不同色譜柱測(cè)定阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)的差異性研究

馮四平

（延安市人民醫(yī)院，延安 723000）

不同色譜柱測(cè)定阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)的差異性研究

馮四平

（延安市人民醫(yī)院，延安 723000）

目的：研究不同色譜柱測(cè)定阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)的差異性。方法：柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)、流速分別為30℃、254nm、1.0ml/min，流動(dòng)相A、B分別為0.05 mol / L 磷酸鹽緩沖液-乙腈（99：1）、0.05 mol / L 磷酸鹽緩沖液-乙腈（80：20）。結(jié)果：在4個(gè)廠家樣品中，色譜柱3均具有最大的雜質(zhì)檢出量，而在A、C、D3個(gè)廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的最大雜質(zhì)檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的最大雜質(zhì)檢出量，色譜柱1、4則具有相似的最大雜質(zhì)檢出量；總雜質(zhì)的檢出情況基本類(lèi)似于最大雜質(zhì)的檢出情況。在4個(gè)廠家樣品中，色譜柱3具有最大的總雜質(zhì)檢出量和最多的檢出雜質(zhì)峰，色譜柱2具有最小的總雜質(zhì)檢出量。在A廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質(zhì)檢出量，在C、D廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質(zhì)檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的總雜質(zhì)檢出量，色譜柱1、4具有相似的總雜質(zhì)檢出量。結(jié)論：不同色譜柱測(cè)定阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)具有較大的差異，從總體上來(lái)看，色譜柱3最好。

不同色譜柱；阿莫西林膠囊；有關(guān)物質(zhì)；差異性

阿莫西林屬于青霉素類(lèi)抗生素，對(duì)多種細(xì)菌的抗菌作用良好，如鏈球菌屬、沙門(mén)菌屬等，因此其被臨床當(dāng)做基本藥物得到了日益廣泛的應(yīng)用［1］。藥品不良反應(yīng)一方面會(huì)在人的個(gè)體差異的影響下發(fā)生，另一方面也會(huì)在生產(chǎn)、應(yīng)用阿莫西林制劑等過(guò)程中將雜質(zhì)引入的情況下發(fā)生［2］。長(zhǎng)期檢驗(yàn)工作表明［3］，在阿莫西林制劑有關(guān)物質(zhì)含量的檢測(cè)中，色譜柱廠家及型號(hào)不同，那么所得結(jié)果就有差異。本研究通過(guò)各種色譜柱對(duì)阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了考察，將能將有關(guān)物質(zhì)最大量地檢出來(lái)的色譜柱篩選了出來(lái)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

所用儀器包括紫外檢測(cè)器和Agilent 1260型高效液相色譜儀，所用試藥為中國(guó)食品藥品檢定研究院生產(chǎn)的阿莫西林對(duì)照品（含量：86.9%，批號(hào)：130409-200810），分別用A、B、C、D為4個(gè)廠家生產(chǎn)的阿莫西林膠囊編號(hào)，將色譜純?cè)O(shè)定為乙腈，將分析純?cè)O(shè)定為其余試劑。

2 結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱1：Agilent Zorbax SB-C18 柱，色譜柱2：Waters Sun Fire 柱，色譜柱3：Thermo ODS Hypersil柱，色譜柱4：Phenomenex Luna 5 μ C18 柱，規(guī)格分別為250 mm×4.6 mm，5 μm，150 mm×4.6 mm，5 μm，250 mm×4.6 mm，5 μm，250 mm×4.6 mm，5 μm，柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)、流速分別為30℃、254 nm、1.0 mL/min，流動(dòng)相A、B分別為0.05 mol / L 磷酸鹽緩沖液-乙腈（99：1）、0.05 mol / L 磷酸鹽緩沖液-乙腈（80：20），其中0.05 mol / L 磷酸鹽緩沖液的制備方法為用2mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液的pH值為5.0。完成洗脫阿莫西林峰后進(jìn)行梯度洗脫，方法具體見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相線性梯度洗脫表

2.2 溶液制備 對(duì)照品溶液的制備：取阿莫西林對(duì)照品10 mg左右，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相A稀釋至刻度，精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相A稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備：取供試品內(nèi)容物，精密稱定，臨用前加流動(dòng)相A溶解并定量稀釋制成每1 mL中含2.0 mg的溶液，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 A樣品有關(guān)物質(zhì)檢測(cè) 有效檢測(cè)樣品A，檢測(cè)過(guò)程中嚴(yán)格依據(jù)擬定色譜條件，結(jié)果具體見(jiàn)圖1。

圖1 不同色譜柱測(cè)定樣品A高效液相色譜圖

2.4 最大雜質(zhì)檢測(cè) 取對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行進(jìn)樣試驗(yàn)，試驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格依據(jù)色譜法，定量的依據(jù)是在一定濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積（或峰高）成正比。一般單個(gè)雜質(zhì)超過(guò)0.02%就需要做雜定鑒定［4］。結(jié)果顯示，在4個(gè)廠家樣品中，色譜柱3均具有最大的雜質(zhì)檢出量，而在A、C、D3個(gè)廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的最大雜質(zhì)檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的最大雜質(zhì)檢出量，色譜柱1、4則具有相似的最大雜質(zhì)檢出量。具體見(jiàn)表2。

2.5 總雜質(zhì)檢測(cè) 取對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行進(jìn)樣試驗(yàn)，試驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格依據(jù)相關(guān)方法［5］。結(jié)果顯示，總雜質(zhì)的檢出情況基本類(lèi)似于最大雜質(zhì)的檢出情況。在4個(gè)廠家樣品中，色譜柱3具有最大的總雜質(zhì)檢出量和最多的檢出雜質(zhì)峰，色譜柱2具有最小的總雜質(zhì)檢出量。在A廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質(zhì)檢出量，在C、D廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質(zhì)檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的總雜質(zhì)檢出量，色譜柱1、4具有相似的總雜質(zhì)檢出量。具體見(jiàn)表3。

3 討論

阿莫西林屬于青霉素類(lèi)抗生素，具有廣譜性和半合成性，將一個(gè)對(duì)位羥基引入了氨芐西林分子的苯環(huán)上，使其在胃酸中具有更高的穩(wěn)定性，口服吸收具有更高的安全性［6］。在以往的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，沒(méi)有對(duì)阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量提出特殊要求，但是隨著我國(guó)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不斷提升，對(duì)抗生素有關(guān)物質(zhì)提出了越來(lái)越高的要求［7］。2005年版的《中國(guó)藥典》將阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)檢查添加在了其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中［8］。有關(guān)物質(zhì)檢查包括兩種類(lèi)型，一種為檢查指定物質(zhì)，另一種為檢查未指定物質(zhì)，2-羥基-3-（4-羥基）本吡嗪、4-羥基苯甘氨酸、（2S，6R）-阿莫西林酸等均是阿莫西林的主要有關(guān)物質(zhì)，而檢查未指定物質(zhì)是檢查阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)的主要方面［9］。

表2 最大雜質(zhì)檢測(cè)結(jié)果

表3 總雜質(zhì)檢出結(jié)果

現(xiàn)階段，在藥品質(zhì)量控制過(guò)程中，各國(guó)藥典廣泛采用的一個(gè)重要手段就是反相高效液相色譜法，其基礎(chǔ)為硅烷鍵合硅膠色譜柱［10］?！吨袊?guó)藥典》較為詳盡地描述了高效液相色譜法的溶液配置及流動(dòng)相，但是通常情況下只指明了色譜柱的填料大類(lèi)［11］。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，很多雜質(zhì)峰會(huì)在具有較長(zhǎng)的洗脫時(shí)間的情況下發(fā)生，其誘發(fā)因素包括樣品本身雜質(zhì)、溶劑等，因此在進(jìn)樣試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)該選擇空白進(jìn)樣，只有這樣才能將溶劑引發(fā)的雜質(zhì)峰的影響有效消除掉。同時(shí)，還會(huì)有很多負(fù)峰發(fā)生在實(shí)驗(yàn)圖譜中，因此，在計(jì)算結(jié)果的過(guò)程中應(yīng)該有效扣除這些負(fù)峰峰面積［12］。本研究結(jié)果表明，在4個(gè)廠家樣品中，色譜柱3均具有最大的雜質(zhì)檢出量，而在A、C、D3個(gè)廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的最大雜質(zhì)檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的最大雜質(zhì)檢出量，色譜柱1、4則具有相似的最大雜質(zhì)檢出量；總雜質(zhì)的檢出情況基本類(lèi)似于最大雜質(zhì)的檢出情況。在4個(gè)廠家樣品中，色譜柱3具有最大的總雜質(zhì)檢出量和最多的檢出雜質(zhì)峰，色譜柱2具有最小的總雜質(zhì)檢出量。在A廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質(zhì)檢出量，在C、D廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質(zhì)檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的總雜質(zhì)檢出量，色譜柱1、4具有相似的總雜質(zhì)檢出量，充分說(shuō)明了不同色譜柱測(cè)定阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)具有較大的差異，阿莫西林有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制受到色譜柱的直接而深刻的影響。針對(duì)這一情況，在對(duì)阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中應(yīng)該給予色譜柱的選擇以充分重視。

總之，不同色譜柱測(cè)定阿莫西林膠囊有關(guān)物質(zhì)具有較大的差異，從總體上來(lái)看，色譜柱3最好，值得充分重視。

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Differences study of Amoxicillin related substances between different columns

Feng Si-ping
（Yanan People’s Hospital Yanan 723000， China）

Objective To study the differences of Amoxicillin related substances between different columns. Methods Column， detection wavelength， the flow rate were 30 ℃， 254nm， 1.0 mL / min， mobile phase A， B were 0.05 mol / L phosphate buffer -acetonitrile （99：1）， 0.05 mol / L phosphate buffer solution - acetonitrile （80：20）， respectively. Results In 4 samples factories， columns 3 had maximum detectable amount of impurities， and in A， C， D3 factories samples， column 1，2，4 impurities had similar maximum detectable amount， in B Manufacturers sample， column 2 had smaller maximum detectable amount of magazines， columns 1，4 had similar maximum impurity detection limit； total impurities in detection of maximum impurity detection substantially similar situation. In 4 factories samples， column 3 had the largest and most detectable amount of total impurities of impurity peaks were detected， column 2 had the smallest detectable amount of total impurities. A factory in the sample， columns1，2，4 had similar total impurity detectable amount， in C， D manufacturers sample， columns 1，2，4 had similar amount of total impurities detected in the sample B factory in column 2 had smaller amount of total impurities detected， columns 1，4 had similar amount of total impurities detected. Conclusion Different columns have greater difference in the detection of amoxicillin related substances， on the whole， the best is column 3.

Different columns； Amoxicillin； Related substances； Differences

R927.2

A

1673-016X（2016）01-0136-03

2015-06-10

馮四平，E-mail:yxylw002@163.com