產(chǎn)β-葡萄糖苷酶酵母菌的分離鑒定及酶學(xué)特性

徐亞男，史學(xué)偉， 安洋洋， 談思維，肖 婧，童軍茂*

（1.石河子大學(xué) 食品學(xué)院，新疆 石河子832000；2.包頭職業(yè)技術(shù)學(xué)院 經(jīng)管系，內(nèi)蒙古 包頭010043）

產(chǎn)β-葡萄糖苷酶酵母菌的分離鑒定及酶學(xué)特性

徐亞男1，史學(xué)偉1， 安洋洋2， 談思維1，肖 婧1，童軍茂*1

（1.石河子大學(xué) 食品學(xué)院，新疆 石河子832000；2.包頭職業(yè)技術(shù)學(xué)院 經(jīng)管系，內(nèi)蒙古 包頭010043）

在葡萄酒自然發(fā)酵的初期，非釀酒酵母菌占主導(dǎo)地位，其產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶獨(dú)特的水解活性，能夠賦予葡萄酒特殊的香氣。在新疆赤霞珠葡萄酒發(fā)酵過(guò)程中，通過(guò)對(duì)非釀酒酵母菌的采集與篩選，得到1株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶能力較強(qiáng)的菌株；紫外-微波復(fù)合誘變后，酶活力增加1.81倍；經(jīng)26S rRNA基因序列分析，鑒定為克魯維畢赤酵母，并命名為XYN086（P.kluyveri XYN086）；酶學(xué)性質(zhì)研究表明：該菌株所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶最適pH為6.0，在pH 6.0～8.0時(shí)酶活力保持60%以上；酶的最適作用溫度為60℃，在60℃酶活力保持較好；金屬離子依賴性實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)e2+和Cu2+對(duì)該菌株所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的酶活力均有激活作用，Mg2+、Ca2+、K+和Na+均有抑制作用，說(shuō)明此菌株所產(chǎn)的β-葡萄糖苷酶對(duì)金屬離子具有依賴性。據(jù)以上數(shù)據(jù)確認(rèn)，該菌株為產(chǎn)β-葡萄糖苷酶克魯維畢赤酵母。

β-葡萄糖苷酶；非釀酒酵母菌；酶學(xué)特性

β-葡萄糖苷酶在生物能源、食品工業(yè)、保健品、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。β-葡萄糖苷酶屬纖維素酶類，在生物能源領(lǐng)域，纖維素發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇等過(guò)程中，添加一定的β-葡萄糖苷酶或產(chǎn)β-葡萄糖苷酶菌株，可提高纖維素降解的酶反應(yīng)速率，為生物能源的利用與開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)；在食品工業(yè)領(lǐng)域，β-葡萄糖苷酶作用于水果中的芳香前體物質(zhì)，利于果汁脫苦和果汁增香，并可用作食品添加劑；在保健品行業(yè)中，β-葡萄糖苷酶應(yīng)用于大豆異黃酮等，可有效增加產(chǎn)量和降低生產(chǎn)成本，其工業(yè)化應(yīng)用前景較高；在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域，生氰β-葡萄糖苷酶在植物病蟲害的綠色防治上具有重大意義；在醫(yī)藥領(lǐng)域，β-葡萄糖苷酶可應(yīng)用于某些疾病的診斷和治療。

非釀酒酵母菌是一類自然存在于葡萄表皮、釀酒環(huán)境中，能分泌多種胞外酶，通過(guò)代謝和自溶提高發(fā)酵食品的感官特性，參與復(fù)雜新鮮的風(fēng)味物質(zhì)形成的酵母菌［1］。葡萄酒的主要香氣成分取決于葡萄中揮發(fā)性次級(jí)代謝產(chǎn)物的數(shù)量和化學(xué)性質(zhì)［2］。其中，以自由分子或非芳香糖基化前體物質(zhì)存在的烷烴貢獻(xiàn)最大［3］。β-葡萄糖苷酶能夠顯著增加葡萄酒中非芳香糖基化前體物質(zhì)的水解和芳香物質(zhì)的釋放［4］，在葡萄酒的香氣形成過(guò)程中起重要作用。在葡萄酒自然發(fā)酵過(guò)程的初期，非釀酒酵母菌占主導(dǎo)地位，其產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶獨(dú)特的水解活性，能夠賦予葡萄酒特殊的香氣［5-6］。但是，目前已知菌株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的酶活力普遍比較低，在一定程度上限制了β-葡萄糖苷酶的工業(yè)化生產(chǎn)。因此，直接從自然界中篩選出產(chǎn)β-葡萄糖苷酶且酶活較高的菌株是最直接并且最有效的方法。

在新疆赤霞珠葡萄酒發(fā)酵過(guò)程中，經(jīng)鑒別培養(yǎng)基采集非釀酒酵母菌，得到一株能分泌β-葡萄糖苷酶的野生菌株，通過(guò)分子生物學(xué)鑒定為克魯維畢赤酵母；并對(duì)其酶學(xué)特性進(jìn)行初步研究，證實(shí)其在食品工業(yè)領(lǐng)域有著良好的應(yīng)用前景，進(jìn)一步應(yīng)用于新疆特色釀造發(fā)酵行業(yè)中，以期改善產(chǎn)品質(zhì)量，提高設(shè)備利用率，同時(shí)為后期的研究提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)葡萄 赤霞珠葡萄，采自新疆葡萄園。

1.1.2 培養(yǎng)基 酵母浸出粉胨葡萄糖培養(yǎng)基（g/dL）：葡萄糖2.0，酵母提取物 2.0，蛋白胨2.0；pH 7.0，121℃滅菌20 min。賴氨酸培養(yǎng)基［7］（g/dL）：賴氨酸0.56，葡萄糖1.0，KH2PO40.1，MgSO40.05，瓊脂2.0；121℃滅菌20 min。篩選培養(yǎng)基（g/dL）：葡萄糖2.0，蛋白胨2.0，酵母浸粉1.0，p-NPG 1.0；自然pH值，121℃滅菌20 min。發(fā)酵培養(yǎng)基（g/dL）：葡萄糖 2.0，蛋白胨 2.0，酵母浸粉 1.0，NH4NO30.3，KH2PO40.4；自然pH值，121℃滅菌20 min，在溫度降到60～70℃左右加入0.1 g/dL p-NPG。

1.1.3 儀器 Seven Excellence S400型pH計(jì)，梅特勒托利儀器（上海）有限公司制造；SYQ-DSX-280B手提式不銹鋼電熱蒸汽滅菌器，上海申安醫(yī)療器械廠制造；Mini-14K高速離心機(jī)，上海昨非實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司制造；數(shù)顯氣浴恒溫振蕩器，金壇市精達(dá)儀器制造廠制造；7200型可見(jiàn)分光光度計(jì)，尤尼柯（上海）儀器有限公司制造；Power Cycler Gradient SL PCR儀，德國(guó)耶拿分析儀器股份公司制造；IEFSYS瓊脂糖凝膠電泳儀，英國(guó)Biochrom有限公司制造。

1.2 方法

1.2.1 菌株分離純化 葡萄樣品經(jīng)破碎后帶皮進(jìn)行自然發(fā)酵，發(fā)酵啟動(dòng)后在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中定期取樣，以不同濃度梯度涂布于賴氨酸培養(yǎng)基，28℃培養(yǎng)48 h，劃線分離；重復(fù)多次直至得到單菌落后，接種于酵母浸出粉胨葡萄糖培養(yǎng)基，28℃培養(yǎng)48 h后，保存于-80℃冰箱。

1.2.2 產(chǎn)酶菌株的篩選 取試驗(yàn)菌株的菌懸液0.1 mL，以10倍系列稀釋至10-1～10-6，分別取各個(gè)梯度稀釋液1 mL接種于篩選培養(yǎng)基上，培養(yǎng)72 h后，噴1 mol/L碳酸鈉，選擇其中顯示黃色光圈的菌株作為初篩菌株；初篩菌株接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，置于溫度30℃的搖床，150 r/min培養(yǎng)72 h后，發(fā)酵液于8 000 r/min離心10 min，除菌，收集上清液，于紫外分光光度計(jì)400 nm下測(cè)定吸光值；篩選酶活力大的菌株，備用。

1.2.3 產(chǎn)酶菌株誘變選育 將篩選出的菌株發(fā)酵液在離心機(jī)中5 000 r/min離心8 min，棄去上清液，用無(wú)菌水重新懸??；吸取2 mL放置于4℃冰箱中作為對(duì)照；剩余的菌液，吸取5 mL加入無(wú)菌平板中，平板置于紫外燈已照射30 min的磁力攪拌器上，等距離放置距燈30 cm處，照射20 min，得誘變菌株1；誘變菌株1放入微波源為2 450 MHz、850 W的微波爐中，每照射10 s，冷卻10 s后再照射10 s，冷卻后在37℃培養(yǎng)60 h，得到最終誘變菌株。

1.2.4 粗酶液的提取和 β-葡萄糖苷酶活性測(cè)定

取誘變菌株和對(duì)照菌株發(fā)酵液于4℃8 000 r/min離心10 min，上清液即為粗酶液。取0.05 mL酶液，將50 mL 0.2 g/dL p-NPG溶液，0.15 mL pH值為5.0的醋酸緩沖液混合后，30℃下水浴預(yù)熱10 min后立即加入碳酸鈉中止反應(yīng)。室溫放置5 min，400 nm處測(cè)吸光值，同時(shí)做空白樣品；酶活力單位（IU）定義：每分鐘生成1 μmol對(duì)硝基苯酚用酶量為1個(gè)酶活單位。酶活力計(jì)算公式：

式中：X為酶活力 （IU/mL）；A為吸光值；K為吸光常數(shù)；V為反應(yīng)總體積；n為稀釋倍數(shù)；t為反應(yīng)時(shí)間。

1.2.5 菌株的分子生物學(xué)鑒定 采用酵母基因組DNA提取試劑盒提取試驗(yàn)菌株DNA，以所得基因組DNA為模板，利用ITS1和ITS4為引物擴(kuò)增ITS區(qū)的基因，PCR反應(yīng)體系參照文獻(xiàn)［8］，將擴(kuò)增產(chǎn)物送到北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)有限責(zé)任公司進(jìn)行測(cè)序；將ITS序列輸入NCBI（美國(guó)國(guó)家生物信息中心）的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比對(duì)，分析序列同源性，確定該菌株的分類地位。

1.2.6 粗酶性質(zhì)研究

1）pH對(duì)酶活的影響：分別配制pH為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0的檸檬酸緩沖溶液，測(cè)定酶活力，以最高點(diǎn)酶活為100%，其他與之相比得相對(duì)酶活，繪制酶最適pH值曲線；

2）pH穩(wěn)定性研究：粗酶液分別與等量不同pH緩沖液混勻，置于30℃下水浴保溫1 h后，測(cè)定剩余酶活，以最高點(diǎn)酶活為100%，其他pH條件下與之相比為相對(duì)酶活，繪制酶的pH值穩(wěn)定性曲線；

3）溫度對(duì)酶活的影響：在溫度分別為30、40、50、60、70℃下測(cè)酶活，以最高點(diǎn)酶活為100%，其他與之相比得相對(duì)酶活，以確定最適反應(yīng)溫度，繪制酶催化溫度曲線；

4）熱穩(wěn)定性研究：粗酶液置于50、60、70℃不同溫度下保溫一定時(shí)間，取出后迅速冷卻，以pH為7.0 2 g/dL葡萄糖溶液為底物溶液，在30℃下測(cè)定剩余酶活，以未經(jīng)處理的酶溶液酶活為100%，其他溫度條件下與之相比為相對(duì)酶活，繪制酶熱穩(wěn)定性曲線；

5）金屬離子對(duì)酶活的影響：反應(yīng)體系中加1 mL終濃度為 1 mmol/L的各種金屬離子 Ca2+、Mg2+、Fe2+、Cu2+、Na+、K+，充分混勻后在30℃下放置24 h，測(cè)酶活，以1 mL雙蒸水代替金屬離子的酶溶液酶活力為100%，其他金屬離子與之相比為相對(duì)酶活。

1.2.7 數(shù)據(jù)分析 獨(dú)立重復(fù)進(jìn)行3次試驗(yàn)，結(jié)果是3次測(cè)定的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，所有曲線以O(shè)rigin 8作圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 產(chǎn)酶菌株的篩選

以采集于發(fā)酵過(guò)程中的新鮮葡萄汁為分離源，分離得到具有水解β-葡萄糖苷酶活性的菌株3株，通過(guò)β-葡萄糖苷酶黃色光圈亮度試驗(yàn)，得到黃色光圈較明顯的1號(hào)和2號(hào)菌株，結(jié)果如表1所示。

表1 產(chǎn)酶菌株篩選結(jié)果Table 1 Results of the screening strain

由表1可知，分離得到的3株菌株均產(chǎn)β-葡萄糖苷酶，通過(guò)黃色光圈亮度可知，1號(hào)和2號(hào)菌株水解能力最強(qiáng)，3號(hào)菌株次之；酶活測(cè)定結(jié)果表明，1號(hào)菌株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶能力高于其他2株，2號(hào)菌株酶活力高于3號(hào)菌株，表明1號(hào)和2號(hào)菌株均具有可能的開(kāi)發(fā)前景，故選擇1號(hào)和2號(hào)菌株為本次試驗(yàn)初次篩選的菌株。

2.2 產(chǎn)酶菌株誘變選育

將產(chǎn)β-葡萄糖苷酶能力較好的菌株進(jìn)行誘變選育，結(jié)果見(jiàn)表2。可知，各菌株經(jīng)紫外-微波復(fù)合誘變后，酶活力均不同程度增大，1號(hào)菌株酶活力增加（13.12±1.45）IU/mL，2號(hào)菌株酶活力增加（5.05±0.29）IU/mL，經(jīng)誘變后，1號(hào)菌株所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶活力明顯高于2號(hào)菌株，故本次試驗(yàn)所得菌株為1號(hào)誘變菌株。

表2 菌株誘變選育對(duì)酶活的影響Table 2 Effect of mutation on β-glucosidase activity

2.3 26s rRNA基因序列分析

對(duì)1號(hào)菌株進(jìn)行DNA的提取和PCR擴(kuò)增，通過(guò)分子生物學(xué)手段鑒定該菌株的ITS核苷酸序列如下：

GTCGCTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGG CTCCAAGATTGGCGCCGCGGGAGGGGCAACTTTC CCATGGCGCTGAAAATTCAGTCAAACTTGGTCATT TAGAGGTCGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTA GGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGTGATTTAT ATCTTATACACATGCGTGAGCGCACCAAACACCTA AAATTGTAATACCACAGTCACTAAGTTTTAACAAA ACAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGC ATCGATGAAGAGCGCAGCGAAATGCGATACCTAG TGTGAATTGCAGCCATCGTGAATCATCGAGTTCTT GAACGCACATTGCGCCCCATGGTATTCCATGGGG CATGCCTGTCTGAGCGTCGTTTCCTTCTTGCGCAA GCAGAGTTGAGAACAGGCTATGCCTTTTTCGAAAT GGAACGTCGTGGACGAAGTGAACTAAACTTTTAG CACGCTTTGGCCGCCGAACTTTTAACTAAGCTCGA CCTCAGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAA GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACA GGGATTGCCTCAGTAGCGGCGAGTGAAGCGGCAA GAGCTCAGATTTGAAATCTCACCTAGTGTGCGAG

見(jiàn)表 3，1號(hào)菌株的 26s rRNA基因序列和BLAST比對(duì)結(jié)果顯示，它與Pichia kluyveri strain 28FR菌的26s rRNA（KJ095611）有100%的相似度。構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù) （圖1）表明，1號(hào)菌株在Pichia屬進(jìn)化樹(shù)一個(gè)分支上。因此，該菌株為克魯維畢赤酵母，命名為XYN086（P.kluyveri XYN086）。

表3 1號(hào)菌株的26s rRNA基因測(cè)序BLAST結(jié)果Table 3 BLAST results of 26s r RNA gene sequencing of strain 1

圖1 1號(hào)菌株（XYN086）基于26s r RNA基因發(fā)育樹(shù)Fig.1 Development tree diagram based on 26s r RNAgenes of strain 1（XYN086）

2.4 酶的最適pH及其酸堿穩(wěn)定性

測(cè)定不同pH對(duì)β-葡萄糖苷酶活性的影響，如圖2所示，隨著pH的增加，該菌株所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶酶活力逐漸增大，在pH 6.0時(shí)達(dá)到最高，pH繼續(xù)增加，酶活力降低較大幅度，故確定該菌株的產(chǎn)酶最適pH為6.0。

如圖3所示，該菌株所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶在pH為6.0時(shí)，酶活力保持最佳，在pH 6.0～8.0，可保持較好酶活力 （相對(duì)酶活大于60%），在強(qiáng)酸pH為3.0、強(qiáng)堿pH為10.0時(shí)，酶活損失較嚴(yán)重，損失率約為80%。說(shuō)明該菌株所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶在pH 6.0～8.0較穩(wěn)定，利于β-葡萄糖苷酶的貯藏和生產(chǎn)。

圖2 pH對(duì)β-葡萄糖苷酶活性的影響Fig.2 Effect of pH on β-glucosidase activity

圖3 pH穩(wěn)定性Fig.3 pH stability

2.5 酶的最適溫度及其熱穩(wěn)定性

在不同溫度下，測(cè)定β-葡萄糖苷酶的活性，由圖4可知，隨著溫度的增加，β-葡萄糖苷酶活力增大，在60℃時(shí)，該菌株表現(xiàn)了最佳酶活力，在50～60℃各菌株均具有較高活性，當(dāng)溫度低于30℃或高于70℃時(shí)，酶活力顯著降低。

圖4 溫度對(duì)β-葡萄糖苷酶活性的影響Fig.4 Effects of temperature on β-glucosidase activity

如圖5所示，隨著溫度的升高，經(jīng)一段時(shí)間后，酶的活性逐漸降低；在60℃下，在不同時(shí)間內(nèi)，測(cè)定的酶的活性相對(duì)穩(wěn)定，保溫60 min后，仍保留80%的活性；70℃下保溫20 min后，酶活力損失30%，保溫60 min后，剩余酶活力僅為21%。由此可知，該β-葡萄糖苷酶在60℃即最適溫度下?lián)碛辛己玫姆€(wěn)定性。

2.6 金屬離子對(duì)蛋白酶活性的影響

如表4所示，F(xiàn)e2+和Cu2+對(duì)該菌株所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的酶活力均有激活作用，F(xiàn)e2+的激活作用不明顯，Cu2+的激活作用最強(qiáng)，為 （136.92±2.27）%；Mg2+、Ca2+、K+和Na+對(duì)該菌株所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的酶活力均有抑制作用，K+的抑制作用最顯著，為（43.51±1.21）%，說(shuō)明該菌株所產(chǎn)的β-葡萄糖苷酶需要依賴金屬離子維持其活性。

圖5 熱穩(wěn)定性Fig.5 Thermal stability

表4 金屬離子對(duì)酶活力的影響Table 4 Effects of metal ions on β-glucosidase activity

3 結(jié)語(yǔ)

在新疆赤霞珠葡萄酒發(fā)酵過(guò)程中，通過(guò)對(duì)非釀酒酵母菌的采集與篩選，得到1株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶能力較強(qiáng)的菌株；紫外-微波復(fù)合誘變后，酶活力增加1.81倍；經(jīng)26s rRNA基因序列分析，鑒定為克魯維畢赤酵母，并命名為 XYN086（P.kluyveri XYN086）；酶學(xué)性質(zhì)研究表明：該菌株所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶最適pH為6.0，在pH為6.0～8.0時(shí)酶活力保持在60%以上；酶的最適作用溫度為60℃，在60℃酶活力保持較好；金屬離子依賴性發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)e2+和Cu2+對(duì)該菌株所產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的酶活力均有激活作用，Cu2+的激活作用最強(qiáng)，為 （136.92±2.27）%；Mg2+、Ca2+、K+和Na+均有抑制作用，K+的抑制作用最顯著，為（43.51±1.21）%，說(shuō)明此菌株所產(chǎn)的β-葡萄糖苷酶對(duì)金屬離子具有依賴性。據(jù)以上數(shù)據(jù)確認(rèn)，該菌株為產(chǎn)β-葡萄糖苷酶克魯維畢赤酵母。

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科技信息

韓國(guó)修訂糖、碳水化合物、脂肪、維生素D、鉻等的每日營(yíng)養(yǎng)成分標(biāo)準(zhǔn)值

2016年6月16日，據(jù)韓媒報(bào)道，韓國(guó)食品和藥品安全部于15日發(fā)布了《食品等的標(biāo)示標(biāo)準(zhǔn)》部分修改告示（案）行政預(yù)告。

糖類的每日營(yíng)養(yǎng)成分標(biāo)準(zhǔn)值規(guī)定為100 g，并對(duì)碳水化合物、脂肪、維生素D、鉻等的標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行了調(diào)整。碳水化合物由330 g下調(diào)至324 g，脂肪由51 g上調(diào)至54 g，維生素D由5 μg上調(diào)至10 μg，鉻由50 μg減至30 μg。

另外，為使以嬰幼兒、孕婦、哺乳期婦女等特定人群為對(duì)象的食品可以該類人群的推薦攝入量或充分?jǐn)z入量為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)示，對(duì) “韓國(guó)人營(yíng)養(yǎng)素?cái)z取標(biāo)準(zhǔn)表”進(jìn)行修改。

根據(jù)糖類標(biāo)準(zhǔn)值的制定，對(duì)于糖類，要標(biāo)示營(yíng)養(yǎng)成分標(biāo)準(zhǔn)值相關(guān)比例，營(yíng)養(yǎng)標(biāo)示表格圖案中追加糖類的“1日營(yíng)養(yǎng)成分標(biāo)準(zhǔn)值相關(guān)比例（%）”。

［信息來(lái)源］WTO檢驗(yàn)檢疫信息網(wǎng).韓國(guó)修訂糖、碳水化合物、脂肪、維生素D、鉻等的每日營(yíng)養(yǎng)成分標(biāo)準(zhǔn)值 ［EB/OL］.（2016-6-17）.http://www.wtociq.gov.cn

Isolation，Identification and Enzymatic Characteristics of Yeasts Producing β-Glucosidase

XU Yanan1，SHI Xuewei1，AN Yangyang2，TAN Siwei1，XIAO Jing1，TONG Junmao1
（1.College of Food Science，Shihezi University，Shihezi 832000，China；2.Administered by the Department，Baotou Vocational and Technical College，Baotou 010043，China）

During the fermentation of wine under natural conditions，non-Saccharomyces yeasts predominate in the initial stage of fermentation，and they can produce the unique hydrolytic activity β-glucosidases which give the wine a special aroma.In this study，a strain with good capacity of producing β-glucosidase was isolated from mustby the collection and screening of non-Saccharomyces yeasts during the fermentation of Xinjiang Cabernet.The strain was indentified as Pichia kluyver and named P.kluyveri XYN086 by morphology and ITS sequence analysis.The studies on enzymatic properties showed that the optimum pH for the β-glucosidase was 6.0 and its activity remained at more than 60%in pH 6.0-8.0.Furthermore，the optimum temperature for this enzyme was 60℃ and its activity was kept better at this temperature.Metal ions has a great influence on the activity of β-glucosidase，the enzyme was activated by Fe2+and Cu2+，whereas it was inhibited by Mg2+，Ca2+，K+，and Na+.These results showed that XYN086 had the potentialdevelopment values of producing β-glucosidase.

β-glucosidase，non-Saccharomyces，enzymatic characteristics

Q 939.9

A

1673—1689（2016）010—1100—06

2015-01-07

新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)科技攻關(guān)項(xiàng)目（P20136500002-1146；2015AB016，2016AB009）；新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)青年科技創(chuàng)新資金項(xiàng)目（DEC_PGUEIK_893341）；新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)科技攻關(guān)與成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目（2016AD024）。

*通信作者：童軍茂（1963—），男，山東招遠(yuǎn)人，工學(xué)博士，教授，主要從事果蔬貯藏與加工研究。E-mail：1730233122@qq.com