消除血漿高脂血標本對生化項目測定結(jié)果干擾的方法研究

蔡麗君，林赟，陳鳳平

（1.廣州市天河區(qū)石牌街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗科，廣東510630；2.暨南大學(xué)附屬華僑醫(yī)院檢驗科，廣東廣州510630）

消除血漿高脂血標本對生化項目測定結(jié)果干擾的方法研究

蔡麗君1，林赟1，陳鳳平2

（1.廣州市天河區(qū)石牌街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗科，廣東510630；2.暨南大學(xué)附屬華僑醫(yī)院檢驗科，廣東廣州510630）

目的探討采用高速離心法、乙醚抽提法及生理鹽水稀釋法消除高脂血標本對生化酶類指標測定結(jié)果干擾的可行性，并比較3種方法的優(yōu)劣。方法收集2014年8月至2015年3月廣東省廣州市天河區(qū)石牌街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心采集的明顯高脂血標本52份，以3 000 r/min離心10 min得到原高脂血漿。采用MINDRAY BS-390全自動生化分析儀測定原高脂血漿、高速離心血漿、乙醚抽提血漿及生理鹽水稀釋血漿中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶同工酶及淀粉酶水平，并分析比較3種方法對各種酶類指標檢測結(jié)果的影響。結(jié)果原高脂血漿與高速離心血漿、乙醚抽提血漿及生理鹽水稀釋血漿中各種酶類指標測定結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；且各種酶類指標測定值由高至低依次為高速離心血漿、乙醚抽提血漿、生理鹽水稀釋血漿和原高脂血漿。結(jié)論高速離心法相對乙醚抽提法及生理鹽水稀釋法處理高脂血標本能明顯減輕高脂血標本混濁對生化分析儀測定酶類結(jié)果的干擾和影響。

實驗室技術(shù)和方法；標本；高脂血

我國隨著改革開放，人民生活水平日益改善，近十多年來，國人生活方式及飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了巨大變化，導(dǎo)致高脂血癥發(fā)生率呈上升趨勢［1］，當三酰甘油水平大于3.0 mmol/L時血液標本的外觀可呈不同程度混濁。因此，高脂血標本在臨床檢驗工作中較為常見，對臨床生化各項指標、凝血功能相關(guān)指標、放射免疫多項指標檢驗的準確性均會造成不同程度的干擾和影響。輕度高脂血標本對各種生化指標的檢測結(jié)果可能不會造成嚴重的干擾或影響，但嚴重高脂血標本則明顯干擾或影響各項指標的檢測結(jié)果［2］。本研究就高脂血標本對生化分析儀測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine amiotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartateaminotransferase，AST）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（gamma glutamyltransferase，GGT）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme，CK-MB）及淀粉酶（amylase，AMY）等測定結(jié)果的影響通過采用高速離心法、乙醚抽提法及生理鹽水稀釋法處理高脂血標本，比較3種方法的優(yōu)劣，并探討消除高脂血標本對其他檢驗項目測定結(jié)果的干擾，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1標本來源選擇2014年8月至2015年3月在廣州市天河區(qū)石牌街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心門診就診患者52例，采集空腹靜脈血4.0 mL（肝素鋰真空抗凝管），三酰甘油檢測結(jié)果為10.2～24.5 mmol/L。

1.2方法將高脂肪乳糜標本3 000 r/min離心10 min得到原高脂血漿。然后將標本分為4份：第1份采用原高脂血漿測定；第2份采用高速離心法處理（13 000 r/min離心10 min），取下層清亮血漿測定；第3份采用乙醚充分振搖抽提后再以4 000 r/min離心10 min，取下層清亮血漿測定；第4份采用生理鹽水進行5倍稀釋后測定。所有標本同時在MINDRAY BS-390全自動生化分析儀上測定ALT、AST、ALP、GGT、LDH、CK-MB及AMY，所有指標的檢測均嚴格按照儀器及試劑盒說明書操作。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析與q檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

原高脂血漿與高速離心血漿、乙醚抽提血漿及生理鹽水稀釋血漿中各種酶類指標測定結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；且各種酶指標測定值由高至低依次為高速離心血漿、乙醚抽提血漿、生理鹽水稀釋血漿和原高脂血漿，見表1。

表1　原高脂血漿與3種不同處理方法血漿各種酶類指標測定結(jié)果比較（±s，U/L，n=52）

表1　原高脂血漿與3種不同處理方法血漿各種酶類指標測定結(jié)果比較（±s，U/L，n=52）

注：與原高脂血漿比較，aP＜0.01；與高速離心法血漿比較，bP＜0.01；與乙醚抽提法血漿比較，cP＜0.01。

血漿原高脂血漿高速離心法血漿乙醚抽提法血漿生理鹽水稀釋法血漿ALT 8.9±7.1 40.8±9.3a29.7±7.6ab23.1±6.0abcASTALPGGTLDHCK-MBAMY 10.8±9.6 47.6±10.2a36.8±9.3ab19.8±7.5abc24.7±13.5 84.6±15.2b60.5±14.1ab48.8±12.3abc8.1±4.2 35.6±8.4a24.7±7.3ab16.8±5.1abc58.1±20.2 143.0±27.6a108.8±24.3ab75.1±23.1abc2.1±1.0 13.2±4.3a8.1±3.8ab5.2±2.4abc45.9±15.2 143.2±25.3a102.2±22.1ab74.8±20.4abc

3　討論

高脂血標本是臨床生化檢驗工作中常遇到的棘手問題，其混濁的主要原因是三酰甘油、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、中間密度脂蛋白、高密度脂蛋白及乳糜微粒等脂質(zhì)增多，使血漿濁度增高所致，對臨床檢驗項目造成的干擾極易影響臨床對患者的診治，甚至引發(fā)醫(yī)療糾紛。因此，在臨床檢驗過程中應(yīng)事先篩選標本，如通過目測法或自動化儀器對比篩選不符合檢驗要求的高脂血標本，確定干擾物性質(zhì)和級別并進行處理，以降低其對臨床檢驗項目的干擾和影響，從而提高臨床診斷的準確性和為臨床治療提供可靠的實驗診斷依據(jù)。

在臨床檢驗工作中高脂血標本的主要來源通常有以下幾方面：（1）高血壓、心血管疾病及高脂血癥患者；（2）長期高脂及高熱量飲食者，患者在日常飲食過程中常攝入過量高脂和高熱量食物造成消化道吸收過量脂質(zhì)進入血液，使血液標本產(chǎn)生混濁外觀（俗稱乳糜血）［3-4］；（3）某些患者由于無法進食引起營養(yǎng)不良或有消耗性疾病需輸注脂肪乳而導(dǎo)致血液脂質(zhì)水平過高［5-6］。

高脂血標本對臨床生化分析儀各項指標測定的干擾或影響機制：（1）由于高脂血標本的脂質(zhì)含量過高導(dǎo)致混濁度增高，可增加生化分析儀測量各指標體系的本底，使儀器在測定過程中吸光度值的變化超出了儀器的光學(xué)測量范圍，使儀器無法讀取正確的測量數(shù)據(jù)，導(dǎo)致部分臨床生化指標無法檢測；（2）由于高脂血標本中過多的脂質(zhì)微粒在反應(yīng)杯中運動碰撞而干擾儀器對吸光值的檢測，導(dǎo)致相應(yīng)的檢測指標結(jié)果不準確；（3）由于高脂血標本中過多的不溶性脂質(zhì)微粒使標本混濁，增加了標本內(nèi)各種物質(zhì)成分的極性與非極性，導(dǎo)致生化分析儀產(chǎn)生光散射干擾［7-8］，從而影響臨床生化指標測定的可靠性。

以往在臨床檢驗工作中處理嚴重高脂血混濁標本時較多采用稀釋、乙醚抽提2種方式進行處理。但稀釋法在處理高脂血標本時較容易產(chǎn)生稀釋誤差，且隨血標本稀釋倍數(shù)增高稀釋誤差也隨著倍增［9］，同時由于稀釋后血標本脂質(zhì)微粒依然存在，所以，對臨床生化分析儀產(chǎn)生的光散射干擾并沒有達到完全消除的效果。而乙醚抽提法中由于乙醚是一種較強的有機溶劑，較容易引起高脂血標本中蛋白質(zhì)成分變性。特別是用乙醚抽提樣本時容易使高脂血標本中的蛋白質(zhì)酶類活性發(fā)生變化，使高脂血標本中蛋白質(zhì)酶類的檢測結(jié)果相對患者的真實檢測結(jié)果偏低。另外乙醚有機溶劑在抽提高脂血標本時對其他的糖類物質(zhì)、無機離子、非蛋白質(zhì)化合物等指標的檢測也同樣會產(chǎn)生干擾或影響。目前，對高脂血標本較常用的是采用低溫高速離心法，即將高脂血標本加蓋密封進行高速離心，離心后可見標本分為2層，將下層血漿吸取出來再用生化分析儀進行各項臨床生化指標的檢測。但低溫高速離心法對離心機性能要求較高，且對嚴重高脂血標本需離心的時間較長，這樣可能會導(dǎo)致標本產(chǎn)生溶血從而干擾或影響相關(guān)臨床生化指標的檢測。同時低溫高速離心機的購置費用也較高，對基層醫(yī)院檢驗科而言不易配備和普及。而常溫高速離心機因價格較低廉，且操作簡單、方便，實驗室也容易配備。本研究結(jié)果顯示，原高脂血漿用生化分析儀所檢測的各種酶類指標結(jié)果與高速離心血漿、乙醚抽提血漿及生理鹽水稀釋血漿的檢測結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），且高速離心血漿、乙醚抽提血漿及生理鹽水稀釋血漿3種方法處理高脂血標本后檢測結(jié)果比較，差異也均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），且各種酶類指標測定結(jié)果由高至低依次為高速離心血漿、乙醚抽提血漿、生理鹽水稀釋血漿和原高脂血漿。因此，作者認為，常溫高速離心法是一種能較好地消除高脂血標本的干擾及影響臨床生化分析儀檢測結(jié)果的簡便、有效且可行方法之一。

目前，在臨床檢驗工作中如何尋找消除高脂血標本對臨床檢驗項目的干擾對策是亟須重視的問題：（1）消除單項檢驗指標樣本的干擾最好的解決對策是改變檢測項目的實驗方法、試劑或檢測時間，如肌酐（serum creatinine，Cr）作為肌酸代謝的終產(chǎn)物，是臨床疾病診斷中用于衡量腎功能的一項常規(guī)指標，其在血液中的變化主要由腎小球濾過能力決定。通常臨床實驗室檢測Cr最常用的方法為苦味酸速率法，因此，在用該法進行檢測時常需選擇“窗口期”（即標本和試劑混合后25～60 s）進行測定，這樣才能最大限度地消除快速反應(yīng)假性Cr物質(zhì)和慢速反應(yīng)假性Cr物質(zhì)的干擾。此外采用加入雙試劑（抗壞血酸酶和亞硝基鐵氰化鉀）的肌氨酸氧化酶法（需去除鎂離子的干擾）檢測Cr也是一種良好的檢測方法，可去除抗壞血酸和膽紅素的干擾。同型半胱氨酸作為甲硫氨酸和半胱氨酸代謝過程中一個重要的中間產(chǎn)物，可直接或間接引起血管內(nèi)皮細胞損傷，促進血管平滑肌細胞增殖，影響低密度脂蛋白的氧化，增強血小板功能，從而促進血栓形成。因此，在全自動生化分析儀中可采用熒光偏振免疫技術(shù)對血清同型半胱氨酸進行測定，可為臨床診治動脈粥樣硬化性血管性疾病提供更高效、準確、可靠和可行的依據(jù)。（2）消除多項檢測指標標本的干擾。在臨床生化檢測多項檢測指標標本時需采用可行性強、無交叉干擾及操作簡單、易行的實驗方法，如利用依米試劑不溶于水的特性，將其與高脂血清（漿）混合后可將高濃度脂質(zhì)分離出來。雖然經(jīng)上述多種途徑處理后的高脂血標本可消除高濃度脂質(zhì)微粒對多種生化指標檢測造成的干擾，但在某種程度上仍不能消除高脂血標本對清蛋白、GGT、血尿素氮等指標檢測的干擾［10］。因此，在臨床檢驗工作中應(yīng)優(yōu)先選擇去脂混合劑，再采用常溫高速離心法，密封分離標本，并對其下層清液進行測定，可有效降低因血中膽固醇濃度過高對各項指標檢測的影響，為高脂血癥患者提供準確、可靠的檢驗結(jié)果。（3）消除高脂血標本對凝血相關(guān)指標檢測的干擾。凝血相關(guān)指標常采用膠體金或免疫比濁法進行檢測，要求對高脂血標本進行適當比例稀釋，即可避免或明顯降低高脂血標本對凝血相關(guān)指標的干擾。

綜上所述，在臨床工作中采用一些簡便、易行的方法預(yù)先處理高脂血標本可明顯降低檢驗過程中各種干擾因素對各項指標檢測結(jié)果的影響，從而提高臨床檢驗結(jié)果的準確性，為臨床疾病的診治提供可靠的實驗診斷依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2016.12.038

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1009-5519（2016）12-1883-03

（2016-01-06）