黑枸杞花色苷提取工藝的優(yōu)化

潘自皓,顧子楊,周　帥,蔣　月,耿思琪,丁　帆,裴昌松,潘　揚(yáng),*

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,江蘇南京 210046;2.蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科,江蘇蘇州 215006)

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黑枸杞花色苷提取工藝的優(yōu)化

潘自皓1,顧子楊1,周帥1,蔣月1,耿思琪1,丁帆1,裴昌松2,*,潘揚(yáng)1,*

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,江蘇南京 210046;2.蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科,江蘇蘇州 215006)

以總花色苷含量和DPPH·清除率為評(píng)價(jià)指標(biāo),在考察總花色苷含量測(cè)定方法的基礎(chǔ)上,對(duì)黑枸杞花色苷的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)和L9(34)正交實(shí)驗(yàn),選擇提取方式為靜置法,提取溶劑為1%甲酸,提取溫度為75 ℃,料液比為1∶30 g/mL,每次提取時(shí)間為1 h和提取次數(shù)為3次。優(yōu)化工藝的總花色苷含量和DPPH·清除率分別達(dá)到(450.55±5.91) mg/100 g DW和72.53%±0.60%,相比基礎(chǔ)工藝分別提高了17.22%和21.96%。

黑枸杞,花色苷,總花色苷含量,DPPH·清除率

黑枸杞(LyciumruthenicumMurr.),為茄科枸杞屬多年生多棘刺灌木,其果實(shí)味甜多汁,營(yíng)養(yǎng)豐富,被譽(yù)為荒漠中的“軟黃金”和“黑珍珠”,極具研究和開(kāi)發(fā)價(jià)值。黑枸杞含有極為豐富的花色苷類成分[1],而花色苷又具有顯著的抗氧化活性,遠(yuǎn)強(qiáng)于維生素C和維生素E[2-3],其含有的眾多酚羥基能夠切斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng),從而有效清除活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)[4]。

植物花色苷的提取方式主要是溶劑提取法,受到多種因素的影響,主要包括原料粒徑,料液比,提取溶劑種類、濃度與pH,提取溫度、時(shí)間和次數(shù)等。其中,原料粒徑和料液比對(duì)花色苷提取得率影響顯著[5],提取溶劑多數(shù)選擇弱酸性的甲醇、乙醇、丙酮及其混合溶劑,提取溫度不宜太高,提取時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng),以避免花色苷類成分發(fā)生降解[6-8]。同時(shí),溶劑提取法雖然操作簡(jiǎn)單,對(duì)設(shè)備要求較低,但也存在提取效率較低,雜質(zhì)含量高,提取時(shí)間較長(zhǎng)與熱不穩(wěn)定成分易被破壞等缺點(diǎn),故常與輔助提取方法結(jié)合使用,以改進(jìn)提取效果,目前常用的輔助提取方法包括超聲、振蕩和微波提取法[9-11]。

為開(kāi)展黑枸杞花色苷的產(chǎn)品開(kāi)發(fā),本研究以總花色苷含量和DPPH·清除率為指標(biāo),考察了不同的工藝參數(shù)對(duì)提取效果的影響,優(yōu)化了黑枸杞花色苷的提取工藝。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

黑枸杞干果產(chǎn)自青海省德令哈地區(qū),鴻草生物科技(蘇州)有限公司惠贈(zèng);甲醇、乙醇、丙酮和甲酸南京化學(xué)試劑有限公司,分析純;KCl和無(wú)水NaAc上海Aladdin公司,分析純;DPPH標(biāo)準(zhǔn)品美國(guó)SIGMA-ALDRICH公司;磷酸天津科密歐化學(xué)試劑有限公司,色譜純;乙腈美國(guó)TEDIA公司,色譜純。

MDF-U5386S超低溫冰箱日本SANYO公司;LGJ-10真空冷凍干燥機(jī)北京松源華興科技發(fā)展有限公司;DZF-6050真空干燥箱上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;AB204-S分析天平瑞士Mettler Toledo公司;PB-10 pH計(jì)德國(guó)Sartorius公司;Reference超純水儀美國(guó)Millipore公司;KQ-600DE超聲波清洗器昆山超聲儀器有限公司;THZ-C-1恒溫振蕩器太倉(cāng)強(qiáng)樂(lè)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;HH-2恒溫水浴鍋金壇榮華儀器制造有限公司;5810R高速冷凍離心機(jī)、ThermoMixer C恒溫混勻儀德國(guó)Eppendorf公司;UV2401PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)日本SHIMADZU公司;1260 Infinity高效液相色譜儀美國(guó)Agilent公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1樣品預(yù)處理挑選優(yōu)質(zhì)黑枸杞干果,去除莖葉;真空冷凍干燥12 h;粉碎機(jī)研成粉末;過(guò)篩(150 μm);-20 ℃密封避光保藏;使用前真空干燥1 h,得黑枸杞干果粉末。

1.2.2提取工藝稱取1 g黑枸杞干果粉末,置于100 mL具塞錐形瓶?jī)?nèi);加入15 mL 1%甲酸甲醇(即體積比1∶99),40 ℃避光超聲提取30 min;4000 r/min,離心15 min,收集上清液;取沉淀物,按上法再提取1次,合并上清液;40 ℃水浴避光蒸發(fā)濃縮;1%甲酸甲醇定容至25 mL,得提取產(chǎn)物。

1.2.3總花色苷含量測(cè)定方法參考文獻(xiàn)[12],采用pH示差法測(cè)定,即取0.2 mL的提取產(chǎn)物,分別加入到3.8 mL、pH1.0、0.025 mol/L氯化鉀溶液與3.8 mL、pH4.5、0.4 mol/L醋酸鈉緩沖溶液中,室溫避光靜置適當(dāng)時(shí)間,得pH1.0和pH4.5供試品溶液;分別于最大吸收波長(zhǎng)處和700 nm處測(cè)定吸光值;按如下經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算總花色苷含量。

總花色苷含量(Total anthocyanins content,TAC,mg/100 g DW)=(A×Mw×DF×103/ε×l)×V×100/m

式中:A(吸光值計(jì)算結(jié)果)=(Aλmax-A700nm)pH1.0-(Aλmax-A700nm)pH4.5;Mw(分子量)=449.2 g/mol,以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷計(jì);DF(稀釋因子)=4.0 mL/0.2 mL=20;ε(摩爾消光系數(shù))=6,900 L/mol·cm,以矢車菊素-3-O-葡萄糖苷計(jì);l(比色皿光徑長(zhǎng)度)=1 cm;V:提取產(chǎn)物體積;m:提取樣品質(zhì)量。

1.2.4總花色苷含量測(cè)定方法的考察采用1.2.3所述方法制備兩種供試品溶液,分別考察測(cè)定方法的檢測(cè)波長(zhǎng)和靜置時(shí)間。分別取0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mL提取產(chǎn)物,加入到pH1.0和pH4.5緩沖液中至4.0 mL,室溫避光靜置60 min,制備得不同濃度的兩種供試品溶液;于530 nm處測(cè)定吸光值,從而考察測(cè)定方法的線性范圍。

1.2.5DPPH·清除率測(cè)定方法參考文獻(xiàn)[13]略作改進(jìn),取30 μL提取產(chǎn)物或純水(空白對(duì)照),與2 mL、0.4 mmol/L DPPH·甲醇溶液充分混合,40 ℃避光靜置40 min,得供試品溶液;使用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于512 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值;采用下式計(jì)算其DPPH·清除率。

DPPH·清除率(%)=[Ac-(Ai-Aj)]/Ac×100

1.2.6組成分析方法參考文獻(xiàn)[14],建立提取產(chǎn)物組成分析的HPLC法。

1.2.6.1供試品溶液的制備取1 mL提取產(chǎn)物,0.45 μm濾膜過(guò)濾,取續(xù)濾液注入進(jìn)樣瓶,得提取產(chǎn)物供試品溶液。

1.2.6.2色譜條件色譜柱:Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm,400 Bar,pH1.0～8.0);柱溫:25 ℃;流動(dòng)相A:0.5%磷酸,流動(dòng)相B:乙腈;流速:1 mL/min;梯度洗脫條件:0～10 min:5%～12% B,10～30 min:12%～20% B,30～40 min:20%～50% B,40～42 min:50%～5% B,后運(yùn)行8 min;二極管陣列檢測(cè)器(DAD),檢測(cè)波長(zhǎng):520 nm,光譜掃描:190～640 nm;進(jìn)樣量:10 μL。

1.2.7單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.7.1提取方式超聲、振蕩和靜置法是花色苷最常見(jiàn)的提取方式,故在1.2.2基礎(chǔ)工藝下,采用這3種方式分別提取黑枸杞花色苷,超聲功率和振蕩轉(zhuǎn)速分別選擇300 W和150 r/min。

1.2.7.2提取溶劑苷類成分在甲醇、乙醇、丙酮等極性大的溶劑中溶解度高,且花色苷含有多個(gè)酚羥基,呈弱酸性。故采用靜置法,分別以1%甲酸甲醇、1%甲酸乙醇、1%甲酸丙酮與1%甲酸作為溶劑提取黑枸杞花色苷,提取溫度40 ℃,提取料液比1∶15 g/mL,每次提取30 min,提取2次。同時(shí),考慮到文獻(xiàn)常用酸性甲醇作為提取溶劑[2-3],與酸水提取產(chǎn)物的組成可能存在差異,故采用HPLC法對(duì)1%甲酸、1%甲酸甲醇和1%甲酸50%甲醇的提取產(chǎn)物進(jìn)行了分析。其中,為使1%甲酸甲醇提取產(chǎn)物能充分離子化,故將其用純水稀釋1倍。

1.2.7.3提取溫度采用靜置法,以1%甲酸作為溶劑,分別在不同溫度(30、40、50、60、70、80、90 ℃)的水浴中提取黑枸杞花色苷,提取料液比1∶15 g/mL,每次提取30 min,提取2次。

1.2.7.4提取料液比采用靜置法,以1%甲酸作為溶劑,提取溫度70 ℃,設(shè)置不同料液比(1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50 g/mL)提取黑枸杞花色苷,每次提取30 min,提取2次。

1.2.7.5提取時(shí)間采用靜置法,以1%甲酸作為溶劑,提取溫度70 ℃,提取料液比1∶30 g/mL,設(shè)定不同的每次提取時(shí)間(10、30 min、1、2、3、4 h)提取黑枸杞花色苷,提取2次。

1.2.7.6提取次數(shù)采用靜置法,以1%甲酸作為溶劑,提取溫度70 ℃,提取料液比1∶30 g/mL,每次提取時(shí)間1 h,分別提取不同次數(shù)(1、2、3、4、5次)。

1.2.8正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化根據(jù)單因素優(yōu)化結(jié)果,選擇連續(xù)變量中影響最顯著的3個(gè)因素,即料液比、溫度和次數(shù),并在最優(yōu)水平附近各取三個(gè)水平(如表1所示),做L9(34)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。

表1　實(shí)驗(yàn)因素與水平表

同時(shí),為綜合考察各實(shí)驗(yàn)的TAC與DPPH·清除率,并考慮到表征抗氧化活性的DPPH·清除率更重要,故將兩個(gè)指標(biāo)的權(quán)重分別設(shè)定為0.45和0.55。為使兩個(gè)指標(biāo)的單位統(tǒng)一,故將TAC和DPPH·清除率的最優(yōu)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別定為45分和55分,而TAC的其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果得分=TAC其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果×45分/TAC最優(yōu)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,DPPH·清除率的其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果得分=DPPH·清除率其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果×55分/DPPH·清除率最優(yōu)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.2.9數(shù)據(jù)處理與分析方法實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,結(jié)果用Mean±SD表示,統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 16.0完成。

2　結(jié)果與分析

2.1TAC測(cè)定方法的考察

2.1.1檢測(cè)波長(zhǎng)的確定由圖1全波長(zhǎng)掃描結(jié)果可知,pH1.0供試品溶液在可見(jiàn)光區(qū)的最大吸收波長(zhǎng)為530 nm,吸光值為0.80,而pH4.5供試品溶液在可見(jiàn)光區(qū)無(wú)明顯特征吸收,故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為530 nm。

圖1　TAC測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)考察Fig.1　Determination of the wavelength of TAC detection

2.1.2靜置時(shí)間的確定由圖2可知,從10 min開(kāi)始,隨靜置時(shí)間增加,pH1.0供試品溶液的吸光值逐漸增大,至60 min趨于平穩(wěn);而pH4.5供試品溶液至40 min已達(dá)到穩(wěn)定。綜合考慮,選擇60 min作為TAC測(cè)定的靜置時(shí)間。

圖2　TAC測(cè)定的靜置時(shí)間考察Fig.2　Determination of the equilibrium time of TAC detection

2.1.3線性范圍的確定建立吸光值計(jì)算結(jié)果(A)與TAC(X)的回歸方程為A=0.001243X+0.02279,相關(guān)系數(shù)(R2)為0.9958。由此可見(jiàn),在(46.34～1482.86) mg/100 g DW范圍內(nèi),吸光值計(jì)算結(jié)果與TAC間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1提取方式的確定由圖3可見(jiàn),3種提取方式的TAC較為接近(p>0.05);同時(shí),靜置提取的DPPH·清除率顯著(p<0.05)高于超聲提取和振蕩提取。由此,選擇靜置法作為本工藝的提取方式。

圖3　提取方式的考察Fig.3　Investigstion of the method of anthocyanins extraction from LRMF

圖4　提取溶劑的考察Fig.4　Investigstion of the solvent of anthocyanins extraction from LRMF

2.2.2提取溶劑的確定由圖4可知,不同提取溶劑差異很大,1%甲酸甲醇和1%甲酸提取產(chǎn)物的兩個(gè)指標(biāo)均極顯著優(yōu)于1%甲酸乙醇和1%甲酸丙酮(p<0.001)。同時(shí),1%甲酸甲醇提取產(chǎn)物的TAC僅略高于1%甲酸(p>0.05),而1%甲酸提取產(chǎn)物的DPPH·清除率卻極顯著優(yōu)于1%甲酸甲醇(p<0.001)。

由圖5可見(jiàn),1%甲酸和1%甲酸50%甲醇提取產(chǎn)物均在檢測(cè)時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)7個(gè)色譜峰,且保留時(shí)間和峰形相近,提示其提取產(chǎn)物一致;而1%甲酸甲醇提取產(chǎn)物僅出現(xiàn)5個(gè)色譜峰,但均能與另兩種溶劑相對(duì)應(yīng),其3號(hào)和7號(hào)峰的缺失可能與提取產(chǎn)物被稀釋1倍有關(guān)。上述結(jié)果表明酸性甲醇和酸水提取產(chǎn)物的組成不存在顯著差異,故選擇1%甲酸作為提取溶劑。

圖5　3種溶劑提取產(chǎn)物的HPLC譜圖Fig.5　HPLC spectrum of the extraction products from 3 solvent

2.2.3提取溫度的確定如圖6所示,不同提取溫度的結(jié)果差異不大,兩個(gè)指標(biāo)隨著提取溫度升高均略有增加。其次,雖然70 ℃的兩個(gè)指標(biāo)均略小于80 ℃和90 ℃,但都未見(jiàn)顯著性差異(p>0.05)。同時(shí),已有文獻(xiàn)報(bào)道花色苷在90 ℃下的降解半衰期為14.5 h[14],可見(jiàn)提取溫度過(guò)高對(duì)花色苷的穩(wěn)定性不利,故選擇70 ℃作為優(yōu)化工藝的提取溫度。

圖6　提取溫度的考察Fig.6　Investigstion of the temperature of anthocyanins extraction from LRMF

2.2.4提取料液比的確定由圖7可見(jiàn),隨著料液比的提高,提取產(chǎn)物的兩個(gè)指標(biāo)均先增加,再趨于平穩(wěn)。其中,1∶30 g/mL的TAC與1∶5～1∶20 g/mL間存在顯著性差異(p<0.05),而與1∶40、1∶50 g/mL間的差異不顯著(p>0.05);同時(shí),僅料液比1∶5 g/mL的DPPH·清除率與其他料液比間存在顯著性差異(p<0.05),而其他料液比間差異不顯著(p>0.05)。綜合上述結(jié)果,并考慮到節(jié)約溶劑,故選擇1∶30 g/mL作為優(yōu)化工藝的料液比。

圖7　提取料液比的考察Fig.7　Investigstion of the solid-liquid ratio of anthocyanins extraction from LRMF

2.2.5提取時(shí)間的確定如圖8所示,提取時(shí)間對(duì)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的影響都不大,差異都不顯著(p>0.05)。故選擇產(chǎn)物TAC含量最高的1 h作為優(yōu)化工藝的提取時(shí)間。

圖8　提取時(shí)間的考察Fig.8　Investigstion of the time of anthocyanins extraction from LRMF

2.2.6提取次數(shù)的確定由圖9可知,提取3次產(chǎn)物的TAC和DPPH·清除率均最高,但除提取1次產(chǎn)物以外(p<0.01),其他次數(shù)的兩個(gè)指標(biāo)間均不存在顯著性差異(p>0.05)。為簡(jiǎn)化工藝,縮短周期,故選擇兩次作為優(yōu)化工藝的提取次數(shù)。

表2　實(shí)驗(yàn)結(jié)果與直觀分析表

表3　方差分析

圖9　提取次數(shù)的考察Fig.9　Investigstion of the frequency of anthocyanins extraction from LRMF

注:R2=0.896,調(diào)整的R2=0.586。

2.3正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其直觀分析如下表2所示。由直觀分析結(jié)果的K平均可知,各因素的最優(yōu)水平組合為A2B3C3,即1∶30 g/mL,75 ℃和3次。由直觀分析結(jié)果的極差可見(jiàn),各因素的影響顯著性順序?yàn)镃>B>A,即提取次數(shù)的影響最顯著,提取溫度次之,而料液比最弱。由表3多因素方差分析可知,各因素與誤差均未見(jiàn)顯著性差異(p>0.05)。

經(jīng)過(guò)上述考察,確定優(yōu)化工藝為靜置法,1%甲酸,75 ℃,1∶30 g/mL,1 h和3次。

2.4優(yōu)化工藝的驗(yàn)證

按照基礎(chǔ)(1.2.2)和優(yōu)化工藝分別進(jìn)行黑枸杞花色苷的提取,結(jié)果如表4所示。優(yōu)化工藝提取產(chǎn)物的兩個(gè)指標(biāo)均優(yōu)于基礎(chǔ)工藝,分別達(dá)到(450.55±5.91)mg/100 g DW和72.53%±0.60%,相比前者分別提高了17.22%和21.96%(p<0.001)。

表4　優(yōu)化提取工藝的驗(yàn)證(n=3)

3　結(jié)論與討論

通過(guò)單因素和正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化,獲得了黑枸杞花色苷優(yōu)化的提取工藝,即靜置法提取,提取溶劑1%甲酸,提取溫度75 ℃,料液比1∶30 g/mL,每次提取時(shí)間1 h和提取次數(shù)3次。在優(yōu)化工藝條件下提取3批黑枸杞花色苷,其TAC和DPPH·清除率分別為(450.55±5.91) mg/100 g DW和72.53%±0.60%,相比基礎(chǔ)工藝分別提高了17.22%和21.96%。

同時(shí),在提取工藝的考察中也發(fā)現(xiàn)了一些與文獻(xiàn)報(bào)道并不完全一致的現(xiàn)象:文獻(xiàn)[9-11]常用超聲或振蕩提取法作為植物花色苷的提取方式,但本研究表明靜置提取的TAC與超聲、振蕩提取接近,但DPPH·清除率卻優(yōu)于后兩者。相比其他因素,提取方式對(duì)結(jié)果的影響可能并不顯著。由此,本研究采用DPPH·清除率最高,對(duì)設(shè)備要求低,成本低廉的靜置法作為提取方式。

文獻(xiàn)常用酸性甲醇、酸性乙醇或酸性丙酮作為植物花色苷的提取溶劑,但本研究發(fā)現(xiàn)1%甲酸丙酮的提取效率最差,提取液近無(wú)色;極性相對(duì)較弱的1%甲酸乙醇也極顯著低于1%甲酸甲醇和1%甲酸;而1%甲酸提取產(chǎn)物的TAC與1%甲酸甲醇相近,但DPPH·清除率卻優(yōu)于后者;HPLC組成分析也提示甲酸和甲酸甲醇提取產(chǎn)物的組成基本一致。鑒于此,本研究采用DPPH·清除率更高,毒性低且便于后續(xù)分離工藝的1%甲酸作為提取溶劑。

此外,HPLC組成分析結(jié)果(圖5)表明1號(hào)和5號(hào)峰為3種溶劑提取產(chǎn)物的2個(gè)主成分峰,其峰面積百分比分別超過(guò)13%和79%,且峰純度均接近閾值。在后續(xù)研究中應(yīng)通過(guò)LC-MS歸屬這2個(gè)主成分,從而以其作為標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)提取分離產(chǎn)物進(jìn)行半定量測(cè)定。

[1]李進(jìn),趙紅艷,原慧,等. 黑果枸杞性質(zhì)研究[J]. 食品科學(xué),2006,27(10):146-151.

[3]Lee J H,Lee H J,Choung M G. Anthocyanin compositions and biological activities from the red petals of Korean edible rose(Rosa hybrida cv. Noblered)[J]. Food Chemistry,2011,129(2):272-278.

[4]Rice-Evans C A,Miller N J. Antioxidant activities of flavonoids as bioactive components of food[J]. Biochemical Society Transactions,1996,24(3):790-795.

[5]Cissé M,Bohuon P,Sambe F,et al. Aqueous extraction of anthocyanins from Hibiscus sabdariffa:Experimental Kinetics and Modeling[J]. Journal of Food Engineering,2012,109(1):16-21.

[6]Maran J P,Sivakumar V,Thirugnanasambandham K,et al. Extraction of natural anthocyanin and colors from pulp of jamun

fruit[J]. Journal of Food Science and Technology,2014,52(6):1-10.

[7]Chandrasekhar J,Madhusudhan M C,Raghavarao K. Extraction of anthocyanins from red cabbage and purification using adsorption[J]. Food and Bioproducts Processing,2012,90(4):615-623.

[8]Anuar N,Mohd Adnan A F,Saat N,et al. Optimization of extraction parameters by using response surface methodology,purification,and identification of anthocyanin pigments in Melastoma malabathricum fruit[J]. The Scientific World Journal,2013:1-10.

[10]Adjéa F,Lozano Y F,Lozano P,et al. Optimization of anthocyanin,flavonol and phenolic acid extractions from Delonix regia tree flowers using ultrasound-assisted water extraction[J]. Industrial Crops & Products,2010,32(32):439-444.

[12]Ozturk I,Karaman S,Baslar M,et al. Aroma,Sugar and Anthocyanin Profile of Fruit and Seed of Mahlab(Prunus mahaleb L.):Optimization of Bioactive Compounds Extraction by Simplex Lattice Mixture Design[J]. Food Analytical Methods,2014,7(4):761-773.

[13]Ge Q,Ma X. Composition and antioxidant activity of anthocyanins isolated from Yunnan edible rose(An ning)[J]. Food Science and Human Wellness,2013,2(2):68-74.

[14]張芳軒,張名位,張瑞芬,等. 黑米種皮中花色苷組成及含量的HPLC分析[J]. 中國(guó)糧油學(xué)報(bào),2010,25(10):122-125.

[15]Jing P,Zhao S J,Ruan S Y,et al. Anthocyanin and glucosinolate occurrences in the roots of Chinese red radish(RaphanussativusL.),and their stability to heat and pH[J]. Food Chemistry,2012,133(4):1569-1576.

Optimization of the extraction process of anthocyanins inLyciumruthenicumMurr.

PAN Zi-hao1,GU Zi-yang1,ZHOU Shuai1,JIANG Yue1,GENG Si-qi1,DING Fan1,PEI Chang-song2,*,PAN Yang1,*

(1.Pharmacy School,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210046,China;2.Urology Surgery Department,the First Affiliated Hospital of Soochow University,Suzhou 215006,China)

Taken total anthocyanin content and DPPH radical scavenging ratio as indexes,the extraction process of the anthocyanins inLyciumruthenicumMurr.’s fruit(LRMF)had been optimized. By univariate experiment and L9(34)orthogonal test,the selected condition was determined as follows:static extraction(extraction mode),1% formic acid(extraction solvent),75 ℃(extraction temperature),1∶30 g/mL(solid-liquid ratio),1 h(extraction time)and 3 times(extraction frequency). Verification experiment demonstrated that the total anthocyanins content and DPPH radical scavenging ratio of the optimal process was(450.55±5.91)mg/100 g DW and 72.53%±0.60%,respectively,increased by 17.22% and 21.96% in contrast to basic process.

LyciumruthenicumMurr.;anthocyanin;total anthocyanin content;DPPH radical scavenging ratio

2016-02-17

潘自皓(1981-)，男，博士，助理研究員，主要從事生物制藥方面的研究，E-mail：Lance814@163.com。

裴昌松(1968-)，男，博士，主任醫(yī)師，主要從事中醫(yī)藥抗腫瘤方面的研究，E-mail：changsongpei@qq.com。

潘揚(yáng)(1964-)，男，博士，教授，主要從事生物制藥方面的研究，E-mail：y.pan2006@163.com。

江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程項(xiàng)目(PAPD)；江蘇高校品牌專業(yè)建設(shè)工程資助項(xiàng)目(PPZY2015A070)；南京中醫(yī)藥大學(xué)校企合作項(xiàng)目(2015001)。

TS255.1

B

1002-0306(2016)16-0302-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.16.051