月腺大戟中二萜類化學(xué)成分的大氣壓化學(xué)電離-串聯(lián)質(zhì)譜研究

王曦?zé)睿?李 丹， 包永靜， 許 良

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，內(nèi)蒙古通遼 028042 )

月腺大戟為大戟科(Euphorbiaceae)植物月腺大戟(EuphorbiaehracteolataHayata)的根，是蒙藥塔日努的原植物之一，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有散結(jié)殺蟲的功效，民間常用于治療結(jié)核和癌癥[1]。月腺大戟具有的抗癌活性主要與二萜類成分，特別是松香烷型二萜內(nèi)酯，如巖大戟內(nèi)酯B、月腺大戟甲素有關(guān)[2]，而月腺大戟具有的抗結(jié)核活性主要與苯乙酮類成分如狼毒乙素有關(guān)[3]。月腺大戟的提取物能夠顯示多種生物活性[4 - 6]。雖然月腺大戟有效成分的高效液相色譜研究已經(jīng)取得了重要進(jìn)展[7 - 10]，但由于目前商品化的對照品種類稀缺，這就給此類藥材的質(zhì)量控制帶來相當(dāng)大的難度。

近年來，天然藥物活性成分的質(zhì)譜研究取得了重大進(jìn)展[11,12]。本實驗利用大氣壓化學(xué)電離多級串聯(lián)質(zhì)譜(APCI/MSn)方法分析鑒定了月腺大戟乙醇提取液中的5種松香烷型二萜類和2種苯乙酮類成分，并推斷出各成分的質(zhì)譜裂解機(jī)理，從而建立了從蒙藥提取液這一復(fù)雜體系中分離及結(jié)構(gòu)鑒定的高靈敏度、具有專屬性的簡單快速的分析方法，為今后蒙藥活性成分的深入研究打下實驗和理論基礎(chǔ)。

1 實驗部分

1.1 試劑與材料

狼毒乙素、巖大戟內(nèi)酯B對照品購于成都曼斯特生物科技有限公司。乙腈為色譜純(美國Fisher公司)，乙醇為分析純(北京化工廠)，水為超純水(18.2 MΩ·cm)。

月腺大戟藥材購于安徽毫州。

1.2 對照品、樣品溶液的制備

分別精確稱取狼毒乙素、巖大戟內(nèi)酯B對照品2 mg分別定容至2 mL容量瓶中，各得1 mg/mL對照品溶液，備用。

取月腺大戟藥材粉末(過110目篩)10 g，置于圓底燒瓶中，加90%乙醇100 mL浸泡24 h后，回流提取3 h，取上清液，濃縮至10 mL，0.22 μm濾膜過濾，即得。

1.3 大氣壓化學(xué)電離質(zhì)譜分析條件

LCQTM大氣壓化學(xué)電離離子阱質(zhì)譜儀(美國，Thermo)：采用正離子模式，掃描范圍：m/z100～500；離子阱條件：源加熱溫度300 ℃，噴霧電壓4.5 kV,金屬加熱毛細(xì)管溫度275 ℃，毛細(xì)管電壓15 V。

2 結(jié)果與討論

2.1 月腺大戟中二萜類成分的APCI-MSn分析

月腺大戟中二萜類成分巖大戟內(nèi)酯B(Jolkinolide B)、對映體-11α-羥基松香烷-8(14),13(15)-二烯-16,12α-內(nèi)酯(Ent-11α-hydroxyabieta-8(14),-13(15)-dien-16,12α-olide)、巖大戟內(nèi)酯A(Jolkinolide A)、月腺大戟甲素(Ebracteolatanolide A)、月腺大戟乙素(Ebracteolatanolide B)的結(jié)構(gòu)式見圖1。月腺大戟乙醇提取液的全譜譜圖見圖2，月腺大戟中二萜類成分的APCI-MSn譜圖如圖3所示。月腺大戟乙醇提取液的APCI-MSn實驗產(chǎn)生的主要碎片離子如表1所示，將色譜行為、結(jié)構(gòu)信息與對照品及相關(guān)文獻(xiàn)對照鑒定了5個二萜類成分。

下面以巖大戟內(nèi)酯B為例說明二萜類成分裂解機(jī)理的推斷過程。對照品巖大戟內(nèi)酯B的APCI-MS一級譜中的準(zhǔn)分子離子為[M+H]+(m/z331)，m/z331離子在二級譜中碎裂產(chǎn)生一系列碎片離子，可以見到[M+H-H2O]+(m/z313)離子、[M+H-CO]+(m/z303)離子、[M+H-H2O-CO]+(m/z285)離子，其中m/z303離子是基峰。m/z331離子可能的裂解機(jī)理如圖4所示。m/z331的化合物，在APCI-MSn條件下產(chǎn)生的各級碎片離子與巖大戟內(nèi)酯B相同(表1，圖3)，因此確定該化合物為巖大戟內(nèi)酯B。

2.2 月腺大戟中苯乙酮類成分的APCI-MSn分析

月腺大戟中苯乙酮類成分狼毒乙素(2,4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone)、3,3′-二乙?；?4,4′-二甲氧基-2,2′,6,6′-四羥基二苯甲烷(3,3′-diacetyl-4,4′-dimethoxy-2,2′,6,6′-tetrahydroxydiphenylmethane)的結(jié)構(gòu)式見圖5。圖6為狼毒乙素的裂解機(jī)理。月腺大戟乙醇提取液的APCI-MSn實驗產(chǎn)生的主要碎片離子如表1所示。將色譜行為、結(jié)構(gòu)信息與對照品及相關(guān)文獻(xiàn)對照鑒定了2個苯乙酮類成分。

MSMSn(m/z) and relative abundance(%)MS2MS3MS4MS5

3 結(jié)論

本實驗應(yīng)用APCI/MSn技術(shù)，對月腺大戟中五種抗癌活性成分松香烷型二萜內(nèi)酯巖大戟內(nèi)酯B、對映體-11α-羥基松香烷-8(14),13(15)-二烯-16,12α-內(nèi)酯、巖大戟內(nèi)酯A、月腺大戟甲素、月腺大戟乙素以及兩種抗結(jié)核活性成分苯乙酮類物質(zhì)狼毒乙素、3,3′-二乙?；?4,4′-二甲氧基-2,2′,6,6′-四羥基二苯甲烷進(jìn)行了深入研究，獲得了相應(yīng)化合物的結(jié)構(gòu)信息，上述研究為月腺大戟藥材的鑒別提供了準(zhǔn)確、快速的分析方法。