大血藤對(duì)慢性盆腔炎模型大鼠血清IL-6、TNF-α及子宮病理組織形態(tài)學(xué)的影響*

劉　清，鄧　翀，黃淑鳳，孟建國(guó)，衛(wèi)　昊陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西　咸陽(yáng)712046

大血藤對(duì)慢性盆腔炎模型大鼠血清IL-6、TNF-α及子宮病理組織形態(tài)學(xué)的影響*

劉清，鄧翀△，黃淑鳳，孟建國(guó)，衛(wèi)昊
陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西咸陽(yáng)712046

目的：探討大血藤對(duì)慢性盆腔炎模型大鼠血清IL-6和TNF-α及子宮病理形態(tài)學(xué)的影響。方法：采用苯酚膠漿法建立大鼠慢性盆腔炎模型，以血清中IL-6和TNF-α含量、子宮腫脹程度及病理組織形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)為考察指標(biāo)，考察大血藤對(duì)盆腔炎大鼠的影響。結(jié)果：與模型組比較，大血藤各劑量組大鼠血清中IL-6、TNF-α含量均不同程度降低，子宮內(nèi)膜病理組織形態(tài)學(xué)較模型組顯著改善，子宮腫脹呈現(xiàn)減輕趨勢(shì)。結(jié)論：大血藤通過(guò)抑制炎癥相關(guān)反應(yīng)，發(fā)揮對(duì)盆腔炎的治療作用。

慢性盆腔炎；IL-6；TNF-α；病理組織形態(tài)學(xué)；大血藤

大血藤為木通科植物大血藤Sargentodoxa cuneata(Ol iv.)Rehd.et Wi ls.的干燥藤莖。具有清熱解毒、活血、祛風(fēng)之功效。用于腸癰腹痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，風(fēng)濕痹痛，跌撲腫痛［1］。近代研究發(fā)現(xiàn)［2-4］，大血藤常以復(fù)方(如紅藤湯、紅藤敗醬湯等)煎劑內(nèi)服或灌腸等應(yīng)用于盆腔炎等的治療［2-4］。本研究按照中醫(yī)血瘀證思路建立慢性盆腔炎模型，以大鼠血清中IL-6和TNF-α含量變化及子宮宮腔組織形態(tài)學(xué)變化等為指標(biāo)研究大血藤單味藥對(duì)慢性盆腔炎模型的作用。

1　材料與方法

1.1藥物大血藤購(gòu)于西安市萬(wàn)壽路藥材市場(chǎng)，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)高級(jí)實(shí)驗(yàn)師王繼濤鑒定為木通科植物大血藤的藤莖。稱取大血藤藥材飲片1 kg，10倍量水提取3次，2 h/次，濃縮干燥，粉碎稱重，收膏率為19.325%，臨用時(shí)用0.5%CMC-Na配制成混懸液。婦科千金片(株洲千金藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：201011046)。

1.2動(dòng)物雌性SD大鼠7 2只，體質(zhì)量(2 0 0±2 0)g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(陜)2007-001。

1.3試劑PGI 2試劑盒(批號(hào)LOT：201 11 00 2B)；TXA2試劑盒(批號(hào)LOT：20111002B)；IL-6試劑盒(批號(hào)LOT：20111002B)；TNF-α(批號(hào)LOT：20111002B)，均購(gòu)于長(zhǎng)春江力生物技術(shù)有限公司。

1.4儀器BT 2 2 4 S型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；ELX808-IU型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(美國(guó)Bio Tek儀器公司)。

1.5方法

1.5.1苯酚膠漿的配制量取液化苯酚5 m L，西黃芪膠1 g，甘油4mL，加蒸餾水至20mL，配制成25%的苯酚膠漿。

1.5.2方法［5］取雌性大鼠7 2只，隨機(jī)抽取1 2只作為假手術(shù)組。所有大鼠采用10%烏拉坦(0.01 mL/g)腹腔注射麻醉后固定，下腹部手術(shù)部位被毛并常規(guī)消毒，沿腹中線于尿道口上方1 cm處向上切口約0.8～1.0 cm，暴露左側(cè)子宮，假手術(shù)組不做任何處理，關(guān)腹，其余各組于距離卵巢2 cm處用帶有倒刺的5號(hào)針頭以相同力量機(jī)械劃傷子宮5次后，向卵巢方向緩慢注入苯酚膠漿0.05mL，另一側(cè)子宮不注射作為自身對(duì)照。分層縫合關(guān)閉腹腔，恢復(fù)飲水，正常清潔飼養(yǎng)。造模10天后將模型動(dòng)物隨機(jī)分為5組各12只：模型組、大血藤大劑量組(8 g生藥/kg)、中劑量組(4 g生藥/kg)、小劑量組(2g生藥/kg)和婦科千金片組(1.13g/kg)。按10mL/(kg·d)藥量灌胃，假手術(shù)組和模型組給予等量純凈水，連續(xù)灌胃給藥21天。于處理前1天將動(dòng)物禁食不禁水12小時(shí)，動(dòng)物按上述方法麻醉后，負(fù)壓管(抗凝管與促凝管)腹主動(dòng)脈各取血3～4mL，3 000轉(zhuǎn)離心10分鐘分離血漿、血清后置-80℃冰箱保存待測(cè)。摘取雙側(cè)子宮，除去脂肪組織后用分析天平稱重記錄，子宮左右兩側(cè)的重量差即為炎癥腫脹程度，計(jì)算腫脹率和抑制率。子宮放入10%甲醛固定，HE染色顯微鏡下觀察大鼠子宮組織形態(tài)學(xué)變化。按照試劑盒說(shuō)明書操作，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)定血清中TNF-α、IL-6的濃度。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS 2 0.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以(±s)表示，采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1 對(duì)模型大鼠子宮腫脹程度的影響與假手術(shù)組比較，模型組子宮腫脹度和腫脹率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說(shuō)明盆腔炎模型成功。大血藤各劑量組均有減輕子宮腫脹的趨勢(shì)，其中大血藤高、中、低劑量組子宮腫脹度及腫脹率與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

2.2對(duì)模型大鼠血清IL-6和TNF-α的影響模型組與假手術(shù)組比較，苯酚膠漿注射子宮31天后大鼠血清中IL-6、TNF-α均上升，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，表明盆腔炎模型造模成功。治療21天后與模型組比較，大血藤各劑量組及婦科千金片組大鼠血清中IL-6含量均不同程度降低。大血藤高、中劑量組IL-6含量接近假手術(shù)組，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組比較，婦科千金片組、大血藤各劑量組大鼠血清中TNF-α含量均降低，大血藤高、中劑量組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表1　大血藤對(duì)苯酚膠漿致慢性盆腔炎模型大鼠子宮腫脹程度的影響?χ±s）

表2　大血藤對(duì)苯酚膠漿致慢性盆腔炎模型I L-6和TNF-α的影響?±s）

2.3各組大鼠子宮宮腔組織的病理形態(tài)學(xué)變化［6-7］肉眼觀察模型組，可見子宮組織與腹腔其他組織粘連，部分宮腔變窄、組織積液，毛細(xì)血管變粗，充血嚴(yán)重。其他各組粘連較少，子宮形態(tài)正常。子宮組織HE染色后，光鏡觀察，假手術(shù)組子宮內(nèi)膜腔壁結(jié)構(gòu)清晰，無(wú)充血水腫與壞死脫落，偶見輕度增生，肌纖維紋理清晰可見。模型組子宮內(nèi)膜腔壁結(jié)構(gòu)改變，內(nèi)膜充血水腫，肌層與豁膜肌層結(jié)構(gòu)紊亂；有大量或?qū)訝钚匝仔约?xì)胞浸潤(rùn)，纖維組織增生；上皮細(xì)胞變性壞死，腺體萎縮變形。提示苯酚膠漿致慢性盆腔炎模型成功。大血藤各劑量組內(nèi)膜組織結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常排序，上皮輕度增生、增厚，肌層、漿膜完整界清；炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，內(nèi)膜無(wú)明顯充血水腫；大部分腺體恢復(fù)。表明大血藤能夠有效改善慢性盆腔炎大鼠子宮內(nèi)膜組織形態(tài)學(xué)的病理狀態(tài)，見附圖1。

3　討論

苯酚膠漿注入大鼠子宮制造慢性盆腔炎模型，造成大鼠子宮內(nèi)膜充血、水腫、炎癥滲出，粘連。病理檢查顯示，模型動(dòng)物的子宮發(fā)生了充血、炎癥浸潤(rùn)、黏膜層水腫、腺體破壞減少等變化，說(shuō)明模型成功。

細(xì)胞因子IL-6是單核細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的重要炎癥介質(zhì)之一，IL-6主要誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，能促進(jìn)淋巴細(xì)胞分化，催化和放大炎癥性反應(yīng)和毒性作用，造成組織細(xì)胞的損害，其雖無(wú)疾病的特異性，但能直接反映各種類型損害的嚴(yán)重程度，IL-6的過(guò)量產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致劇烈的免疫反應(yīng)，對(duì)機(jī)體造成損害［8-9］。TNF-α是誘導(dǎo)天然免疫和特異性免疫的重要介質(zhì)，又是特異性免疫和炎癥反應(yīng)間聯(lián)系的重要因子，并由激活的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生［10］。TNF-α過(guò)度表達(dá)可誘發(fā)炎性反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清中IL-6、TNF-α濃度均升高，初步證實(shí)大血藤可通過(guò)降低血清IL-6、TNF-α水平，抑制炎癥介質(zhì)和炎癥因子的表達(dá)，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，為治療慢性盆腔炎免疫機(jī)制之一，而更多的免疫調(diào)控環(huán)節(jié)有待進(jìn)一步探究。

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In fluence of DaXueTeng on PathologicalM orphology，IL-6 and TNF-α of the Ratsw ith Chronic Pelvic In flamm atory D isease

LIU Qing，DENG Chong△，HUANG Shufeng，MENG Jianguo，WEIHao
ShaanxiUniversity of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China

Objective：To discuss the influence of DaXueTeng［Sargentodoxa cuneata（Oliv.）Rehd.etWils.］on uterine pathomorphology，the levels of IL-6 and TNF-αof the rats w ith chronic pelvic inflammatory disease （PID）.Methods：Ratmodel w ith chronic PID was established by adopting phenol method，and the effects of DaXueTeng on the ratsw ith PID were surveyed by observing the indexes of the contents of IL-6 and TNF-α，uterine swelling degrees and pathomorphology.Results：Compared w ith themodel group，the contents of IL-6 and TNF-α decreased in different degrees in the rats of different doses groups of DaXueTeng，pathologicalmorphology of endometria improved compared w ith themodel group，uterine swelling relieved.Conclusion：DaXueTeng could treat PID by inhibiting inflammation-related reactions.

chronic pelvic inflammatory disease；IL-6；TNF-α；pathomorphology；DaXueTeng

附圖1　各組盆腔炎模型大鼠HE染色子宮的病理變化（4 0 0×）

R711.33

A

1004-6852（2016）07-0011-04

2015-06-23

陜西省教育廳專項(xiàng)科研計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)09JK389）。

劉清（1982—），女，碩士學(xué)位，實(shí)驗(yàn)師。研究方向：中藥抗炎與免疫調(diào)節(jié)研究。

鄧翀（1978—），男，博士學(xué)位，副教授。研究方向：中藥炮制化學(xué)及中藥炮制原理研究。