參茸健腦膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張　紅　孫婷婷　衛(wèi)向峰　黨秋萍　劉建峰　霍　花

陜西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所(西安 700700)

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參茸健腦膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張紅孫婷婷衛(wèi)向峰△黨秋萍劉建峰□霍花▲

陜西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所(西安 700700)

目的：采用TLC和HPLC-ELSD建立參茸健腦膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法鑒別參茸健腦膠囊中干姜和人參，采用HPLC-ELSD法對(duì)人參有效成分人參皂苷Rb1進(jìn)行定量分析。結(jié)果：在薄層色譜中均能檢出干姜、人參藥材相應(yīng)的主斑點(diǎn)；人參皂苷Rb1進(jìn)樣量在0.8780～5.2680μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線(xiàn)性關(guān)系(r =0.9999)，加樣回收率良好，均值為100.08%，RSD為2.35%。結(jié)論：所建立的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可用于參茸健腦膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制。

主題詞中藥質(zhì)量檢測(cè)@參茸健腦膠囊

參茸健腦是西安中醫(yī)腦病醫(yī)院臨床應(yīng)用較好的醫(yī)院制劑，由人參、干姜、黃芪、鹿茸、當(dāng)歸等12味中藥組成。該方具有健脾益腎，養(yǎng)血補(bǔ)氣，強(qiáng)身健腦的功效，臨床用于腦萎縮、腦發(fā)育不全、五軟等。為更專(zhuān)屬、靈敏的控制該制劑的質(zhì)量，本研究采用薄層色譜法鑒別參茸健腦膠囊中干姜和人參，采用HPLC-ELSD法對(duì)人參中人參皂苷Rb1進(jìn)行含量測(cè)定，并在此基礎(chǔ)上制定了該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1儀器與試藥高效液相色譜儀，超聲波提取儀、電子分析天平。人參皂苷Rb1、Re標(biāo)準(zhǔn)品、干姜對(duì)照藥材(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110704-201223)，甲醇、乙腈為美國(guó)Fisher公司產(chǎn)色譜純，其它均為分析純?cè)噭?。薄層色譜中所用硅膠板為普通硅膠G板。本研究中所用參茸健腦膠囊由西安中醫(yī)腦病醫(yī)院藥劑科生產(chǎn)(60粒/瓶)。

2方法與結(jié)果2.1定性鑒別2.1.1人參定性鑒別[1]：精密稱(chēng)取本品內(nèi)容物3g，加甲醇50ml，采用超聲法提取10min，過(guò)濾得提取液，低溫?fù)]去溶劑，加水25ml溶解，用三氯甲烷提取2次(25ml/次)，棄去提取液，水溶液用水飽和正丁醇提取2次(25ml/次)，合并提取液，用10%氨試液洗滌2次(30ml/次)，正丁醇液置水浴低溫?fù)]去溶劑，加甲醇溶解，定容至2ml，即得供試品溶液。另按處方比例取不含人參的陰性對(duì)照藥材，同法制成陰性樣品溶液。人參皂甙Re、人參皂甙Rb1標(biāo)準(zhǔn)品溶液：2mg/ml(甲醇)。采用TLC法進(jìn)行鑒別，點(diǎn)樣量為5μl，薄層板采用硅膠G薄層板，展開(kāi)劑為：CHCl3-HCOOH-CH3OH-H2O(15∶40∶22∶10)下層液(低于10℃放置)，顯色劑：10%硫酸乙醇溶液溶液，于105℃加熱2min至斑點(diǎn)顯色清晰。在供試品色譜中，檢出人參皂甙Re、人參皂甙Rb1，缺人參陰性樣品無(wú)干擾。

2.1.2干姜定性鑒別[2]：精密稱(chēng)取本品7.5g，加乙醚20ml，采用超聲法提取30min，過(guò)濾，濾液低溫?fù)]去溶劑，加乙酸乙酯1ml溶解，即得供試品溶液。另按處方比例取不含干姜的陰性對(duì)照藥材，同法制成陰性樣品溶液。再精密稱(chēng)取干姜標(biāo)準(zhǔn)藥材1g，同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。采用TLC法進(jìn)行鑒別，點(diǎn)樣量為5μl，薄層板采用硅膠G薄層板，展開(kāi)劑：以石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶1∶1∶0.1)，展開(kāi)后置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中檢出干姜藥材，缺干姜陰性樣品無(wú)干擾。

2.2樣品中人參皂苷Rb1含量測(cè)定2.2.1HPLC-ELSD色譜條件：色譜柱：Diamonsil C18；流動(dòng)相：乙腈-水(31∶69)；ELSD條件(氣體流速：2.8 L/min；檢測(cè)器溫度為：105℃)。TPN大于6000(按人參皂苷Rb1色譜峰計(jì)算)。

2.2.2樣品溶液制備：對(duì)照溶液制備：根據(jù)文獻(xiàn)中的方法，精密稱(chēng)取人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，加甲醇制成0.3512mg/ml的對(duì)照品溶液，備用。供試溶液制備[3-4]：取本品適量，精密稱(chēng)取約3g，采用索氏提取器，用氯仿提取3h，棄去提取液，再精密加入50ml正丁醇，放置12h后采用超聲法提取30min，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，低溫水浴蒸干，甲醇溶解，定容至5ml，即得?？瞻讓?duì)照樣品溶液的制備：取除人參以外的處方中其它藥材，按照本制劑制備工藝制備陰性樣品，精密稱(chēng)量適量陰性樣品，按上述方法制備陰性對(duì)照樣品溶液，作為實(shí)驗(yàn)需要。

2.2.3系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn):在2.2.1色譜條件下對(duì)對(duì)照品溶液、供試品溶液以及陰性樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，供試品中人參皂苷Rb1色譜峰分離度好，陰性樣品沒(méi)有干擾，故確定流動(dòng)相比例為乙腈-水(19∶81)。

2.2.4線(xiàn)性范圍考察:分別精密吸取0.3512mg/ml的人參皂苷Rb1對(duì)照溶液2、4、6、8、10、12μl，測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程y=2.0908x+5.0599，r =0.9999，人參皂苷Rb1在0.8780～5.2680μg范圍內(nèi)，從結(jié)果來(lái)看，實(shí)驗(yàn)中的峰面積值與進(jìn)樣量呈線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.5精密度實(shí)驗(yàn):吸取人參皂苷Rb1對(duì)照溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，分別測(cè)定，RSD為1.3%。

2.2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):取樣品適量，制備供試品溶液1份，分別放置0、2、4、6、8、10h測(cè)定其峰面積并計(jì)算含量，測(cè)得RSD為1.64%。表明本樣品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn):取樣品適量，制備供試品溶液5份，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)RSD為1.95%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.2.8加樣回收實(shí)驗(yàn):按照設(shè)計(jì)方法，精密稱(chēng)取已知含量(0.7431 mg/g)的樣品共6份，將樣品置于三角瓶中，然后對(duì)6份樣品分別精密加入人參皂苷Rb1對(duì)照品(0.439g/ml) 2.25、2.25、1.8、1.8、2.7、2.7ml，按照供試品制備方法制成加樣回收供試品溶液，分別測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，人參皂苷Rb1回收率在95～100%之間，平均回收率為100.08%；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示RSD為2.35%，加樣回收率良好。

表1　人參皂苷Rb1回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2.9樣品測(cè)定:三批樣品分別精密稱(chēng)取適量，按“重現(xiàn)性試驗(yàn)”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果

3討論參茸健腦膠囊是西安中醫(yī)腦病醫(yī)院根據(jù)中醫(yī)辨證論治的理論和實(shí)踐并經(jīng)臨床反復(fù)驗(yàn)證總結(jié)出的中藥復(fù)方制劑[5]。本研結(jié)果顯示人參和干姜的主斑點(diǎn)清晰可見(jiàn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，定性鑒別方法專(zhuān)屬性強(qiáng)。人參為君藥，人參皂苷Rb1為人參中主要有效成分，臨床研究表明其具有提高機(jī)體免疫活性、促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力、抗疲勞、抗腫瘤的作用，另外還具有腦缺血損傷、神經(jīng)損傷保護(hù)作用。含量測(cè)定色譜結(jié)果顯示人參皂苷Rb1能與其他成分良好的分離且保留時(shí)間適合，陰性對(duì)照無(wú)干擾，能夠準(zhǔn)確的反映出產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。在人參供試品制備過(guò)程中對(duì)正丁醇超聲提取時(shí)間進(jìn)行了考察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明正丁醇提取40min人參皂苷Rb1基本可提取完全，因此確定提取次數(shù)為40min。本研究所建立的方法可作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

[1]汝秋明，楚云杰. 舒神靈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2014，16(2)：145-146.

[2]彭飛城，丁野，鄭金鳳，等. 附子理中丸(濃縮丸)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立[J].中國(guó)藥師，2013，16(2)：256-257.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(一部)[S].北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：284.

[4]李瓊，曾銳，楊學(xué)森.參芪膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2014，25(1)：100-101.

[5]Liang W, Ge S, Yang L, et al. Ginsenosides Rb1 and Rg1 promote proliferation and expression of neurotrophic factors in primary Schwann cell cultures[J]. Brain Res, 2010, 1357: 20-21.

(收稿2016-02-22；修回2016-04-13)

△西安市中醫(yī)腦病醫(yī)院(西安 710038)

▲沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院北方醫(yī)院(沈陽(yáng) 110034)

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10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.065