免疫組化聯(lián)合抗體在胸腹水沉渣石蠟包埋病理診斷中的應(yīng)用觀察

彭麗姿

摘要：目的 探討在胸腹水沉渣石蠟包埋中聯(lián)合應(yīng)用免疫組化進行檢查的效果。方法 選取我院惡性及存在惡性傾向的體液標本共56例，對其進行沉渣石蠟包埋、切片，采用免疫組化法進行檢查，觀察檢查結(jié)果。結(jié)果 沉渣石蠟包埋聯(lián)合免疫組化檢測法檢出的陽性率為82.1%，高于液基細胞學檢測法，組間比較有差異（P<0.05）。結(jié)論 在胸腹水沉渣石蠟包埋中聯(lián)合應(yīng)用免疫組化進行檢查，能夠提升臨床檢出率，確定腫瘤細胞的來源及其發(fā)病部位，為臨床治療提供參考意見。

關(guān)鍵詞：胸腹水沉渣石蠟包埋；免疫組化；診斷

胸腹水是臨床上一種常見的并發(fā)癥，臨床上對其進行診斷時往往采用體液細胞學檢測法，但這種檢測方法的診斷率相對較低。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取于2013年9月～2015年9月我院各個科室送檢的胸腹水標本共260例。其中，患者的年齡41～79歲，平均年齡（56.67±3.29）歲。依據(jù)患者的臨床資料與標本的鏡下形態(tài)選取惡性及存在惡性傾向的體液標本共56例。

1.2方法

1.2.1切片制作方法 將選取的56例標本進行離心，然后舍棄上清液，吸取沉淀物后，將其制作成1張液基細胞涂片，采用濾紙將剩余的沉淀物進行包埋，包埋完成后進行組織學標號，并將其與組織標本放置于脫水機中，按照組織標本的制作方法對其進行固定、脫水、透明以及浸蠟，制成石蠟組織塊后，再將其制成3～4μm的切片。

1.2.2免疫組化染色方法 檢測方法使用Elivision法，抗體采用CEA、CK-H以及CKlow等，試劑采用福州邁新生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。染色方法具體如下：首先，將切片進行常規(guī)脫蠟至水，洗液采用PBS。然后，滴入3%的過氧化氫，于常溫下將其放置10min，并依據(jù)相關(guān)要求進行抗原修復(fù)操作，再滴入一抗，將其放置于4℃的冰箱中過夜。最后，向其滴入二抗，DAB顯色后，再采用蘇木素進行復(fù)染，并用鹽酸乙醇對其進行分化，并將切片脫水、封片。

1.3評價指標 陽性的評判標準主要包括三種，分別是：①CEA、D2-40以及Tg等部分腫瘤細胞的細胞質(zhì)著色；②CK-H、CKlow、Calretin以及CA125腫瘤細胞的細胞膜著色；③Ki-67、TTF-1腫瘤細胞的細胞核著色。

1.4統(tǒng)計學方法 采取統(tǒng)計學軟件SPSS19.0對上述數(shù)據(jù)處理，計數(shù)采取率（%），組間率對比采取χ2檢驗，對比以P<0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1兩種方法檢測胸腹水的檢出率比較分析 沉渣石蠟包埋聯(lián)合免疫組化檢測法檢出的陽性率為82.1%，高于液基細胞學檢測法，組間比較有差異（P<0.05）。見表1。

2.2免疫組化檢測法結(jié)果分析 沉渣石蠟包埋聯(lián)合免疫組化檢測法檢出的46例患者中，其中，表現(xiàn)為肺腺癌的患者共21例，表現(xiàn)為鱗癌的患者共10例，表現(xiàn)為卵巢癌的患者共4例，表現(xiàn)為胃腺癌的患者共9例，表現(xiàn)為間皮瘤的患者共2例。見表2。

3 討論

胸腹水脫落細胞學檢查是臨床上一種常用的檢測方法，該方法具有簡便、準確性高等特點，是臨床上診斷良惡性胸腹水的一種常用方法[1]。近幾年，隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，膜式超薄液基細胞學檢測技術(shù)以及沉渣石蠟包埋法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于胸腹水細胞的涂片中，其中，采用沉渣石蠟包埋法制作切片，不僅可以提升切片的制作數(shù)量，保存細胞的完整性，提升臨床檢出率，同時還能夠?qū)ζ溥M行免疫組化染色，在此基礎(chǔ)上還可以聯(lián)合使用抗體檢測，從而能夠?qū)δ[瘤細胞進行有效分類[2]。

目前，臨床上采用胸腹水脫落細胞學檢查時，診斷較為困難的是對間皮細胞與癌細胞的區(qū)分，特別是當間皮細胞退化后，由于不具有典型性，更易被誤診[3]。針對較難確診的患者，可以進一步采用免疫組化聯(lián)合抗體法進行檢查。臨床實踐中，我們依據(jù)單個抗體對不同的腫瘤細胞具有不同的特異性與敏感性的原理，在此基礎(chǔ)上，根據(jù)胸腹水沉渣石蠟包埋切片的結(jié)果選取相應(yīng)的抗體，進而采用多種抗體進行聯(lián)合檢測[4]。目前，在胸腹水細胞學涂片中，我們常常采用Calretin、CK-H、CEA以及TTF-1四種抗體進行腫瘤的鑒別。其中，Calretin屬于一種鈣結(jié)合蛋白，該物質(zhì)主要存在于人體的神經(jīng)元以及其他細胞中，常見于間皮瘤中，而在腺癌中則較少見，因此，該物質(zhì)可以作為惡性間皮瘤的標志物[5]；CK-H屬于一種高分子量的細胞角蛋白，往往在人體皮膚的基底細胞、棘層細胞以及部分前列腺基底細胞等細胞層均有所表達，既可以作為鱗癌與腺癌之間鑒別的標志物，同時還可以作為間皮瘤與腺癌之間鑒別的標志物[6]；CEA主要存在于人體各種腺皮上皮源性腫瘤中，特別是在各種腺癌細胞中廣泛存在，其中，該物質(zhì)在人體的胃腸道腺癌中具有較高的陽性率，而在人體的體腔間皮細胞中則不存在，且在間皮瘤與增生性間皮細胞中呈現(xiàn)為不表達或者是低表達，因此，該物質(zhì)是腺癌與間皮癌之間鑒別的重要標志[7]；TTF-1主要存在于原發(fā)性肺腺癌中，且對其具有較高的敏感性與特異性，因此，該物質(zhì)可以作為原發(fā)性肺腺癌與轉(zhuǎn)移性肺腺癌之間鑒別的標志物，同時該物質(zhì)對于肺原發(fā)性低分化腺癌與鱗癌也具有一定的鑒別價值[8]。臨床上采用CKlow、CK-H、CEA以及TTF-1一組抗體聯(lián)合應(yīng)用作為鱗癌與腺癌的鑒別，同時還可以作為腫瘤細胞來源于肺臟的依據(jù)。Calretin呈現(xiàn)為陽性表達說明患者為間皮瘤間皮增生，但是對其良惡性的具體判斷還需依據(jù)患者腫瘤細胞的異型性、核分裂數(shù)等進行綜合判斷。CKlow與CK-H均呈現(xiàn)為陰性，但TTF-1呈現(xiàn)為陽性，則應(yīng)該考慮患者為肺未分化癌。

綜上所述，在胸腹水沉渣石蠟包埋中聯(lián)合應(yīng)用免疫組化進行檢查，能夠提升臨床檢出率，確定腫瘤細胞的來源及其發(fā)病部位，為臨床治療提供參考意見。

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編輯/哈濤