探究腫瘤靶向物載體的細(xì)胞靶向性

胡　俊

江蘇省南京市紅十字醫(yī)院腫瘤科，江蘇南京　210001

探究腫瘤靶向物載體的細(xì)胞靶向性

胡俊

江蘇省南京市紅十字醫(yī)院腫瘤科，江蘇南京210001

目的探討和分析腫瘤靶向物載體的細(xì)胞靶向性。方法 選擇293T細(xì)胞和H460細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)選擇該院實(shí)驗(yàn)室，時(shí)間為2016年2—3月，選擇合成的SP5-52、阿霉素、第4代聚酰胺—胺、超濾離心管、熒光分子異硫氰酸熒光素等，并總結(jié)和探討腫瘤靶向性藥物所具有的細(xì)胞靶向性。結(jié)果 在常規(guī)藥物制劑的條件下對(duì)抗腫瘤藥物新型靶向載體系統(tǒng)進(jìn)行發(fā)展，并且改善藥物在載體內(nèi)部的代謝動(dòng)力學(xué)相關(guān)特征，能夠讓藥物向富集到腫瘤藥部位、腫瘤細(xì)胞內(nèi)部聚集，保證療效得到提升，毒副作用逐漸減小，檢測(cè)濃度范圍之內(nèi)細(xì)胞存活率超過(guò)80%，其中G4-Ac毒性為90%、G4-Ac-FITC為87%、而G4-Ac-FITC-SP5-52細(xì)胞毒性為97%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 在科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展和進(jìn)步的影響下，抗癌藥物劑型的研究工作開(kāi)始朝著靶向、高效、智能化方向發(fā)展，理想藥物劑型具有控釋、緩釋、靶向發(fā)展前景較為廣闊，值得在；臨床運(yùn)用上進(jìn)行使用和推廣。

腫瘤靶向藥物；載體；細(xì)胞靶向

［Abstract］Objective To investigate and analyze the cell targeting of tumor targeting vector.Methods Source selection to 293T cells and H460 cells as experimental samples，experimental sites were selected in the laboratory of our hospital for February 2016 to 2016 March，SP5 52，doxorubicin，the 4th generation of polyamide amine，ultra filtration centrifuge tube，fluorescence isothiocyanate fluorescein，and summarize and discuss the tumor target to drugs with cell targeting.Results U-under the conditions of conventional pharmaceutical formulations against tumor new drug target to support system development，and improve the drug in the carrier of metabolic dynamics characteristics，can make the drug to enriched to drug site of tumors and tumor cells aggregation，ensure curative effect to improve，toxic side effect decreases gradually，detection concentration range cell survival rate of over 80%，which G4-Ac toxicity is 90%，G4-Ac-FITC as 87%，and G4-Ac-FITC-SP5 52 cytotoxicity was 97%；the difference is statistically significant（P＜0.05）.Conclusion Under the influence of the continuous development of science and technology and progress，form of anticancer drugs work started towards the target，efficient，intelligent direction，ideal of pharmaceutical dosage forms with controlled and sustained release，targeted development prospect is broad，it is in；clinical application of use and promotion.

［Key words］Tumor targeting drug；Vector；Cell targeting

很多治療以及診斷腫瘤的藥物在臨床上的運(yùn)用較為普遍，這些藥物所產(chǎn)生的作用具有顯著的非選擇性特征，體內(nèi)分布相對(duì)較廣，一些正常組織器官有著較多的分布在，治療劑量下對(duì)于正常組織器官的毒副作用較為明顯，患者無(wú)法耐受，從而導(dǎo)致質(zhì)量效果受到影響［1］。如何提升抗腫瘤藥物治療效果，首先要能夠保證藥物的腫瘤選擇性得到提升，降低在非靶部位出現(xiàn)聚集的現(xiàn)象，減少藥物對(duì)非靶部位產(chǎn)生的毒副作用，在降低藥物治療劑量的同時(shí)減少不必要的給藥次數(shù)，提升藥物效果［2］。選擇不同的化療藥物還會(huì)對(duì)臟體造成不同的損傷，所以對(duì)腫瘤靶向藥物載體進(jìn)行研究逐漸成為腫瘤治療領(lǐng)域需要研究的一個(gè)問(wèn)題。對(duì)于腫瘤出現(xiàn)全新的血管，伴隨一些蛋白特質(zhì)表達(dá)、高表達(dá)的顯著特征。研究工作人員開(kāi)發(fā)較多的特異靶向腫瘤新生血管的靶向多肽，包括LHRH、NCR以及RCD肽。為了進(jìn)一步探討和分析腫瘤靶向物載體的細(xì)胞靶向性，該文把丁二酸酐當(dāng)成手臂把SP5-52多肽共價(jià)轉(zhuǎn)變成聚酰胺—胺形狀樹(shù)枝狀高分子材料之上，并利用熒光分子異硫氰酸熒光素當(dāng)成檢測(cè)探針，通過(guò)對(duì)熒光顯微鏡進(jìn)行倒置來(lái)對(duì)腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物和載體的吸收狀況進(jìn)行觀察和分析，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為2016年2—3月，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇293T細(xì)胞和H460細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本，，實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)選擇該院實(shí)驗(yàn)室，選擇合成的SP5-52、阿霉素、第4代聚酰胺—胺、超濾離心管、熒光分子異硫氰酸熒光素等；所使用的儀器包括紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)721/ 721-100型、流式細(xì)胞儀貝克曼型、二氧化碳培養(yǎng)箱BPN-50CH（uv）型。

1.2方法

首先進(jìn)行靶向載體的合成以及鑒定，需要對(duì)PAMAM利用部分乙?；瘉?lái)減少材料的毒性，保證生物相容性得到提升，并把熒光探針?lè)肿覨ITC共價(jià)和載體進(jìn)行連接，把SP5-52肽利用丁二酸酐手臂共價(jià)和載體進(jìn)行連接，獲得相應(yīng)產(chǎn)物［3］。所有反應(yīng)步驟的產(chǎn)物都利用氫核磁共振波譜法進(jìn)行鑒定，并對(duì)粒徑進(jìn)行檢測(cè)。

其次，對(duì)凍存的H460細(xì)胞和293T細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，并使用具有10%的新生胎牛血清RPM11640P培養(yǎng)液、在含有5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，控制溫度37℃恒溫，將顯微鏡倒置來(lái)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行逐日觀察，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)超過(guò)孔的90%左右時(shí)，需要鍵入1ml的消化液進(jìn)行消化，并以1：5的比例進(jìn)行傳代。

再者，利用MTT實(shí)驗(yàn)對(duì)材料細(xì)胞的毒性進(jìn)行檢測(cè)，并以293T細(xì)胞種植在96孔板中，放置在含有5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，控制溫度37℃恒溫，選擇酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀對(duì)570 nm波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)指標(biāo)包括各個(gè)孔的吸光度，利用細(xì)胞存活率對(duì)細(xì)胞毒性結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)［4］。

還要通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)載體靶向性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，利用24孔板對(duì)293T、H460細(xì)胞進(jìn)行24培養(yǎng)之后放棄原培養(yǎng)液，并在細(xì)胞內(nèi)部加入含有5%濃度的G4-Ac-FITC的培養(yǎng)液200 μL，在37℃環(huán)境中進(jìn)行4 h的培養(yǎng)，并將培養(yǎng)液倒出，對(duì)PBS進(jìn)行2次清洗之后加入胰酶消化液，控制細(xì)胞懸液選擇1 000 r/min的離心8 min，加入800 μPBS懸浮細(xì)胞，并利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

最后進(jìn)行細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)，利用96孔板對(duì)H460進(jìn)行24 h培養(yǎng)之后丟棄原來(lái)的培養(yǎng)液，并向細(xì)胞中加入含有游離的DOX200μL培養(yǎng)液。保證培養(yǎng)液的中含有的阿霉素最終濃度控制為10 μmol/L，并繼續(xù)進(jìn)行4 h的培養(yǎng)，丟棄之前的培養(yǎng)液，使用PBS進(jìn)行3次緩沖液進(jìn)行清洗，對(duì)熒光顯微鏡進(jìn)行倒置，控制為543 nm激發(fā)光下觀察細(xì)胞可能對(duì)阿霉素吸收的情況造成的影響［5］。

1.3統(tǒng)計(jì)方法

該文相關(guān)信息和數(shù)據(jù)使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行比較和分析，計(jì)量資料使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組內(nèi)多重比較使用t檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05時(shí)，為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

通過(guò)乙酰化修飾的靶向載體將會(huì)對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞產(chǎn)生顯著的靶向性，游離狀態(tài)的SP5-52多肽能夠更好地對(duì)載體靶向性產(chǎn)生抑制作用，這種靶向載體能夠利用物理包埋的方式來(lái)影響阿霉素，并且會(huì)對(duì)阿霉素的釋放造成緩釋放影響，利用倒置的熒光顯微鏡來(lái)進(jìn)行觀察之后發(fā)現(xiàn)靶向載體能夠讓阿霉素更快速地進(jìn)入到腫瘤細(xì)胞。檢測(cè)濃度范圍之內(nèi)細(xì)胞存活率超過(guò)80%。但是，F(xiàn)ITC以及SP5多肽鏈接將會(huì)對(duì)細(xì)胞毒性不造成任何影響，見(jiàn)表1。

表1　不同材料對(duì)293T細(xì)胞的毒性作用

3　討論

在對(duì)腫瘤藥物靶向載體進(jìn)行研究時(shí)，靶向劑所具有的靶向性將會(huì)對(duì)載體的靶向性能造成影響，能是否對(duì)腫瘤產(chǎn)生靶向作用［6］。目前研究較為普遍的是適配子、單克隆抗體、多肽和配體。多肽則是因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，所以利用化學(xué)合成的方法快讀進(jìn)行合成，和單克隆抗體相比較，其結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定，不會(huì)出現(xiàn)變性，所以，受到較多的關(guān)注［7］。

該文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)在1、2、3 h和4 h內(nèi)的四種不同材料產(chǎn)生的毒性作用不同，這就說(shuō)明時(shí)間長(zhǎng)短將會(huì)對(duì)腫瘤靶向性藥物效果造成不同的影響。其中其中G4-Ac毒性為90%、G4-Ac-FITC為87%、而G4-Ac-FITC-SP5-52細(xì)胞毒性為97%。受體—配體介導(dǎo)的NLC屬于發(fā)展前景較好的主動(dòng)TCS，其選擇的材料具有生物相容性良好、無(wú)毒安全的特征，其機(jī)體耐受性較為顯著，穩(wěn)定劑滿足通用安全標(biāo)準(zhǔn)的表面活性要求，通過(guò)使用高壓乳均勻法進(jìn)行制備，該種方法相對(duì)成熟，得到的粒徑相對(duì)較小、分布相對(duì)狹窄，能夠更好地避免對(duì)人體造成有害附加劑、有機(jī)溶劑的使用，特別是運(yùn)用在熱量條件下性能不穩(wěn)定的藥物中能夠產(chǎn)生更加顯著的效果［8］。根據(jù)高勇等［6］進(jìn)行的分析，充分表明塑料試管中加入懸浮狀的 HUVEC細(xì)胞為0.5 mL、0～10 pg/tube的RGD0.1 mg，其反應(yīng)體積為0.7 mL。這和該文研究存在一定的相似性，該文主要是測(cè)量不同藥物材料不同時(shí)間內(nèi)的效果，但是，其得出的測(cè)量結(jié)果存在差異。另一種措施就是針對(duì)PAMAM表層部分進(jìn)行乙?；揎?，屏蔽部分正電荷，從根本上降低表層正電荷密度，減少細(xì)胞毒性［9］。

總之，G4-FITC-SP5-52體外展示出腫瘤所具有的良好性能，并逐漸轉(zhuǎn)變成了腫瘤臨床治療過(guò)程中的主要靶向藥物載體。

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To Explore the Cell Targeting Tumor Targeting Drug Carrier

HU Jun
Department of Oncology，Nanjing Red Cross Hospital，Jiangsu Province，Nanjing，Jiangsu Province，210001 China

R73

A

1674-0742（2016）08（c）－0043-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.24.043

2016-05-25）

胡俊（1971.5-），江蘇泗洪人，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：實(shí)體腫瘤化療及姑息支持治療。