野生和人工培育陜重樓對荷瘤小鼠實(shí)體瘤及免疫因子的影響*

宋延平　許建秦　張宇晨　王　磊　趙林濤

陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

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野生和人工培育陜重樓對荷瘤小鼠實(shí)體瘤及免疫因子的影響*

宋延平許建秦▲張宇晨△王磊△趙林濤

陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

目的: 探討野生和人工培育陜產(chǎn)重樓的抑瘤及免疫作用。方法: 采用小鼠移植瘤模型,觀察野生和人工培育陜重樓水提液灌胃14d對小鼠H22實(shí)體瘤瘤重及血清中IL-2、TNF-a、NK的活性的影響。結(jié)果:野生陜重樓及人工培育陜重樓2.46、1.23、0.615g/kg劑量對小鼠H22實(shí)體瘤均表現(xiàn)出明顯抑瘤作用，2.46、1.23g/kg劑量使血清中NK含量明顯提高，野生陜重樓2.46、1.23g/kg明顯提高荷瘤小鼠血清TNF-α含量。結(jié)論: 野生和人工培育陜重樓對小鼠H22實(shí)體瘤均有明顯抑制作用、可明顯提高NK含量，提高血清中TNF-α含量。

主題詞重樓實(shí)驗(yàn)，動物免疫因子@實(shí)體瘤

重樓具有很高的藥用價(jià)值，最早以蚤休之名載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚作用，用于疔腫癰腫，咽喉腫痛，跌撲傷痛，驚風(fēng)抽搐[1]。陜產(chǎn)重樓主要是百合科植物七葉一枝花 Paris polyphylla Smith var.chinensis (Franch.) Hara 的干燥根莖，又名燈臺七，分布于秦嶺、太白山等地區(qū)[2]。目前，陜西藥市上供應(yīng)的基本為野生重樓，但野生重樓繁殖率低，兩年發(fā)育一次，生長速度緩慢，加之過分采挖，野生重樓供不應(yīng)求[3]。近來我們培育了一些人工陜重樓，但培育出的人工陜重樓藥用價(jià)值如何，并沒有經(jīng)過藥效研究，本文就野生和人工培育陜重樓的抗腫瘤及免疫作用進(jìn)行了初步的研究。

1材料1.1動物KM小鼠，由西安交大及第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，雌雄兼用，合格證號：No.6100170000538、No.0015413、No.0015425。小鼠H22細(xì)胞株，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心引進(jìn)。

1.2儀器注射用環(huán)磷酰胺(山西普德藥業(yè)股份有限公司)；普通光學(xué)顯微鏡( 日本olympus公司)；SW-CJ-2D型雙人凈化工作臺(蘇州凈化設(shè)備有限公司)。ELISA酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒(南京建成生物科技有限公司)。

1.3試藥野生重樓(七葉一枝花)購自西安市藥材市場，人工培育陜重樓由陜西省寶雞市太白縣塘口村藥材培育基地提供，均由陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室王繼濤高級實(shí)驗(yàn)師鑒定,均制成1g/ml水提液。藥典規(guī)定重樓人用量為3～9g，平均用量為6g，按人和小鼠的體表面積換算成小鼠的劑量1.23g/kg，即為小鼠所用的中劑量，則大劑量與小劑量分別為2.46g/kg、0.615g/kg。

2方法按文獻(xiàn)[4-6]方法，取小鼠90×3只，每批實(shí)驗(yàn)單一性別，隨機(jī)分為8組，分別為荷瘤對照組20只、環(huán)磷酰胺組10只(30mg/kg ip)、野生陜重樓2.46、1.23、0.615g/kg劑量組各10只(ig)和人工培育陜重樓2.46、1.23、0.615g/kg劑量組各10只。將瘤株復(fù)蘇，接種，選取接種7～10d的健康瘤源小鼠，斷頸處死，制備瘤細(xì)胞懸液(1×107/ml)，以上均無菌操作。每只小鼠右前肢腋窩皮下接種0.2ml瘤細(xì)胞懸液。次日給藥，除環(huán)磷酰胺隔天給藥外，其他各組每天給藥1次，連續(xù)給藥14d。末次給藥后次日，小鼠麻醉后按眼球摘除法取血，離心取上清，用酶聯(lián)免疫測定法(ELISA試劑盒操作)測定血清中IL-2、TNF-a、NK的活性。處死小鼠，剖取瘤塊稱重，計(jì)算抑瘤率。抑瘤率=(對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每次實(shí)驗(yàn)檢測一項(xiàng)免疫指標(biāo)。

3結(jié)果與對照組比較，野生及人工陜重樓2.46、1.23、0.615g/kg劑量均能明顯減小瘤體的重量(P<0.01)，野生的平均抑瘤率分別為48.57%、43.88%、31.82%；人工的平均抑瘤率分別為51.53%、46.20%、34.88%。環(huán)磷酰胺與對照組比較IL-2、TNF-α、NK含量均明顯下降(P<0.01或P<0.05)；野生及人工陜重樓與對照組比較小鼠血清中IL-2含量無明顯變化；野生陜重樓2.46、1.23g/kg與對照組比較血清中TNF-α含量明顯增加(P<0.01或P<0.05)；野生及人工陜重樓2.46、1.23g/kg與對照組比較均能明顯提高血清中NK含量(P<0.01或P<0.05)。同劑量野生及人工陜重樓抑瘤作用及血清中IL-2、TNF-α、NK含量無明顯差異。提示野生與人工陜重樓均能明顯抑制H22小鼠瘤體的生長，均能明顯提高H22小鼠血清中NK活性，野生陜重樓尚能明顯提高血清中TNF-α含量。

表1　野生和人工培育陜重樓對小鼠H22實(shí)體瘤及免疫因子的影響

注：與荷瘤組比較，△P<0.05,▲P<0.01

4討論陜重樓的生長環(huán)境遭到破壞，植物繁殖率低，資源再生較慢，各產(chǎn)區(qū)藥材蘊(yùn)藏量普遍下降，部分品種已瀕臨滅絕。2016年3月4日，國務(wù)院辦公廳《關(guān)于促進(jìn)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的指導(dǎo)意見》中指出，要大力加強(qiáng)地道中藥材的種植，并制定相應(yīng)的種植培育標(biāo)準(zhǔn)，提高人工中藥材的質(zhì)量，對野生中藥材開展生態(tài)環(huán)境影響評估。 臨床上普遍認(rèn)為野生中藥材的臨床效果要好于人工培育品種，本研究也表明了這一點(diǎn)。雖然野生和人工培育陜重樓對H22小鼠實(shí)體瘤均具有明顯的抑制作用，對血清中NK含量均具有明顯提高作用，但野生陜重樓明顯提高H22小鼠血清中TNF-α含量，而人工培育陜重樓對血清中TNF-α含量無明顯提高。說明人工培育陜重樓和野生陜重樓的成分可能有一定的差異，有待于進(jìn)一步研究，也有待改進(jìn)人工栽培技術(shù)。關(guān)于野生和人工培育重樓的其他方面的藥效比較有待于進(jìn)一步研究。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015．

[2]張琳，顏永剛，鄧翀.陜西產(chǎn)重樓資源調(diào)查及品質(zhì)鑒定[J]．現(xiàn)代中醫(yī)藥，2013，33(4):93-95.

[3]張墁，李彥文，李志勇，等.重樓屬藥用植物的研究進(jìn)展[J].中央民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2011，20(4):65-68.

[4]吳先闖，杜剛軍，宋曉勇，等.玉米須多糖對環(huán)磷酰胺治療H22荷瘤小鼠機(jī)體損傷的減毒增效作用[J].中藥材，2014，37(10):1833-1836.

[5]楊柳青，張鳴，陳建婷，等.扶正抗癌方對H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其對IL-12和Survivin表達(dá)的影響[J]．陜西中醫(yī)，2015，36(5):634-636.

[6]方瑜，李仁廷，陳光偉．山仙顆粒對H22移植瘤小鼠TGF-α和端粒酶表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]．陜西中醫(yī)，2012，33(12):1681-1683.

(收稿2016-04-21；修回2016-06-12)

*陜西省中醫(yī)管理局中醫(yī)藥科研課題(JC17)

△陜西中醫(yī)藥大學(xué)(咸陽712046)

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.069