氣相色譜法測(cè)定辛芷滴鼻液中龍腦和異龍腦的含量

魏　莉，劉光斌肅州區(qū)疾病預(yù)防控制中心，甘肅 酒泉735000；2酒鋼醫(yī)院

氣相色譜法測(cè)定辛芷滴鼻液中龍腦和異龍腦的含量

魏莉1，劉光斌2△
1肅州區(qū)疾病預(yù)防控制中心，甘肅 酒泉735000；2酒鋼醫(yī)院

目的：建立辛芷滴鼻液中龍腦和異龍腦的含量測(cè)定方法。方法：采用氣相色譜法測(cè)定，DB-WAX色譜柱（30 m×0.53 mm，1.0μm），載氣為氮?dú)?，分流比?0∶1，柱溫為140℃，進(jìn)樣口溫度為180℃，檢測(cè)器溫度為200℃。結(jié)果：龍腦和異龍腦分別在17.6～282.0、11.8～188.4μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9、r=0.999 9，n=6）；平均加樣回收率分別為98.91%和99.45%（RSD為1.36%、1.53%，n=9）。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于辛芷滴鼻液的質(zhì)量控制。

辛芷滴鼻液；氣相色譜法；龍腦；異龍腦；含量測(cè)定

辛芷滴鼻液由辛夷、蒼耳子、白芷、冰片、薄荷腦等5味藥制成，具有祛風(fēng)解表、宣通鼻竅、清熱解毒和行氣通絡(luò)之功。對(duì)慢性鼻-鼻竇炎(Chronic rhinosinusitis，CRS)有良好的療效［1］。其中冰片中含有的龍腦和異龍腦，均有抗菌和顯著抑制大鼠蛋清性足跖腫脹作用；異龍腦對(duì)巴豆油耳廓腫脹亦有抑制作用，提示龍腦和異龍腦對(duì)液體的滲出和組織水腫等炎癥過程有抑制作用［2］。為更好保證制劑質(zhì)量，本研究采用氣相色譜法［3-4］測(cè)定辛芷滴鼻液中的龍腦和異龍腦的含量，效果滿意，現(xiàn)報(bào)道如下：

1　材料

1.1儀器6890型氣相色譜儀(美國安捷倫公司，配FID檢測(cè)器)；AUW120D型電子分析天平(日本島津)；WP-UP-YJ-30沃特浦實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)(四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司)；TG16-W臺(tái)式高速離心機(jī)(長沙維爾康湘鷹離心機(jī)有限公司)。

1.2試劑龍腦、異龍腦對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110881-200706、111512-200802，供含量測(cè)定用)；辛芷滴鼻液和陰性制劑(酒鋼醫(yī)院提供，批號(hào)：20150316、20150317、20150318)；試劑均為分析純；水為超純水。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：DB-WAX(柱長30m，內(nèi)徑0.53mm，膜厚度1μm)，柱溫：140℃；載氣流量(N2)：1.0mL/min(分流比：10∶1)；進(jìn)樣口溫度：180℃；檢測(cè)器溫度：200℃；進(jìn)樣量為1μL。

2.2內(nèi)標(biāo)溶液的制備取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1mL含4mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3對(duì)照品溶液的制備分別稱取干燥至恒重的龍腦和異龍腦對(duì)照品8mg、4mg，精密稱定，置10mL量瓶中，加環(huán)己烷使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3mL，置25mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1mL，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，制成每1mL含龍腦96μg和異龍腦48μg的混合對(duì)照品溶液。

2.4供試品溶液的制備精密吸取辛芷滴鼻液5mL，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入環(huán)己烷20mL，稱定重量，超聲處理10分鐘(功率320W，頻率40 kHz)，放冷，再稱定重量，用環(huán)己烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，冷凍離心10分鐘(4 000 r/min)，精密量取上清液10mL，置25mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1mL，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。

2.5陰性樣品的制備取辛芷滴鼻液陰性制劑，按“2.4”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.6系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)分別吸取陰性樣品溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液各1μL，注入氣相色譜儀。在“2.1”項(xiàng)色譜條件下，供試品中異龍腦和龍腦所對(duì)應(yīng)的峰保留時(shí)間與對(duì)照品峰保留時(shí)間一致(16.4、18.4分鐘)，而陰性樣品無干擾，各峰與鄰近峰達(dá)到基線分離，分離度良好(R＞1.5)，見圖1。

圖1　對(duì)照品、供試品及陰性樣品色譜圖

2.7線性范圍分別稱取干燥至恒重的龍腦和異龍腦對(duì)照品7.05、4.71mg，精密稱定，置10mL容量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液。精密吸取對(duì)照品貯備溶液4.0、2.0、1.5、1.0、0.5、0.25mL，分別置10mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1mL(濃度為4.012mg/mL)，加環(huán)己烷至刻度，搖勻。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各1μL，依次注入氣相色譜儀中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以對(duì)照品濃度與內(nèi)標(biāo)溶液濃度之比(X)為橫坐標(biāo)，對(duì)照品峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比(Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得出龍腦回歸方程為：Y=3.126 5X+0.012 4，r=0.999 9(n=6)，異龍腦回歸方程為：Y=2.871 5X-0.010 6，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，龍腦和異龍腦分別在17.6～282.0μg/mL 和11.8～188.4μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.8精密度實(shí)驗(yàn)同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，1μL/次。測(cè)得龍腦和異龍腦含量的RSD分別為0.67%、1.05%，表明該方法精密度良好。

2.9穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)同一供試品溶液，分別于0、3、6、9、12、18、24小時(shí)各進(jìn)樣1μL，測(cè)得龍腦和異龍腦含量的RSD分別為1.02%、1.45%，表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.10重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)辛芷滴鼻液(批號(hào)：20150316)6份，分別按“2.4”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備；精密吸取上述溶液各1μL，注入氣相色譜儀，依法測(cè)定；測(cè)得供試品中龍腦含量平均值為3.54 mg/mL (RSD=0.66%)，異龍腦含量平均值為2.34mg/mL(RSD=1.12%)，結(jié)果表明該方法的重復(fù)性較好。

2.11準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)以加樣回收率考察準(zhǔn)確度。精密量取已知含量的辛芷滴鼻液(批號(hào)：20150316)9份，每份2mL，分別置于50mL具塞錐形瓶中，分為3組，每組3份。精密量取“2.7”項(xiàng)下對(duì)照品貯備溶液8.0、10.0、12.0mL各3份，用氮?dú)獯蹈蓛x吹干后分別加入上述3組辛芷滴鼻液樣品中，使得低、中、高濃度對(duì)照品加入量與所取供試品待測(cè)定成分量之比控制在0.8∶1，1∶1，1.2∶1左右［5］，按“2.4”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法操作測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1—2。

表1　龍腦加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2　異龍腦加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.12樣品測(cè)定取3批辛芷滴鼻液(批號(hào)：20150316、20150317、20150318)，按上述含量測(cè)定方法測(cè)定龍腦和異龍腦含量，結(jié)果見表3。

表3　樣品的含量測(cè)定結(jié)果　m g/m L

3　討論

3.1提取方法的選擇由于本品為脂溶性基質(zhì)，無水乙醇不能將基質(zhì)分散，導(dǎo)致測(cè)定成分無法溶解出，故在無水乙醇溶液中未能檢測(cè)出龍腦和異龍腦。在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)對(duì)提取溶劑環(huán)己烷和乙酸乙酯進(jìn)行了對(duì)比，發(fā)現(xiàn)環(huán)己烷的提取效果明顯優(yōu)于乙酸乙酯，故選擇環(huán)己烷作為提取溶劑。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，超聲處理后，若采用濾過的方式，則由于基質(zhì)附在濾紙上導(dǎo)致速度極慢。鑒于龍腦和異龍腦的揮發(fā)性，故采用冷凍離心的方式比較方便。

3.2色譜柱及進(jìn)樣量的選擇考察了極性柱(DB-WAX)的不同固定液膜厚度、不同內(nèi)徑與弱極性柱(DB-17)對(duì)樣品測(cè)定的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)弱極性柱(DB-17)在相同柱溫條件下色譜峰分離效果欠佳，而極性柱(DB-WAX)的色譜峰峰形良好，分離也能達(dá)到要求。故選擇極性柱DB-WAX(30m×0.53mm，1.0μm)作為測(cè)定用色譜柱。由于本品為油性基質(zhì)，過多注入氣相色譜儀會(huì)造成儀器的污染，故選擇進(jìn)樣量為1μL，分流比為10∶1。

3.3內(nèi)標(biāo)物的選擇水楊酸甲酯和萘兩種內(nèi)標(biāo)物對(duì)樣品中龍腦和異龍腦峰均無干擾，但考慮到萘具有致畸、致癌、致突變作用，故選用水楊酸甲酯作為內(nèi)標(biāo)物。

本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)冰片中2種主要成分進(jìn)行了分析，結(jié)果表明本方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可作為辛芷滴鼻液的質(zhì)量控制方法。

［1］ 王萍，劉光斌，代得銀.辛芷滴鼻液對(duì)慢性鼻-鼻竇炎患者的療效觀察［J］.航空航天醫(yī)學(xué)雜志，2015，26（3）：267-269.

［2］ 江光池，楊勝華，馮旭軍.龍腦和異龍腦的抗炎作用［J］.華西藥學(xué)雜志，1990，5（3）：190-191.

［3］ 劉莉莉，秦建平，楊素德，等.GC法測(cè)定痛寧凝膠中冰片和薄荷腦的含量［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，45（1）：76-78.

［4］ 朱靜，賈曉斌，鄭智音，等.氣相色譜法測(cè)定透骨靈橡膠膏中樟腦、冰片和薄荷腦的含量［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32（11）：831-833.

［5］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：四部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：375-376.

Determ ination ofBorneoland Isoborneol in XinZhi NasalD ropsby GasChrom atography

WEILi1，LIU Guangbin2△
1 Suzhou District Center for Disease Control and Prevention，Jiuquan 735000，China；2 Jiugang Hospital

Objective：To establish content determ ination method of borneol and isoborneol in XinZhi nasal drops.Methods：Gas chromatography was adopted to detectDB-WAX chromatographic column （30m×0.53mm，1.0μm），carrier gaswas nitrogen，split ratio 10：1，column temperature 140℃，inlet temperature 180℃and detector temperature 200℃.Results：Borneoland isoborneolshowed better linear relationship in the rangesbetween 17.6 and 282.0，11.8 and 188.4μg/m L（r=0.999 9，r=0.999 9，n=6）；average recovery rateswere 98.91%and 99.45%respectively（RSD=1.36%，1.53%，n=9）.Conclusion：Themethod，simple，accurate，high sensitivity and good reproducible，could be used forquality controlof XinZhi nasaldrops.

XinZhi nasaldrops；gaschromatography；borneol；isoborneol；contentdeterm ination

R284.1

A

1004-6852（2016）07-0031-03

2016-02-28

魏莉（1973—），女，主管藥師。研究方向：醫(yī)院制劑。

劉光斌（1970—），男，主任藥師。研究方向：醫(yī)院制劑。