保健食品中維生素E類成分的檢測與質(zhì)量評(píng)價(jià)

廣西桂林食品藥品檢驗(yàn)所（541012）蔣彥飛 張治軍 鐘名誠

維生素E為脂溶性酚類有機(jī)化合物，有較強(qiáng)的抗氧化作用，能清除出自由基，抵御人體過氧化產(chǎn)物自由基損害，保持組織完整性，提高機(jī)體免疫力、延緩衰老，另外，維生素E通過調(diào)整人體機(jī)能，對(duì)人類腫瘤細(xì)胞的生長和增殖有抑制作用[1][2][3]，所以，常用于老年?duì)I養(yǎng)保健食品的添加劑。保健食品中維生素E原料來源，有天然型維生素E和合成型維生素E兩種，均為α-生育酚苯環(huán)上酚羥基經(jīng)乙?；傻拇姿狨?，其中天然型維生素E為d-α-生育酚醋酸酯，合成型維生素E為dl-α-生育酚醋酸酯，其分子式均為C31H52O3。游離的α-生育酚分子式為C29H50O2，在其苯環(huán)上被取代官能團(tuán)數(shù)目位置不同，又分為β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚三個(gè)同系物，其中β-生育酚、γ-生育酚分子式均為C28H48O2，δ-生育酚結(jié)構(gòu)為C27H46O2。同系物的結(jié)構(gòu)雖然相似，但其所具有的生物活性并不完全相同，其中α-生育酚的生物活性與抗氧化能力最強(qiáng)[4]。市場上的含維生素E保健食品種類繁多，產(chǎn)品標(biāo)簽中配方原料來源，有天然維生素E，也有合成維生素E，并且價(jià)格差距較大。為科學(xué)分析評(píng)價(jià)保健食品中的維生素E，本文研究報(bào)道GC法同時(shí)測定維生素E、α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚含量。

1 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑與試藥

1.1 儀器 Agilent 7890A氣相色譜儀，具火焰離子化檢測器（美國）；數(shù)顯型漩渦混合器（Talboys，美國）；數(shù)顯恒溫水浴振蕩器（金壇市城西春蘭實(shí)驗(yàn)儀器廠）。

1.2 試劑與試藥 維生素E（按C31H52O3計(jì)，含量為98.6%，中國食品藥品檢定研究院），α-生育酚(含量＞99.9%，Supelco公司，美國），γ-生育酚(含量＞98.5%，Supelco公司，美國），δ-生育酚(含量＞93.7%，Supelco公司，美國），正三十二烷（含量＞96.0%，梯希愛上海發(fā)展有限公司）；含維生素E保健食品產(chǎn)地分別為廣東、山東、浙江、北京、廣西等省、市、自治區(qū)的市售品；正己烷為色譜純；鹽酸為優(yōu)級(jí)純；無水乙醇為分析純；水為娃哈哈飲用純凈水。

2 方法、結(jié)果與分析

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) DB-1彈性石英毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×1μm）；進(jìn)樣口溫度290℃；柱溫280℃；FID檢測器，檢測器溫度290℃；分流進(jìn)樣，分流比30∶1，進(jìn)樣量1μL；載氣為高純氮?dú)猓髁?.0mL·min-1；正三十二烷內(nèi)標(biāo)物與維生素E分離度R，R應(yīng)不小于1.5。

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液制備 精密稱取正三十二烷1000.18mg，置1000mL量瓶中，加正己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 試樣溶液的制備 取膠囊劑的內(nèi)容物，混合均勻，片劑則研細(xì)混勻，根據(jù)樣品維生素E含量稱取試樣0.5～4g(精確到0.1mg)于50mL棕色容量瓶中，加入15mL50℃的0.5mol·L-1鹽酸溶液，充氮排除空氣，蓋上瓶塞，在漩渦混合器上漩渦1min，置于50℃振蕩器中振蕩10min后，冷至室溫，加入15mL無水乙醇，漩渦混勻1min，精密加入10mL內(nèi)標(biāo)溶液，再漩渦混勻2min，強(qiáng)力振蕩30s后，靜置，上清液用微孔濾膜濾過，收集濾液備用。

2.4 對(duì)照溶液的制備 分別精密稱取對(duì)照品維生素E40.51mg、α-生育酚40.70mg、γ-生育酚30.30mg、δ-生育酚40.28mg，置同一10mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照儲(chǔ)備液。

2.5 線性范圍考察 取混合對(duì)照儲(chǔ)備液逐級(jí)分別用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋2、2、2、5、2、5倍，依次制成混合對(duì)照系列1、2、3、4、5、6、7溶液，進(jìn)樣前用0.45μm濾膜過濾，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別測定峰面積，以對(duì)照品的峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)Y，對(duì)照品的濃度為縱坐標(biāo)X，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程見附表1。

維生素E混合對(duì)照溶液及某魚油樣品圖見附圖。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一混標(biāo)對(duì)照溶液（系列5），連續(xù)測定6次，分別計(jì)算對(duì)照品的峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值，維生素E、α-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的精密度（n=6）RSD值分別為0.8%、0.7%、0.5%、 0.3%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 對(duì)同一樣品（某魚油2號(hào)樣品，不含維生素E）平行稱取7份，各約2g，精密稱定，按2.3項(xiàng)下方法同法制備，并按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，從各標(biāo)準(zhǔn)曲線讀法對(duì)應(yīng)成分濃度，分別計(jì)算試樣中各組分含量，α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚含量的RSD值分別為1.7%、1.7%、2.0%（n=7），結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一試樣溶液（某魚油2號(hào)樣品，不含維生素E），按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別在0，8，16，24，30，35h測定，分別計(jì)算對(duì)照品的峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值，α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚與各對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)物比值的RSD值分別為0.6%、0.6%、0.5%。結(jié)果表明，供試品溶液配制在35h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 方法檢出限 精密稱取陰性樣品4.0128g，精密加入2.5項(xiàng)下混合對(duì)照系列1溶液（維生素E濃度：0.009895mg/mL，α-生育酚濃度：0.01016mg/mL，γ-生育酚濃度：0.007461mg/mLδ-生育酚濃度：0.009436mg/mL）4mL，于45℃水浴中通氮?dú)饩従彺当M正己烷，按2.3項(xiàng)下方法同法制備并進(jìn)行測定，以待測物響應(yīng)值為3倍左右計(jì)，試樣最低檢出濃度為：維生素E9.9mg/kg，α-生育酚10.1mg/kg，γ-生育酚7.4mg/kg，γ-生育酚9.4mg/kg。

2.10 回收率試驗(yàn) 取已知各組分含量的某魚油樣品6份，各約1g，精密稱定，精密加入混和對(duì)照液（維生素E：1.9618mg/mL，α-生育酚濃度：2.0030mg/mL，γ-生育酚濃度：1.5809mg/mL，δ-生育酚：1.5245mg/mL）1mL，按2.9項(xiàng)下方法同法制備，并按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算回收率，維生素E、α-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的平均回收率為98.2%、99.1%、100.3%、96.7%，RSD分別為1.5%、2.0%、1.7%、2.2%。

附表1 四種成分線性關(guān)系分析結(jié)果表

附表2 25批含維生素E樣品調(diào)查檢測結(jié)果

附表3 25批保健食品維生素E狀況結(jié)果表

附表4 25批保健食品維生素E結(jié)果分析表

附圖 維生素E與生育酚混合對(duì)照溶液及某魚油樣品色譜圖（A：混合對(duì)照；B：某魚油樣品）

2.11 樣品測定 對(duì)不同來源不同批次含維生素E的樣品，按2.4項(xiàng)下方法測定含量，結(jié)果見附表2。

3 結(jié)果與討論

3.1 關(guān)于維生素E的定義問題 維生素E作為維生素類藥品，自《中國藥典》1977年版起，歷版均有收載，分子式均為C31H52O3，在2000年版前為dl-α-生育酚醋酸酯， 2005年版后分為天然型（d-α-生育酚醋酸酯）或合成型維生素E（dl-α-生育酚醋酸酯）。GB 19191-2003《食品添加劑 天然維生素E》中維生素E分為d-α-生育酚、混合生育酚（d-α-、d-β-、d-γ-和d-δ-生育酚）、d-α-醋酸生育酚、d-α-琥珀酸生育酚，GB 14756-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 維生素E（dlα-醋酸生育酚）》中維生素E為dl-α-醋酸生育酚，GB 29942-2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 維生素E(dl-α-生育酚)》中維生素E為dl-α-生育酚，GB/T 5009.82-2003《食品中維生素A與維生素E的測定》中維生素E為d-α-、d-γ-和d-δ-生育酚，GB 54139-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素A、D、E 的測定》中維生素E為α-生育酚。由此可知，維生素E在不同行業(yè)、不同標(biāo)準(zhǔn)，其定義也不同，保健食品配方中維生素E為功效成分之一，筆者建議維生素E定義應(yīng)以《中國藥典》規(guī)定為準(zhǔn)。

3.2 保健食品中維生素E類成分的狀況分析共檢測保健食品25批，有2批未檢出維生素E類成分，另23批依據(jù)檢出成分類型進(jìn)行歸納分類統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見附表3。

附表3統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，25批樣品中，17批樣品有標(biāo)示量值，比例為68%，8批檢出維生素E，比例為32%，5批檢出維生素E與α-生育酚，比例為20%，10批檢出生育酚類，比例為40%；此外，標(biāo)識(shí)成分為天然維生素E的15批樣品中，僅有4批為維生素E，約占27%，多數(shù)樣品檢出成分為生育酚類成分。說明目前含維生素E保健食品標(biāo)示維生素E成分與實(shí)際投料較為混亂，特別是標(biāo)示為天然維生素E的保健食品，在生產(chǎn)過程中有以生育酚為原料或人為摻假現(xiàn)象，不符合國家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則及衛(wèi)生部保健食品標(biāo)識(shí)規(guī)定的要求[5][6]。

3.3 保健食品中維生素E含量結(jié)果分析 依據(jù)測定數(shù)值折算為每粒（丸或片）含量，以每日最大服用量進(jìn)行歸納分類統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見附表4。

從附表4可知，除2批檢測結(jié)果為零外，23批樣品13批檢出維生素E，檢出率為52%，余下樣品檢出成分均為生育酚。參考《中國藥典》2015年版二部[7]，維生素E膠囊劑有5mg、10mg、50mg、100mg共4種規(guī)格，如以維生素E每次最小服用量5mg為限度，低于此限度的有2批，比例為9%，如以維生素E每次最大服用量100mg為高限，高于高限的有2批，比例為9%，說明多數(shù)樣品維生素E含量已達(dá)到治療劑量水平。如按食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[8]，維生素E最大使用量為0.2mg/g，除2批未檢出外，均超出標(biāo)準(zhǔn)。

3.4 測定方法的選擇 維生素E結(jié)構(gòu)復(fù)雜，同系物多，準(zhǔn)確分析測定比較困難[8]。近年來國內(nèi)外致力于分析測定研究，開發(fā)的多種有效的分析方法，主要有：氣相色譜法[9]、高效液相色譜法[10]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[11]等，這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。針對(duì)目前維生素E的研究現(xiàn)狀和國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室儀器使用情況，本研究采用了氣相色譜分析法，因其前處理簡單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，成本較低，并在較短的分析周期內(nèi)，完成維生素E、α-、γ-和δ-生育酚的分析。同時(shí)，在色譜柱選擇方面，對(duì)比HP-5，DB-5，DB-1三種色譜柱，DB-1柱能有效分離這幾種成分，故本法采用DB-1毛細(xì)管柱為分離柱，可滿足保健食品中維生素E及各種生育酚同系物的定量分析要求。

3.5 結(jié)論 保健食品作為特定人群食用的食品，除安全無毒外，尚含一定量功效成分，以調(diào)節(jié)機(jī)體功能。從本文測定25批含維生素E保健食品結(jié)果看，反映出目前保健食品市場混亂，質(zhì)量參差不齊，有的功效成分含量過低，達(dá)不到調(diào)節(jié)機(jī)體功能，有的過高則對(duì)人體有害，更有摻雜使假。提示相關(guān)監(jiān)管部門應(yīng)加強(qiáng)市場上保健品的衛(wèi)生監(jiān)管力度，除應(yīng)針對(duì)衛(wèi)生指標(biāo)中有毒有害成分的檢測外，還應(yīng)對(duì)其營養(yǎng)成分加強(qiáng)監(jiān)測，以保護(hù)消費(fèi)者利益。