藍(lán)莓花色苷對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞系生長(zhǎng)的影響

王　丹黃紫藤,4馬　越趙曉燕,4

(1.北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心，北京　100097；2. 農(nóng)業(yè)部華北地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京　100097；3. 農(nóng)業(yè)部都市農(nóng)業(yè)(北方)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京　100097；4；北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院,北京　102206)

?

藍(lán)莓花色苷對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞系生長(zhǎng)的影響

王丹1,2,3黃紫藤1,2,3,4馬越1,2,3趙曉燕1,2,3,4

(1.北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心，北京100097；2. 農(nóng)業(yè)部華北地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100097；3. 農(nóng)業(yè)部都市農(nóng)業(yè)(北方)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100097；4；北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院,北京102206)

以花色苷含量為21.34%的藍(lán)莓花色苷粉末為原料，采用MTT法、顯微鏡觀察法，同時(shí)利用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定細(xì)胞活率，3種方法共同檢測(cè)藍(lán)莓花色苷作用于雞胚成纖維細(xì)胞系的細(xì)胞毒性，以完成細(xì)胞試驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕?。結(jié)果表明：50～100 μg/mL的藍(lán)莓花色苷可以促進(jìn)雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)，高于100 μg/mL的藍(lán)莓花色苷，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用。該結(jié)果可為進(jìn)一步拓展花色苷功能性研究，以及以雞胚成纖維細(xì)胞為模型的生物功能性研究提供理論依據(jù)。

藍(lán)莓花色苷；雞胚成纖維細(xì)胞系；MTT法

雞胚成纖維細(xì)胞來(lái)源于East Lansing Line(ELL-0)雞胚胎，具有永生性，是一種可傳代的細(xì)胞系[1]。此細(xì)胞系缺少禽白血病病毒的相關(guān)內(nèi)源片段，并具有正常的成纖維形態(tài)，可以用于禽源病毒的增殖，用作生物制品研究與生產(chǎn)的重要材料，近些年，其安全性備受相關(guān)科研人員的關(guān)注[2-3]。

花色苷是一類廣泛存在于植物中的天然酚類化合物，主要分布在顏色鮮艷的蔬菜和水果中，如橙色、紅色和藍(lán)色等，尤其存在于漿果中。藍(lán)莓是一種杜鵑花科的越橘屬植物，漿果外觀呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)黑色，以“世界水果之王”著稱，藍(lán)莓花色苷是藍(lán)莓果實(shí)中提取出來(lái)的天然花色苷色素，呈紫黑色粉末狀，無(wú)毒、無(wú)異味，花色苷對(duì)多種疾病有很好的療效[4]，如具有抗氧化、清除自由基、降低患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)、改善視力、降血脂以及抗腫瘤、抗糖尿病等諸多抗病作用[5-6]。因藍(lán)莓花色苷具有諸多生理功能，故近年來(lái)此類物質(zhì)引起了科研人員的廣泛關(guān)注，對(duì)于其抗氧化、抗癌細(xì)胞增殖等作用已有很多研究。藍(lán)莓葉多酚提取物可以抑制細(xì)菌活性，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌性[7]。關(guān)于藍(lán)莓花色苷的抗氧化作用方面有一些報(bào)道，李穎暢等[8]認(rèn)為藍(lán)莓花色苷可以降血脂并且具有抗氧化生物活性，可以降低發(fā)生動(dòng)脈硬化的危險(xiǎn)性。并且已有報(bào)道[9]證明，藍(lán)莓花色苷粉末可以顯著抑制脂質(zhì)體的過(guò)氧化。曾有人[10]用藍(lán)莓花色苷喂飼老年大鼠60 d后，老年老鼠同中年大鼠的平衡能力一樣好，可以在滾動(dòng)的木棍上保持很好的平衡。在飼喂老鼠120 d后，老年老鼠的測(cè)試成績(jī)同年輕鼠的測(cè)試成績(jī)一樣好。

雞胚成纖維細(xì)胞是常用于評(píng)估藥物活性或病毒侵染的模式細(xì)胞，紫玉米、紫甘薯等花色苷對(duì)其生長(zhǎng)的影響已有報(bào)道[6]，花色苷組分不同，功能性不同，而藍(lán)莓花色苷對(duì)此細(xì)胞的生長(zhǎng)是否有影響，目前未有研究。本試驗(yàn)擬研究不同濃度的藍(lán)莓花色苷作用于雞胚成纖維細(xì)胞，觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化及不同濃度藍(lán)莓花色苷對(duì)細(xì)胞存活情況的影響，旨在為后期以雞胚成纖維細(xì)胞為細(xì)胞模型的試驗(yàn)提供相關(guān)的濃度參數(shù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

1.1.1材料與試劑

藍(lán)莓花色苷粉末：北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心；

雞胚成纖維細(xì)胞、0.25%胰蛋白酶溶液 (1x)：武漢菲恩生物科技有限公司；

DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)：美國(guó)Gibco公司；

二甲基亞砜(DMSO)：北京索萊寶公司；

3-(4,5-二甲基噻唑-2) -2,5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT)、青鏈霉素雙抗溶液(100X)：美國(guó)Sigma公司；

DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液：美國(guó)Hyclone 公司。

1.1.2主要儀器設(shè)備

超凈工作臺(tái)：DL-CJ-1NDII型，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；

二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱：Series 8000 DH 3543型，美國(guó)Thermo 公司；

倒置熒光顯微鏡：BDS200型，重慶OPTEC奧特光學(xué)公司；

酶標(biāo)儀：SpectraMax i3型，美國(guó)Molecular Devices公司；

Countstar自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)分析儀：IC 1000型，北京五洲東方科技發(fā)展有限公司；

高速離心機(jī)：3K15型，德國(guó)Sigma公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1雞胚成纖維細(xì)胞的復(fù)蘇預(yù)先配好含有15% FBS的DMEM培養(yǎng)液，加入1%青鏈霉素雙抗溶液，于37 ℃水浴中預(yù)熱30 min。從液氮中取出細(xì)胞凍存管，迅速置于37 ℃溫水中搖晃，使凍存管中的冰迅速融化，待凍存管中僅剩少量冰時(shí)拿出， 1 000 r/min離心5 min，以70%酒精噴灑凍存管表面，置于超凈臺(tái)內(nèi)吹干。棄去上層凍存液，以一次性移液管加入預(yù)熱好的培養(yǎng)基，有序地吹吸細(xì)胞，將細(xì)胞吹打分散至均勻，移至T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并補(bǔ)足至6 mL培養(yǎng)液。將細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于含5% CO2的37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后，即可換入新的細(xì)胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，至長(zhǎng)成單層后傳代。

1.2.2雞胚成纖維細(xì)胞的傳代培養(yǎng)待雞胚成纖維細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶壁的80%，棄去上清液，加入預(yù)熱的PBS進(jìn)行清洗，立即倒出，再加入0.25%胰蛋白酶溶液，置于37 ℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，見(jiàn)細(xì)胞脫落后將細(xì)胞懸液移入到裝有FBS的離心管中，以1 300 r/min離心5 min后加入DMEM培養(yǎng)液，用吸管有序地吹打細(xì)胞至細(xì)胞分散，以1∶3傳代，加入到含5% FBS的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)細(xì)胞，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于5% CO2條件下37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天傳代。

1.2.3藍(lán)莓花色苷對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的影響參考蓋麗麗等[6]的試驗(yàn)方法，用濃度為10 mmol/L的PBS緩沖液將藍(lán)莓花色苷粉稀釋成母液，母液濃度為12.5 mg/mL，用0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌，作為儲(chǔ)備液可凍存于-20 ℃冰箱中，方便日后使用。將一瓶長(zhǎng)滿的雞胚成纖維細(xì)胞消化，加入含5% FBS的DMEM細(xì)胞生長(zhǎng)液，接種于96孔板，每孔加入200 μL的細(xì)胞懸液，鋪板時(shí)用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)分析儀測(cè)定細(xì)胞濃度，為5.97×105mL-1。放置于5% CO2培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)至細(xì)胞長(zhǎng)成單層，棄液，每孔換成含2% FBS的DMEM細(xì)胞維持液，同時(shí)加入50，75，100，150 μg/mL的4種濃度的藍(lán)莓花色苷溶液，每一種藍(lán)莓花色苷濃度均設(shè)置3組重復(fù)，試驗(yàn)同時(shí)設(shè)置細(xì)胞對(duì)照組和重復(fù)組。在不同的時(shí)間點(diǎn)(12，24，48，72 h)，利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)各孔內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，同時(shí)用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，根據(jù)康雪燕[11]提供判斷標(biāo)準(zhǔn)來(lái)記錄結(jié)果。

1.2.4MTT法檢測(cè)藍(lán)莓花色苷對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的作用用0.25%胰蛋白酶溶液消化處理雞胚成纖維細(xì)胞，加入含5% FBS的DMEM細(xì)胞生長(zhǎng)液，用一次性移液槍吹散細(xì)胞制備細(xì)胞懸液，然后用八通道一體移液器將細(xì)胞懸液接種于96孔板，鋪板時(shí)的細(xì)胞濃度為1.14×105mL-1。鋪板時(shí)每孔200 μL，將96孔板置于含5% CO2培養(yǎng)箱中于37 ℃培養(yǎng)至細(xì)胞單層長(zhǎng)滿80%，棄去每孔內(nèi)的細(xì)胞上清液，加入藍(lán)莓花色苷，用含2% FBS的DMEM培養(yǎng)液調(diào)節(jié)花色苷的終濃度分別為50，75，100，150 μg/mL，每一種藍(lán)莓花色苷濃度設(shè)3組重復(fù)，試驗(yàn)同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組。同時(shí)接種4塊96孔板，注意無(wú)菌操作。然后將其置于5% CO2培養(yǎng)箱中于37 ℃過(guò)夜培養(yǎng)，分別于第12、24、48、72小時(shí)取出一塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，棄去每孔中的上清液，向每孔中加入10 μL的MTT溶液，置于37 ℃培養(yǎng)孵育4 h后，棄去孔內(nèi)液體，向每孔中加入170 μL二甲基亞砜(DMSO)溶液，為使形成的甲躦完全溶解，酶標(biāo)儀設(shè)置讀數(shù)前震蕩600 s，于490 nm處測(cè)定吸光值。

2　結(jié)果與分析

2.1藍(lán)莓花色苷對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的影響檢測(cè)結(jié)果

在對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)影響的試驗(yàn)中，隨著藍(lán)莓花色苷濃度增加和時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的生長(zhǎng)存活情況也會(huì)隨之改變，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)合倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)(結(jié)果見(jiàn)圖1)，記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，可以找到相應(yīng)的最適合雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的藍(lán)莓花色苷的終濃度。與對(duì)照組相比，細(xì)胞生長(zhǎng)至72 h時(shí)，濃度為50，75，100 μg/mL的藍(lán)莓花色苷沒(méi)有影響雞胚成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)，觀察到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，生長(zhǎng)形成單層，且基本未出現(xiàn)空隙，細(xì)胞形態(tài)飽滿、透亮且完整，濃度為150 μg/mL的藍(lán)莓花色苷處理組表現(xiàn)出對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的輕微抑制，未形成緊密的單層，出現(xiàn)空隙。隨著時(shí)間的增加，120 h后，對(duì)照組的細(xì)胞還可以正常生長(zhǎng)，而濃度為150 μg/mL的藍(lán)莓花色苷處理對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用，影響細(xì)胞生長(zhǎng)，表現(xiàn)為出現(xiàn)凋亡小體。根據(jù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)形勢(shì)以及數(shù)據(jù)，可得出藍(lán)莓花色苷的最適終濃度為100 μg/mL。

由圖1可知，72 h時(shí)細(xì)胞仍能夠正常生長(zhǎng)，且從形態(tài)上觀察具有比較明顯的差異。圖1(a)是未加藍(lán)莓花色苷的雞胚成纖維細(xì)胞對(duì)照組，細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形成單層，基本無(wú)空隙。圖1(b)和(c)是藍(lán)莓花色苷濃度為50 μg/mL和100 μg/mL?的試驗(yàn)組，生長(zhǎng)狀態(tài)與對(duì)照組相同。圖1(d)是藍(lán)莓花色苷濃度為150 μg/mL的試驗(yàn)組，細(xì)胞形態(tài)不如對(duì)照組的完整，細(xì)胞單層出現(xiàn)空隙。所以最適合于雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的濃度100 μg/mL，當(dāng)濃度高于100 μg/mL時(shí)，藍(lán)莓花色苷會(huì)對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用。

表1藍(lán)莓花色苷對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的影響?

Table 1Effect of different concentrations of blueberry anthocyanins on primary chicken embryonic fibroblast growth

培養(yǎng)時(shí)間/h對(duì)照50μg/mL75μg/mL100μg/mL150μg/mL12***********************24***********************36*******************48********************60********************72*******************96**************120********144**--*-

*****表示細(xì)胞具有良好的折光性，生長(zhǎng)成完整的單層，細(xì)胞之間未形成空隙；****表示細(xì)胞狀態(tài)良好，生長(zhǎng)形成單層，并且基本未形成空隙；***表示細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一般，未生長(zhǎng)形成單層，細(xì)胞極少，且細(xì)胞之間產(chǎn)生較多的空隙；**表示細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較差，細(xì)胞極少且細(xì)胞間產(chǎn)生大量空隙；*表示細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)很差，貼壁細(xì)胞數(shù)量很少，并且無(wú)基本的細(xì)胞形態(tài)；-表示細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)極差，全部細(xì)胞均破碎、細(xì)胞不完整或細(xì)胞基本輪廓不清晰。

同時(shí)，使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定各濃度花色苷對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞的細(xì)胞活率，相應(yīng)的結(jié)果見(jiàn)表2。觀察數(shù)據(jù)可知，在24 h時(shí)各個(gè)試驗(yàn)組的細(xì)胞活率均高于細(xì)胞對(duì)照組，說(shuō)明在24 h時(shí)4種濃度的藍(lán)莓花色苷均可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。在48 h時(shí)，對(duì)照組的細(xì)胞活率94.77%，濃度為50 μg/mL的藍(lán)莓花色苷處理組的細(xì)胞活率與對(duì)照組相當(dāng)，濃度為75，100 μg/mL的處理組的細(xì)胞活率高于對(duì)照組，只有濃度為150 μg/mL的花色苷處理組的細(xì)胞活率略低于對(duì)照組。72 h后，濃度為100 μg/mL的藍(lán)莓花色苷最適合雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)。其中在120 h時(shí)，對(duì)照組的細(xì)胞活率為84.62%，100 μg/mL藍(lán)莓花色苷組的細(xì)胞活率為94.12%，差異顯著(P<0.05)。通過(guò)對(duì)比數(shù)據(jù)可以找出最適合雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的濃度，在不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)得，藍(lán)莓花色苷濃度為100 μg/mL時(shí)，細(xì)胞活率均最大，當(dāng)花色苷濃度高于100 μg/mL時(shí)細(xì)胞活率明顯下降，所以藍(lán)莓花色苷對(duì)雞胚成纖維單層細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)影響的最大安全濃度為100 μg/mL。

圖1　各試驗(yàn)組處理72 h的雞胚成纖維細(xì)胞形態(tài)

Figure 1Effect of anthocyanins on morphology of primary chicken embryonic fibroblast under microscope (×200)

2.2MTT法檢測(cè)結(jié)果

由圖2可知，藍(lán)莓花色苷對(duì)于雞胚成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)有良好的促進(jìn)作用，與對(duì)照組相比，濃度低于100 μg/mL對(duì)細(xì)胞的單層生長(zhǎng)無(wú)毒性作用，50，75，100 μg/mL的藍(lán)莓花色苷均可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，隨著藍(lán)莓花色苷濃度的增加，細(xì)胞的活性也在增加，當(dāng)濃度高于100 μg/mL時(shí)細(xì)胞活性便受到損傷，較對(duì)照組相比490 nm處的吸光值明顯降低。所以，藍(lán)莓花色苷促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的最大安全濃度為100 μg/mL。

3　結(jié)論

藍(lán)莓花色苷對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)具有影響，藍(lán)莓花色苷濃度為50～100 μg/mL時(shí)促進(jìn)雞胚成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，濃度高于100 μg/mL時(shí)對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用。本試驗(yàn)結(jié)果可為藍(lán)莓花色苷抗以雞胚成纖維細(xì)胞為模型的病毒研究提供了理論依據(jù)，但有關(guān)藍(lán)莓花色苷促進(jìn)及破壞雞胚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

表2　　　　雞胚成纖維細(xì)胞在4種不同濃度藍(lán)莓花色苷作用下的細(xì)胞活率

圖2　藍(lán)莓花色苷對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞單層生長(zhǎng)的影響

Figure 2Effect of blueberry anthocyanins for primary chicken embryonic fibroblast growth by MTT assay

[1] 侯格妮, 李俊, 李然洪, 等. 藍(lán)莓白蘭地特征香氣成分的GC—MS分析[J]. 食品與機(jī)械, 2013, 29(3): 21-26.

[2] CHEN Jian, ZHAO Ying, TAO Xiao-yun. Protective effect of blueberry anthocyanins in a CCl4-induced liver cell model[J]. LWT - Food Science and Technology, 2015, 60(2): 1 105-1 112. [3] PETRFOCIANI J. Cell substrates: where do we stand after 50 years of discussion[J]. Developmental Biology, 2006, 123: 11-21, discussion 55-73.

[4] 徐淵金, 杜琪珍. 花色苷生物活性的研究進(jìn)展[J]. 食品與機(jī)械, 2006, 22(6): 154-157.

[5] 王秀臻, 張培培, 程合剛, 等. 雞胚成纖維細(xì)胞替代雞胚成纖維細(xì)胞上清快速檢測(cè)外源性禽白血病病毒的探究[J]. 中國(guó)家禽, 2013, 35(10): 18-21.

[6] 蓋麗麗, 張莉, 姜世金, 等. 3種花色苷對(duì)DF-1細(xì)胞的影響[J]. 生物技術(shù)通訊, 2012, 23(4): 242-245.

[7] 王亞麗, 李穎暢, 馬春穎, 等. 藍(lán)莓葉多酚提取物對(duì)3種細(xì)菌的抑菌活性[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2015, 41(3): 163-167.

[8] 李穎暢, 孟憲軍, 孫靖靖, 等. 藍(lán)莓花色苷的降血脂和抗氧化作用[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2008, 34(10): 44-48.

[9] 李穎暢, 馬春穎, 孟憲軍, 等. 藍(lán)莓花色苷提取物抗油脂氧化能力的研究[J]. 中國(guó)糧油學(xué)報(bào), 2010, 25(2): 92-95.

[10] 凌關(guān)庭. 可供開(kāi)發(fā)食品添加劑(IX): 蘭莓提取物及其抗氧化作用[J]. 糧食與油脂, 2003(6): 45-48.

[11] 康雪燕. 豬傳染性胃腸炎病毒S蛋白在畢赤酵母中的分泌表達(dá)及免疫原性分析[D]. 泰安: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué), 2010: 37.

Effect of anthocyanins from blueberry on primary chicken embryonic fibroblast

WANG Dan1,2,3HUANGZi-teng1,2,3,4MAYue1,2,3ZHAOXiao-yan1,2,3,4

(1.BeijingVegetableResearchCenter,BeijingAcademyofAgricultureandForestryScience,Beijing100097,China;2.KeyLaboratoryofBiologyandGeneticImprovementofHorticulturalCrops(NorthChina) ,MinistryofAgriculture,P.R.China,Beijing100097,China; 3.KeyLaboratoryofUrbanAgriculture(North) ,MinistryofAgriculture,Beijing100097,China; 4.FoodScienceandEngineeringCollege,BeijingUniversityofAgriculture,Beijing, 102206,China)

The effect of blueberry anthocyanins on the growth of primary chicken embryonic was investigated fibroblast in this study. 21.34% of anthocyanins was used to The situation of cell growth was evaluate by optical microscope, cell counter, and MTT assays. We observed that 50-100 μg/mL was the optimal concentration, which had no cytotoxicity to primary chicken embryonic fibroblast. It would inhibit cell growth when the concentration was more than 100 μg/mL. The results of this study may provide the basis for further development of anthocyanins functional studies and give helpful information for preventing the virus which used primary chicken embryonic fibroblast as cell model.

blueberry anthocyanins; primary chicken embryonic fibroblast; MTT assay

北京市科技新星計(jì)劃(編號(hào)：Z131105000413023)；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金資助(編號(hào)：CARS-25)

王丹，女，北京市農(nóng)林科學(xué)院副研究員。

趙曉燕(1969—)，女，北京市農(nóng)林科學(xué)院研究員。

E-mail: zhaoxiaoyan@nercv.org

2016-05-04

10.13652/j.issn.1003-5788.2016.08.004