雞腸道定殖乳酸桿菌分離鑒定及藥物敏感性分析

李一經(jīng)，韓樂濛，唐麗杰，馬孫婷，布哈里，姜艷平，崔　文（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱150030）

雞腸道定殖乳酸桿菌分離鑒定及藥物敏感性分析

李一經(jīng)，韓樂濛，唐麗杰，馬孫婷，布哈里，姜艷平，崔文
（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱150030）

為篩選分析雞腸道內(nèi)定殖乳酸桿菌及其對抗生素藥物敏感性，選取健康雞腸道內(nèi)容物，利用MRSCaCO3培養(yǎng)基平板，42℃厭氧培養(yǎng)，選擇革蘭氏陽性、不運動、無芽孢、桿狀細菌檢測過氧化氫酶、氧化酶和硝酸鹽還原活性，糖發(fā)酵反應(yīng)管作生化反應(yīng)表型鑒定，利用PCR擴增16S rRNA并測定序列。結(jié)果表明，獲得8株乳酸桿菌，其中包括3株Lactobacillus crispatus、2株Lactobacillus johnsonii、2株Lactobacillus salivarius和1株Lactobacillus saerimneri。8株乳酸桿菌在37和42℃均生長良好；抑菌試驗表明，對革蘭氏陽性及陰性細菌均有一定抑菌活性。體外粘附試驗表明，8株乳酸桿菌均具有一定粘附特性，可在腸道內(nèi)定殖?？股孛舾行栽囼灡砻?，8株乳酸桿菌對多種抗生素敏感。

雞腸道；乳酸桿菌；分離鑒定；抑菌活性；體外粘附能力；藥物敏感性

網(wǎng)絡(luò)出版時間2016-6-17 15:21:50[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20160617.1521.008.htm l

李一經(jīng),韓樂濛,唐麗杰,等.雞腸道定殖乳酸桿菌分離鑒定及藥物敏感性分析[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2016,47(6):51-59.

Li Yijing,Han Lemeng,Tang Lijie,et al.Separation and identification of colonized Lactobacillus from chickens intestine and analyzation antibiotics susceptibility[J].Journal of Northeast Agricultural University,2016,47(6):51-59.(in Chinese with English abstract)

乳酸菌（Lactic acid bacteria,LAB）能發(fā)酵糖類產(chǎn)生大量乳酸細菌，而非系統(tǒng)分類中嚴格意義上的科或?qū)賉1]，目前已發(fā)現(xiàn)乳酸菌在細菌分類學(xué)上至少包括以乳酸桿菌屬（Lactobacillus）、雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）、鏈球菌屬（Streptococcus）、明串珠球菌屬（Leuconostoc）、腸球菌屬（Enterococcus）、乳球菌屬（Lactococcus）等為代表的8個屬。絕大多數(shù)為厭氧或兼性厭氧化能異養(yǎng)菌，生長繁殖于厭氧或微耗氧、礦物質(zhì)和有機營養(yǎng)物豐富酸性環(huán)境中。乳酸桿菌在動物消化道中含量較高，約占正常菌群10%[2]，是人和動物正常菌群（Normal microbiota）組成部分。研究表明，乳酸桿菌是雞嗉囊、空腸、回腸、盲腸和直腸中優(yōu)勢菌群，通常作為飼料安全益生菌劑添加[3-4]。

乳桿菌屬、雙歧桿菌屬、芽孢桿菌屬和鏈球菌屬是目前生產(chǎn)活菌制劑常用菌種[5]。乳酸桿菌大量存在于動物腸道，維持腸道微生物群系“平衡”。乳酸桿菌制劑已被應(yīng)用于腸道微生態(tài)治療。乳酸桿菌可作為免疫接種活菌疫苗載體，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用潛力較大[6]。雞腸道黏膜上皮細胞表面及其周圍粘附大量乳酸桿菌，可在小腸黏膜表面形成屏障，阻礙其他細菌特別是有害菌與小腸黏膜上皮細胞接觸，減少有害菌通過腸道侵染雞體機會。因此選擇宿主自身且能定殖于腸道內(nèi)乳酸桿菌菌株作活菌疫苗載體具有較大優(yōu)勢[7-9]。本研究從健康雞腸道內(nèi)分離乳酸桿菌，開展形態(tài)、生化反應(yīng)及分子生物學(xué)鑒定，抑菌活性試驗，體外粘附試驗及藥物敏感性試驗分析，為雞腸道內(nèi)定殖乳酸桿菌生產(chǎn)應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1　材料方法

1.1材料

1.1.1菌種

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、李氏桿菌（Listeria）、巴氏桿菌（Pasteurella）、鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）、干酪乳桿菌L393（Lactobacillus casei393）由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)微生物與免疫學(xué)試驗室提供。

1.1.2試驗動物

試驗選取4只20日齡健康肉雞，購自哈爾濱市勝利養(yǎng)雞場。

1.1.3引物

根據(jù)已發(fā)表乳酸桿菌基因組16S rRNA基因序列合成引物27F（5'AGAGTTTGATCCTGGCTCAG 3'）及1495R（5'CTACGGCTACCTTGTTACGA 3'），引物由金維智有限公司合成。

1.2方法

1.2.1雞腸道乳酸菌分離及生化反應(yīng)特性鑒定

將健康雞處死，體表75%乙醇消毒處理，迅速解剖取十二指腸、空腸、回腸、盲腸，生理鹽水灌洗清除內(nèi)容物，用干凈載玻片刮取雞腸黏膜，約取0.5 g樣品，置于裝有4.5mL滅菌生理鹽水試管中，充分震蕩，混合均勻，稀釋度為10-1，吸取0.5mL至另一試管中，將樣品依次稀釋至10-8，再吸取各稀釋度樣品300μL，滴種到MRS-CaCO3培養(yǎng)基平板上，涂布棒將其涂布均勻，42℃厭氧培養(yǎng)24~48 h，選擇其中革蘭氏陽性、不運動、無芽孢、桿狀細菌做過氧化氫酶、氧化酶和硝酸鹽還原活性試驗，3者均為陰性初步判定為乳酸桿菌。將得到菌株純化，直到鏡下觀察，菌體形態(tài)大小均一、無雜菌為止。30%（V/V）甘油保存于-80℃。

1.2.2乳酸桿菌16SrRNA鑒定

分離菌株全部用糖發(fā)酵反應(yīng)管作基于生化反應(yīng)表型鑒定，鑒定結(jié)果與《伯杰氏系統(tǒng)細菌學(xué)手冊》對比后歸類。細菌基因組提取試劑盒提取菌株DNA，以乳酸桿菌屬16S rRNA通用引物27F、1495R擴增目的片段確認菌株歸類。DNA回收試劑盒純化回收。將純化回收PCR產(chǎn)物分別送至生工生物工程（上海）有限公司及金唯智生物科技有限公司序列測定。DNAMAN軟件分析測序結(jié)果，并通過Blast種屬鑒定。

1.2.3乳酸桿菌37和42℃下生長特性測定

分離菌株經(jīng)鑒定后，歸為8類，每一類選擇一株作代表測定生長曲線，生長曲線測定具體操作如下：

挑選生長健壯劃線復(fù)蘇菌落接種于5mL液體MRS培養(yǎng)基中，分別于37和42℃孵育過夜。取適量菌液用微量分光光度計測菌液濃度后以1%接種液體MRS，混勻，分裝到12支試管，10 mL每管。37℃靜置培養(yǎng)，以未接種MRS為對照置于相同溫度下。測定菌液初始OD600，記錄。每隔2 h取出1只試管測定OD600，以同溫度下未接種MRS作對照，連續(xù)測24 h，記錄數(shù)據(jù)。

1.2.4抑菌活性檢測

打孔法對篩選的8株乳桿菌作4種病原菌抑菌活性測試試驗。指示菌包括巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、李氏桿菌及鼠傷寒沙門氏菌。將分離菌株于MRS肉湯中培養(yǎng)，指示菌株于LB肉湯中培養(yǎng)，12~16 h；指示菌菌液用LB液體調(diào)整OD600至1.0；將調(diào)好OD600指示菌液涂布LB營養(yǎng)瓊脂平板，100μL·板-1；待干后，打孔器打孔（9mm·孔-1），4孔·板-1；每孔分別加入8株分離菌，置于42℃靜置向上培養(yǎng)，16~24 h后游標(biāo)卡尺（0.02mm精度）測量抑菌圈直徑，以肉眼未見菌落生長為邊界，記錄結(jié)果。

1.2.5乳酸桿菌體外粘附試驗

檢測分離到的8株乳酸桿菌及實驗室保存菌L393（Lactobacillus casei393）在Basement Membrane Matrigel（購自BD公司）上的粘附能力。依說明書準備BMM工作液，參照文獻[10]方法作粘附試驗。

BMM工作液配制：將BMM于4℃冰箱內(nèi)過夜融化。預(yù)冷基礎(chǔ)1640培養(yǎng)基以1?20比例稀釋，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

乳酸桿菌菌液制備：將8株乳酸菌分別接種MRS肉湯，42℃（L393為37℃）靜置，厭氧培養(yǎng)至OD600=1.0；菌體培養(yǎng)物4℃低溫下3 000 r·min-1離心10min，菌體無菌PBS洗兩次；無菌PBS調(diào)整菌體濃度為5×106cfu·mL-1備用。

粘附試驗步驟：將圓形爬片在無菌條件下放入24孔板內(nèi)，封閉24孔板，放入4℃冰箱中預(yù)冷2 h。預(yù)冷槍頭將BMM工作液包被于24孔板內(nèi)爬片上，每孔100μL。室溫放置1 h?；A(chǔ)1640培養(yǎng)基輕柔洗去爬片上未成膠BMM工作液。含2%牛血清白蛋白無菌PBS（2%BSA-PBS）包被各孔（每孔200μL），室溫放置2 h。將2%BSA-PBS吸凈，調(diào)整好濃度菌液加入孔中，每孔200μL，每株菌2個平行樣，室溫孵育2 h。吸去菌液，無菌PBS輕柔清洗1次后結(jié)晶紫染液染色粘附細菌。將爬片取出，100倍油鏡下觀察，每張爬片隨機選取5個視野計數(shù)。計算各株菌視野下菌數(shù)平均值。

1.2.6藥物敏感性試驗

微生物藥敏紙片（8大類24種，購自浙江天合微生物試劑有限公司）測試分離株耐藥譜，確定所選菌株藥物敏感性。取培養(yǎng)過夜菌液，測其OD600，并取菌液12 000 r·min-1離心5min，離心結(jié)束后棄上清，滅菌生理鹽水重懸菌體，12 000 r·min-1，離心3min后重復(fù)上述步驟1次。滅菌生理鹽水調(diào)節(jié)菌體OD600在0.08~0.1（相當(dāng)于108cfu·mL-1），取350μL調(diào)節(jié)好濃度菌液涂布MRS瓊脂平板。待干后（約需15min），貼放標(biāo)準藥敏紙片，4片每板，42℃倒置培養(yǎng)18~24 h后游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑。

2　結(jié)果與分析

2.1雞腸道乳酸菌分離及生化反應(yīng)特性鑒定

從雞腸道內(nèi)共分離到42株菌，經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，挑選其中14株革蘭氏陽性桿菌純化，經(jīng)純化5~10代后，獲得單一革蘭氏陽性桿菌。鏡檢結(jié)果見圖1。

圖1　革蘭氏染色鏡檢(100×)Fig.1 Gram staining(100×)

對所分離14株革蘭氏陽性桿菌作生化反應(yīng)測試，根據(jù)糖發(fā)酵反應(yīng)不同結(jié)果，篩選8株表型不同菌株（5-1-1,5-3-2,6-3，N-7，N-11，N-14，N-23及M-11），生化反應(yīng)結(jié)果符合乳酸桿菌特性（見表1）。

2.2乳酸桿菌16S rRNA鑒定

將8株菌作16S rRNA基因擴增和序列測定，以提取基因組為模板，27F和1495R為引物，擴增乳酸桿菌16S rRNA序列，0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測可見約1 500 bp目的片段，與預(yù)期結(jié)果符合（見圖2）。

表1　雞腸道分離菌生化反應(yīng)結(jié)果Table 1 Biochemical characteristics of Lactobacillus species isolated from the intestines of chicken

圖2　基因組16S rRNA PCR結(jié)果Fig.2 PCR amplification of 16S rRNA

將PCR產(chǎn)物純化測序。測序結(jié)果經(jīng)NCBIBlast比對，進一步確定8株菌分類，將序列上傳NCBI GenBank，獲取8株菌基因登錄號，結(jié)果見表2。

2.3乳酸桿菌37和42℃生長特性測定

37及42℃連續(xù)測定24 h內(nèi)生長曲線（見圖3、4）表明，所分離8株乳桿菌37和42℃均能生長。42℃下生長速度快于37℃。除5-1-1生長明顯緩慢外，其余各株乳酸菌均在0~4 h處于遲緩期，5 h后進入對數(shù)生長期，10 h后進入平穩(wěn)期。

由8株乳酸菌各自生長曲線（見圖5）可知，多株菌42℃下生長速度略高于37℃，而平臺期總菌數(shù)略低于37℃。

表2　雞腸道乳桿菌鑒定結(jié)果及基因登錄號Table2 Molecular identification results of Lactobacillus spp.isolated fromchicken intestine and GenBank accession No.

圖3　37℃生長曲線Fig.3 Grow th curve in 37℃

圖4　42℃生長曲線Fig.4 Grow th cu rve in 42℃

圖5　8株乳酸菌生長曲線Fig.5 Grow th curves of eight LAB isolates

2.4抑菌活性檢測

所篩選8株乳酸桿菌對4種致病菌抑菌試驗結(jié)果見表4。所有菌株均對金黃色葡萄球菌、李斯特菌、巴氏桿菌及鼠傷寒沙門氏菌表現(xiàn)一定抑制活性。

2.5乳桿菌體外粘附試驗

所篩選8株乳酸桿菌與L393在BMM上粘附試驗結(jié)果見圖6。3株卷曲乳桿菌（Lactobacillus crispa?tus）5-3-2、5-1-1和N-11表現(xiàn)較強粘附能力，M-11（Lactobacillus saerimneri）與L393（Lactobacillus ca?sei393）粘附能力近似。而6-3和N-23（Lactobacil?lus johnsonii）及N-14和N-17（Lactobacillus salivari?us）粘附能力較弱。

表4　抑菌試驗結(jié)果Table4 Antibiotic activity of the isolates against pathogenic bacteria

圖6　乳酸桿菌BMM粘附試驗結(jié)果Fig.6 Adhesion of LAB to basement membrane Matrigel

2.6藥物敏感性試驗

通過8大類24種抗生素微生物藥敏紙片（6mm）測試所篩選8株乳桿菌對藥物的敏感性。當(dāng)乳桿菌抑菌圈直徑大于相應(yīng)抗生素臨界點時，認為此菌對該種抗生素敏感。試驗結(jié)果見表5。

由表5可知，6-3與N-23（Lactobacillus johnso?nii）及N-7與N-14（Lactobacillus salivarius）4株菌能耐受大部分抗生素（≥13種）。M-11（Lactobacillus saerimneri）及5-3-2、5-1-1、N-11（Lactobacillus crispatus）4株菌則對較少種類抗生素（≤10種）表現(xiàn)耐受性。

所有8個菌株均對慶大霉素（Gentamicin）、氨芐青霉素（Ampicillin）、卡那霉素（Kanamycin）和四環(huán)素（Tetracycline）不敏感。

表5　藥敏試驗結(jié)果Tab le 5 Antibiotic sensitivity of the isolates

3　討論與結(jié)論

近年來，益生菌作為微生物添加劑和疫苗載體倍受關(guān)注，但益生菌株來源不同應(yīng)用效果不一致。益生菌株多由體外環(huán)境如發(fā)酵工業(yè)篩選得到，體內(nèi)外環(huán)境差異顯著，來自體外環(huán)境外源菌難以耐受體內(nèi)膽汁、胃中低pH作用，無法腸壁定殖。Fuller指出用作益生素的菌株具有生長速度快，易吸附于上皮細胞特性，對胃腸道內(nèi)抑制因素具有抵抗力，能產(chǎn)生抗菌物質(zhì)等特點[11]。本試驗直接從雞腸道黏膜分離乳酸菌，篩選及優(yōu)化乳酸菌株。

試驗利用經(jīng)改良MRS培養(yǎng)基，在原有培養(yǎng)基基礎(chǔ)上加入20%碳酸鈣，根據(jù)厭氧培養(yǎng)環(huán)境下菌株產(chǎn)酸分解碳酸鈣特性，篩選產(chǎn)酸性能較好乳酸菌。通過表型特征鑒定，篩選乳酸桿菌，根據(jù)糖發(fā)酵反應(yīng)分離到的菌株中篩選出8株。由于乳酸桿菌屬內(nèi)，部分種間糖發(fā)酵反應(yīng)差異小，需進一步鑒定[12]?；?6SrRNA序列分析表明8株菌中3株為Lactobacillus crispatus、2株為Lactobacillus johnso?nii、2株為Lactobacillus salivarius、1株為Lactoba?cillus saerimneri。任大勇、鮑延娥等研究表明，卷曲乳桿菌（Lactobacillus crispatus）、約氏乳桿菌（Lactobacillus johnsonii）和唾液乳桿菌（Lactobacillus salivarius）均有較高腸道粘附能力，是動物消化道內(nèi)常在菌，已應(yīng)用于飼糧添加以改善產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)，調(diào)節(jié)機體免疫功能[13-14]。體外粘附試驗結(jié)果表明，這8株菌均有一定粘附能力，3株卷曲乳桿菌體外粘附能力顯著高于其他菌株，與Sun等研究結(jié)果一致[15]。粘附能力強有助于細菌在腸道內(nèi)更好定殖，作為生物工程菌時，可減少免疫次數(shù)和免疫量，提高免疫效率。Rodwell研究表明，Lactobacillus saerimneri由哺乳動物消化道內(nèi)分離所得[16]，且Taweechotipatr等也證明，Lactobacil?lus saerimneri在人體內(nèi)具有抗炎癥特性并可作為候選益生菌[17]。

乳酸菌可作為抗生素替代品防治疾病。本試驗篩選8株乳酸桿菌均對慶大霉素（Gentamicin）、氨芐青霉素（Ampicillin）、卡那霉素（Kanamycin）和四環(huán)素（Tetracycline）不敏感。研究表明，多株植物乳桿菌均對慶大霉素（Gentamicin）、氨芐青霉素（Ampicillin）和卡那霉素（Kanamycin）不敏感[18]，這可能是多數(shù)乳酸菌共同特征。此外，兩株約氏乳桿菌與兩株唾液乳桿菌均對多種抗生素具有耐藥性。乳酸桿菌耐藥性機制有待深入研究。

8株分離菌株具有抑菌活性，不僅能抑制革蘭氏陽性菌（金黃色葡萄球菌、李斯特菌），對革蘭氏陰性菌（巴氏桿菌、鼠傷寒沙門菌）也有較好抑制作用。分離菌株抑菌活性有利于維持腸道正常菌群平衡，是益生菌預(yù)期重要特性之一[18]。

8株菌37和42℃均生長良好，表明其在實驗室一般培養(yǎng)條件下及雞體內(nèi)（雞正常體溫為40~ 42℃）均可生長。

綜上，本試驗分離8株乳酸桿菌均有作為雞飼料益生菌制劑和活載體疫苗宿主菌株應(yīng)用潛力。

[1]Klein G,Pack A,Bonaparte C.et al.Taxonomy and physiology of probiotic lactic acid bacteria[J].International Journal of Food Mi?crobiology,1998,41(2):103-125.

[2]Kontula P,SuihkoM L,SuorttiT.et al.The isolation of lactic acid bacteria from human colonic biopsies after enrichment on lactose derivatives and rye arabinoxylo-oligosaccharides[J],Food Micro?biology,2000,17(1):13-22.

[3]Kathrin,M,B.Claudia,K.Hans Christian.et al.Lactobacilli-bac?teria-host interactions with special regard to the urogenital tract [J].International Journal of Medical Microbiology,2005,295(1): 9-18.

[4]張子儀.中國飼料學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2000.

[5]黃承鳳.飼用益生素[J].中國飼料,1998(2):24-25.

[6]Seegers J F M L.Lactobacilli as live vaccine delivery vectors: Progress and prospects[J].Trends in Biotechnology,2003,20(12): 508-515.

[7]Ring?E,Lisbeth L?vmo,Kristiansen M,et al.Lactic acid bacteria vs.pathogens in the gastrointestinal tract of fish:A review[J]. Aquaculture Research,2010,41(4):451-467.

[8]Merrifield D L.Possible influence of probiotic adhesion to intesti?nal mucosa on the activity and morphology of rainbow trout(On?corhynchus mykiss)enterocytes[J].Aquaculture Research,2010, 41(8):1268-1272.

[9]Olaya R,Lionel F,Maxerue F.et al.A new zebrafish model of orointestinal pathogen colonization reveals a key role for adhesion in protection by probiotic bacteria[J].Plos Pathogens,2012,8(7): 1029-1033.

[10]Bouzaine T,Dauphin RD,Thonart P.et al.Adherence and coloni?zation properties of Lactobacillus rhamnosus TB1,a broiler chicken isolate[J].Letters in Applied Microbiology,2005,40(5):391-396. [11]Fuller R.Probiotics in man and animals[J].Journal of Applied Bacteriology,1989,66(5):365-378.

[12]Rahkila R,T Nieminen,P Johansson.et al.Characterization and evaluation of the spoilage potential of Lactococcus piscium isolates from modified atmosphere packaged meat[J].International Journal of Food Microbiology,2012,156(1):50-59.

[13]任大勇,李昌,秦艷青.等.乳酸菌益生功能及作用機制研究進展[J].中國獸藥雜志,2011,45(2):47-50.

[14]鮑延娥,汪攀,董艷青.等.約氏乳桿菌對產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和免疫機能的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2013,25(3):595-602.

[15]Sun Z,L Huang,J kong.et al.In vitro evaluation of Lactobacillus crispatus K313 and K243:High-adhesion activity and anti-in?flammatory effect on Salmonella braenderup infected intestinal ep?ithelial cell[J].Veterinary Microbiology,2012,159(S1-2):212-220.

[16]Rodwell,AW.The occurrence and distribution of amino-acid de?carboxylases within the genus Lactobacillus[J].Journal of General Microbiology,1953,8(2):224-32.

[17]Taweechotipatr M,Chandra I,Spinler J K,et al.Lactobacillus saerimneri and Lactobacillus ruminis:Novel human-derived probi?otic strains with immunomodulatory activities[J].FEMS Microbiol Lett,2009,293(1):65-72.

[18]劉敏,張英,張琳琳,等.虹鱒腸道植物乳桿菌的分離及特性研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2014,45(12):24-30.

Separation and identification of colonized Lactobacillus from chickens intestine and analyzation antibiotics susceptibility/LI Yijing,HAN Lemeng,TANG

Lijie,MA Sunting,Bukarhari M,JIANG Yanping,CUI Wen(School of Veterinary Medicines,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China)

In order to select colonized Lactobacillus from chickens intestine and analyzation antibiotics susceptibility,Lactobacillus were isolated from the intestine of healthy chickens.After using MRS-CaCO3plates,anaerobic culturing in 42℃,bacterias those are Gram-positive,still,no spores and rod-like were tested by oxidase,catalase reaction,and biochemical reactions.Eight strains with different phenotype were carried 16S rRNA sequence analysis by using PCR,and the results showed that three of the eight strains were Lactobacillus crispatus,two strains were Lactobacillus johnsonii,two strains were Lactobacillus salivarius and one strain were Lactobacillus saerimneri.Eight strains were able to grow well in both 37 and 42℃.And all the strains exhibited sensitivity to various antibiotics,inhibited the growth of both Grampositive and Gram-negative bacteria.And the in vitro adherence test showed that all the isolates had the ability to adhere the guts.Antibiotics susceptibility test showed that eight strains were sensitive to many antibitics.

chicken intestine;Lactobacillus;separation and identification;antimicrobial activity;in vitro adherence ability;antibiotic susceptibility

S831

A

1005-9369（2016）06-0051-09

2016-04-05

“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國家科技計劃項目（2015BAD12B01-4）

李一經(jīng)（1960-），男，教授，博士，博士生導(dǎo)師，研究方向為獸醫(yī)微生物與免疫學(xué)。E-mail:yijingli@163.com