的特殊結(jié)構(gòu)，其能帶著藥物進入角質(zhì)層，甚至可達到皮膚深層。醇質(zhì)體的特點就在于醇質(zhì)體磷脂層中高濃度的醇（乙醇、異丙醇等）可增強膜的柔韌性和流動性，使其在傳遞過程中發(fā)生變形，更易通過比其更小的間隙，透過紊亂的角質(zhì)層，增強滲透，加速滲透，使藥物更快、更充足的到達靶部位發(fā)揮作用。②融合機制：醇質(zhì)體囊泡作為滲透增強劑，其磷脂與角質(zhì)層的細胞間脂質(zhì)融合，增加藥物在角質(zhì)層的溶解度，使得藥物分子本身透入皮膚[3]。在醇質(zhì)體透皮過程中，因其可使角質(zhì)層脂質(zhì)雙層中疏水性尾部排列紊亂，組成和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，降低脂質(zhì)的臨界溫度，增加角質(zhì)層表皮脂質(zhì)的流動性，同時高濃度乙醇可增強膜的滲透性，使包封在醇質(zhì)體中的藥物通過擴散和毛細吸力作用，進入深層皮膚的細胞間隙，或透過細胞膜將藥物直接釋放到細胞內(nèi)發(fā)揮作用[3-4]。

在評價經(jīng)皮制劑時，穩(wěn)態(tài)透皮速率和皮膚滯留藥量是2個重要評價指標[5]。國內(nèi)學者[6]進行秋水仙堿醇質(zhì)體體外透皮實驗，結(jié)果表明醇質(zhì)體穩(wěn)態(tài)透皮速率分別是30%乙醇溶液的1.24倍，脂質(zhì)體的4.80倍，水飽和溶液的5.87倍?？梢姶假|(zhì)體更易攜帶藥物更快速滲透達到靶組織，使藥物起效迅速，從而徹底發(fā)揮作用。同時，很多相關(guān)實驗表明[7-8]，醇質(zhì)體作為透皮載體，可增加藥物的透皮量和穿透深度。皮膚滯留量是通過測定透皮實驗后皮膚中殘留的藥物量來計算的，是評價藥物滲透性及局部藥效的重要指標。饒躍峰等[7]研制的非那甾胺醇質(zhì)體作用于人體皮膚，24 h后藥物滯留量次序為：醇質(zhì)體＞ 30%乙醇溶液＞脂質(zhì)體＞水飽和液，在真皮組織中，醇質(zhì)體的藥物滯留量明顯大于其他樣品組，為脂質(zhì)體的2.5倍。0.1%（w/v）雷公藤甲素的各種制劑24 h透皮累積量結(jié)果顯示：雷公藤甲素醇質(zhì)體達83.7%、空白醇質(zhì)體/雷公藤甲素水醇溶液為59.4%、水醇溶液為36.8%?？梢姶假|(zhì)體不僅可提高藥物透皮速率，也可提高藥物在皮膚局部的滯留量。于燕燕等[9]發(fā)現(xiàn)鬼臼毒素醇質(zhì)體12 h較其他劑型有較大的皮膚滯留量。

表2　不同劑型的盧立康唑在皮膚中的藥物滯留量. mg·mL-1Tab 2　The retention amount of luliconazole with different dosages for 48 h.mg·mL-1

抗真菌藥物研究方面，鹽酸阿莫羅芬醇質(zhì)體經(jīng)共聚焦激光掃描顯微鏡實驗表明，醇質(zhì)體與脂質(zhì)體及乙醇溶液相比，可更有效增加藥物的透皮量和穿透深度，增加藥物在皮膚中的滯留量[10]。劉利萍等[11]制備的克霉唑醇質(zhì)體組殺菌所需克霉唑劑量明顯低于脂質(zhì)體組。另外，在殺菌起效方面，克霉唑醇質(zhì)體明顯優(yōu)于脂質(zhì)體和乙醇水溶液。最低抑菌濃度、最低殺菌濃度和抗菌-時效實驗結(jié)果也證明了醇質(zhì)體比脂質(zhì)體具有更快的透過速率、更高的滲透能力和更短的時滯，從而使藥物能夠更快、更好地發(fā)揮抗菌作用，有助于深層真菌感染的治療。

本研究結(jié)果表明，盧立康唑醇質(zhì)體經(jīng)皮滲透的速率明顯優(yōu)于軟膏、脂質(zhì)體和水醇溶液劑型。盧立康唑各劑型24 h單位面積累積透皮量醇質(zhì)體優(yōu)于其他各劑型，48 h藥物透皮量醇質(zhì)體與軟膏相當，優(yōu)于脂質(zhì)體及水醇溶液；在全層皮膚藥物滯留量上醇質(zhì)體與軟膏制劑相當，并優(yōu)于脂質(zhì)體及水醇溶液。綜上，盧立康唑醇質(zhì)體具有優(yōu)良的體外透皮性，可作為藥物載體，為其新劑型的研發(fā)提供理論參考。

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Study on the in vitro transdermal experiment of luliconazole ethosomes

FAN Jian-feng,LIN Bi-wen,LI Heng-jin(Department of Dermatology,PLA General Hospital,Beijing 100853,China)

Objective: To investigate the transdermal difference of luliconazole ethosomes,and provide references for the development of new dosages. Methods: 48 h cumulative transdermal amount,retention of the drug and permeation rate were analyzed about luliconazole ethosomes,lipidosome,ointment and 45% hydroalcoholic solution. Results: The cumulative transdermal amount of luliconazole ethosomes at 24 h was superior to others (P ＜ 0.05). The transdermal amount of luliconazole at 48 h were as follows: ethosomes/ointment ＞ lipidosome/45% hydroalcoholic solution (P ＞ 0.05). The permeation rate of luliconazole were as follows: ethosomes ＞ ointment ＞ 45% hydroalcoholic solution ＞ lipidosome (P ＜ 0.05). The retention of luliconazole were as follows: ethosomes/ointment ＞ lipidosome ＞ 45% hydroalcoholic solution (P ＜ 0.05),while the retention in full-thickness skin showed no significant difference between luliconazole ethosomes and ointment (P ＞ 0.05). Conclusion: The transdermal ability of luliconazole ethosomes is better than lipidosome,ointment and hydroalcoholic solution,which could be used as drug carrier.

Luliconazole ethosomes; Transdermal ability; Cumulative transdermal amount; Retention of drug; Penetration rate

R94

A

1672 - 8157(2016)01 - 0017 - 04

軍隊十二五面上項目（CWS11J114）

李恒進，男，主任醫(yī)師，主要從事皮膚病理工作。E-mail：lhengjin@163.com

樊建峰，男，副主任醫(yī)師，主要從事皮膚真菌病及銀屑病治療。E-mail：fanjianfeng1@tom.com

（2015-08-31

2015-11-15）