飛天蜈蚣七不同提取物的藥效學(xué)研究

楊秦雁　李　博

陜西省中醫(yī)醫(yī)院藥劑科 (西安 710002)

?

飛天蜈蚣七不同提取物的藥效學(xué)研究

楊秦雁李博

陜西省中醫(yī)醫(yī)院藥劑科 (西安 710002)

目的：研究比較飛天蜈蚣七不同極性部位提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗疲勞和耐缺氧的活性。方法：分別采用二甲苯所致耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)、角叉菜膠所致小鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)、小鼠扭體法、熱板法、負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)和常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)對其抗炎、鎮(zhèn)痛、抗疲勞、和耐缺氧活性進(jìn)行研究。結(jié)果：飛天蜈蚣七提取物乙醇部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均表現(xiàn)出不同程度的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗疲勞作用，尤其以正丁醇部位活性最為顯著，而其各部位的耐缺氧活性均不高。結(jié)論：飛天蜈蚣七不同極性部位提取物均具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗疲勞作用，其中正丁醇部位活性最強(qiáng)。

主題詞中藥制劑實(shí)驗(yàn)，動物@飛天蜈蚣

ABSTRACT

Objective: To study the anti-inflammation, analgesia, anti-fatigue and anti-hypoxia activity of the different extracts from Aralia chinensis L.Methods: The pharmacological actions of anti-inflammation and analgesic were observed by xylene-induced ear swelling in mice, carrageenan-induced paw swelling in mice, acetic acid- induced writhing test and the hot-plate test in mice. Meanwhile, the anti-fatigue and anti-hypoxia effects were investigated by the load bearing swimming test and the hypoxia tolerance test respectively. Results: The ethanol extraction, ethyl acetate extraction and n-butanol extraction of Aralia chinensis L. all had anti-inflammation, analgesia and anti-fatigue effects. The n-butanol extraction had the most significant effect.The anti-hypoxia activity of all the different extracts was weak. Conclusion: The different extracts from Aralia chinensis L. all showed the anti-inflammation, analgesia and anti-fatigue effects. And the n-butanol extract had stronger activity.

飛天蜈蚣七為五加科植物楤木的根皮，分布于陜西、河北、山東、浙江、江西等地, 在陜西主要分布于秦嶺、巴山各個(gè)山區(qū),主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急慢性肝炎、跌打損傷、癰腫等[1-2]。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道飛天蜈蚣七具有抗肝纖維化作用，但其它藥理活性有待進(jìn)一步研究[3-4]。本研究旨在進(jìn)一步對飛天蜈蚣七不同極性部位提取物進(jìn)行藥理研究，探討各部位的藥理活性差異，篩選飛天蜈蚣七的主要活性部位，為飛天蜈蚣七藥材的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1材料1.1動物昆明種小鼠，體重20±2g，雌雄兼用，購于第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，合格證號為陜動準(zhǔn)字第01號。

1.2儀器旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申勝生物技術(shù)有限公司)；AY220 電子分析天平(日本島津分析儀器公司)；HH-4數(shù)顯恒溫?zé)岚逅″?國華電器有限公司)；8mm打孔器。

1.3實(shí)驗(yàn)試藥飛天蜈蚣七藥材采自秦巴山區(qū)、角叉菜膠、阿司匹林腸溶片、十全大補(bǔ)丸、二甲苯、冰醋酸。

2方法2.1樣品制備取飛天蜈蚣七藥材，粉碎，過3號篩，用75 %乙醇冷浸提取，回收溶劑，得乙醇粗提取物，即乙醇部位；然后依次用石油醚、乙酯乙酯、正丁醇進(jìn)行索氏提取，將各部分提取液減壓濃縮，回收溶劑，得到飛天蜈蚣七各極性部位提取物，分別為石油醚部位、乙酯乙酯部位、正丁醇部位。臨用前將各提取部位密封置冰箱中冷藏，灌胃前用1%吐溫-80溶液混懸均勻。

2.2抗炎活性考察2.2.1對二甲苯所致小鼠耳郭腫脹的影響[5]：選取昆明種小鼠 140 只，雌雄各半，隨機(jī)分成 14組，每組10 只。空白對照組給予1%吐溫-80溶液，陽性對照組給予阿司匹林(0.2g/kg)，給藥組分別為乙醇部位組、石油醚部位組、乙酸乙酯部位組、正丁醇部位組，給藥劑量分別設(shè)高、中、低劑量組(4、2、1g/kg生藥)?？诜辔附o藥，1次/d，連續(xù)給藥7d，末次給藥后，于小鼠右耳涂抹0.5ml/只二甲苯致炎，左耳不涂，1h后頸椎脫臼法處死小鼠，剪下左右兩耳，用直徑8mm打孔器在相同位置打下耳片，稱量，計(jì)算不同給藥組的腫脹度及腫脹抑制率。

2.2.2對角叉菜膠所致小鼠足趾腫脹的影響：取昆明種小鼠，分組及給藥同“2.2.1”，連續(xù)灌胃給藥7d，末次給藥后1h，于各小鼠右后足皮下注射1%角叉菜膠0.05 ml/只，5h后于同一位置剪下左右兩足，稱量，腫脹度即為右足質(zhì)量減去左足質(zhì)量，并計(jì)算腫脹抑制率。

2.3鎮(zhèn)痛活性考察2.3.1小鼠熱板鎮(zhèn)痛試驗(yàn)[6]：取雌性小鼠，水浴溫度調(diào)節(jié)為(55±0. 5)℃，記錄小鼠足底接觸熱板至出現(xiàn)舔后足反應(yīng)的時(shí)間即為小鼠痛閾值，選取痛閾值在5～30s小鼠140只。分組、給藥方法和劑量同“2.2.1”，連續(xù)灌胃給藥7d，分別于給藥前及末次給藥1h后分別測定小鼠痛閾值，痛閾值超過60s者按60s計(jì)算，并計(jì)算痛閾提高率。

2.3.2醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響：選取小鼠140只，分組及給藥同“2.2.1”，末次給藥1h后，于各小鼠腹腔注射0.6% 醋酸溶液0.2ml/10g，觀察并記錄注射醋酸溶液后20min內(nèi)小鼠出現(xiàn)扭體(伸展后肢、臀部抬高、腹部內(nèi)凹、蠕行)的次數(shù)，并計(jì)算給藥組的扭體抑制率。

2.4抗疲勞能力考察負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)選取昆明種小鼠，分組、給藥方法和劑量同“2.2.1”，陽性對照組給予十全大補(bǔ)丸(2g/kg)，末次給藥1h后，開始負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)。將小鼠體重的10%鉛塊綁至背部，負(fù)重游泳，放入水溫30℃左右的水浴鍋中游泳，當(dāng)小鼠沉入水中6s不能浮出水面時(shí)，即為體力耗竭時(shí)間。比較給給藥組的體力耗竭時(shí)間，通過計(jì)算游泳力竭時(shí)間延長率來評估其抗疲勞能力。

2.5耐缺氧能力考察常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)選取昆明種小鼠，分組、給藥方法和劑量同“2.2.1”，陽性對照組給予十全大補(bǔ)丸(2g/kg)。末次給藥1 h后，將小鼠放入密閉瓶內(nèi)，瓶內(nèi)裝有10g鈉石灰，加蓋瓶塞。記錄放入小鼠至小鼠因缺氧而死亡的時(shí)間，并計(jì)算耐缺氧存活時(shí)間延長率。

3結(jié)果3.1抗炎活性飛天蜈蚣七各極性部位提取物均表現(xiàn)出不同強(qiáng)度的抗炎作用。其中以正丁醇部位作用最為明顯，其高劑量組抑制率達(dá)到了68.4%，接近于阿司匹林組水平77.3%，低劑量組抑制率也達(dá)到35.6%；乙醇部位和乙酸乙酯部位的抗炎作用也較為明顯；石油醚部位抗炎效果不明顯。與空白對照組比較，正丁醇部位各劑量組對二甲苯所致的耳廓腫脹均有顯著的抑制作用(P<0.01)，且存在一定的量效關(guān)系。飛天蜈蚣七各極性部位對角叉菜膠致小鼠足腫脹均有一定的抑制作用，正丁醇部位抑制作用最顯著，而石油醚部位幾乎沒有抗炎作用。其中當(dāng)給藥劑量為4g/kg時(shí)，正丁醇部位的作用最強(qiáng)，達(dá)到57.3%，乙醇部位次之，為50.1%，乙酸乙酯部位也有一定抗炎作用(37%)，與空白對照組相比，顯著抑制小鼠足趾腫脹程度(P<0.05)，且呈現(xiàn)量依賴性。見表1。

表1　對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠所致小鼠足趾腫脹的影響(n=10)

3.2鎮(zhèn)痛活性從表2可見，熱板試驗(yàn)表明飛天蜈蚣七不同極性部位提取物對醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)均有一定的抑制作用，而正丁醇部位抑制作用最強(qiáng)，高劑量組扭體反應(yīng)抑制率達(dá)到60.1%，阿司匹林組為79.1%；正丁醇部位各劑量組與空白對照組相比，扭體次數(shù)顯著減小(P<0.05)，且有一定的量效關(guān)系；乙醇部位和乙酸乙酯部位對小鼠扭體也有一定的抑制，但不如正丁醇部位，而石油醚部位作用并不明顯。從表2可見，飛天蜈蚣七正丁醇部位提取物能顯著減少醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)，有明顯的鎮(zhèn)痛作用。正丁醇部位高劑量組對痛閾的提高率最大，達(dá)到62.9%，接近于陽性對照組阿司匹林(66.9%)的鎮(zhèn)痛效果；而且乙醇部位和乙酸乙酯部位的高劑量組對痛閾的提高率分別達(dá)到53.5%和44.2%，而石油醚部位對小鼠痛閾沒有明顯影響。

表2　對扭體法和熱板法小鼠疼痛的影響(n=10)

3.3抗疲勞能力由表3可知，正丁醇部位和乙酸乙酯部位高劑量組小鼠游泳時(shí)間有一定延長，明顯低于陽性對照組；而其他給藥組均沒有明顯延長小鼠力竭游泳時(shí)間。飛天蜈蚣七正丁醇部位具有一定的抗疲勞作用，但抗疲勞能力不強(qiáng)。

3.4耐缺氧能力如表3所示，十全大補(bǔ)丸組能顯著延長小鼠存活時(shí)間(P<0.05)，延長率可達(dá)到31.7%。而其它給藥組對小鼠常壓耐缺氧能力均沒有顯著影響，正丁醇部位的延長率能達(dá)到9.2%，存活時(shí)間延長率不高，且規(guī)律性不強(qiáng)。表明飛天蜈蚣七不同極性部位提取物不能提高小鼠的耐缺氧能力。

表3　抗疲勞和耐缺氧能力考察結(jié)果(n=10)

4結(jié)論本研究結(jié)果表明，飛天蜈蚣七不同極性部位提取物均有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞的療效，其中正丁醇部位的活性最強(qiáng)，接近于陽性對照組的效能，與空白對照組相比，具有顯著性差異(P<0.05)，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性；而對小鼠常壓耐缺氧能力均沒有顯著影響，存活時(shí)間延長率不高，且規(guī)律性不強(qiáng)。

飛天蜈蚣七根皮中富含的楤木皂苷A、銀蓮花苷、楤木皂苷D、竹節(jié)人參皂苷Ib等，均屬于三萜皂苷類化合物，而三萜皂苷類化合物具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、殺菌、降膽固醇等功效。由于正丁醇部位富含三萜皂苷成分，故推測飛天蜈蚣七正丁醇部位的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞的活性與三萜皂苷成分密切相關(guān)。此外，飛天蜈蚣七藥材先經(jīng)過乙醇提取，其中含有包括三萜皂苷、膽堿、揮發(fā)油等在內(nèi)的大量有機(jī)成分，因此也表現(xiàn)出一定的抗炎鎮(zhèn)痛活性，但活性不如正丁醇部位。本研究僅對飛天蜈蚣七不同部位提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞等的活性進(jìn)行了研究，而對正丁醇部位的化學(xué)成分并未進(jìn)行詳細(xì)研究，接下來本課題組也將對飛天蜈蚣七正丁醇部位進(jìn)行提取分離，從而得到飛天蜈蚣七的三萜皂苷類化學(xué)成分，進(jìn)而確定飛天蜈蚣七生物活性的有效成分。有研究表明，當(dāng)機(jī)體組織發(fā)生炎癥后，組織細(xì)胞會生成并釋放多種炎癥介質(zhì)，比如白細(xì)胞介素-1，腫瘤壞死因子，前列腺素2、組胺等，從而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)；鎮(zhèn)痛作用包括中樞鎮(zhèn)痛作用和外周鎮(zhèn)痛作用，外周鎮(zhèn)痛作用與炎癥因子密切相關(guān)；抗疲勞作用主要通過提高體內(nèi)抗氧化酶SOD的水平，加強(qiáng)機(jī)體清除自由基、抗氧化作用，從而達(dá)到抗疲勞效果。本研究結(jié)果顯示飛天蜈蚣七正丁醇部位有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞的療效，而關(guān)于該部位抗炎、鎮(zhèn)痛及抗疲勞活性的作用機(jī)理尚需進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，飛天蜈蚣七不同極性部位提取物均有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞的療效，其中正丁醇部位的活性最強(qiáng)，乙醇部位次之，石油醚部位活性不明顯,而對小鼠常壓耐缺氧能力并沒有顯著影響。說明飛天蜈蚣七正丁醇部位是其活性有效部位，而對正丁醇部位化學(xué)成分并未進(jìn)行詳細(xì)研究，本課題組也將進(jìn)一步對飛天蜈蚣七正丁醇部位進(jìn)行提取分離，以期確定飛天蜈蚣七生物活性的有效成分，從而深入研究其抗炎、鎮(zhèn)痛和抗疲勞的作用機(jī)理，為飛天蜈蚣七藥材質(zhì)量控制、臨床合理用藥和綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1977:2440.

[2]宋小妹,王薇.太白七藥[M].上海:上海科技出版社,2012:30-31.

[3]崔大江,王志勇,聶丹麗,等.飛天蜈蚣七對大鼠肝纖維化醛固酮的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2003, 13(3):160-162.

[4]崔大江,郅敏,聶丹麗.飛天蜈蚣七對實(shí)驗(yàn)性肝纖維化大鼠胰島β細(xì)胞功能的影響[J].河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào), 2004, 27(1):21-23.

[5]陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1994:70.

[6]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:882.

(收稿2016-04-21；修回2016-05-30)

Comparative studies on pharmacodynamics effects of different extracts from Aralia Chinensis L

Department of Pharmacy, The Shaanxi Province Hospital of Traditional

Chinese Medicine (Xi’an 710002)Yang Qinyan Li Bo

Chinese materia medica preparationAnimal experimentation @ Aralia Chinensis L.

R258.6

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.073