分光光度計(jì)法定量測(cè)定生乳中糊精的方法討論

文/徐　萍　魯　莉

﹝1農(nóng)業(yè)部乳品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（哈爾濱）；2青島市疾病預(yù)防控制中心﹞

分光光度計(jì)法定量測(cè)定生乳中糊精的方法討論

文/徐萍1魯莉2

﹝1農(nóng)業(yè)部乳品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（哈爾濱）；2青島市疾病預(yù)防控制中心﹞

生乳經(jīng)過(guò)處理除去蛋白質(zhì)、脂肪和可溶性糖后，用苯酚-硫酸溶液與提取出的糊精反應(yīng)生成有色絡(luò)合物，其顏色深淺與溶液中糊精的含量成正比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線可間接求出生乳中糊精含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法靈敏度高，精密度好，重復(fù)性試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.007，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.88%，對(duì)生乳摻假糊精的檢測(cè)和監(jiān)督具有指導(dǎo)性意義。

生乳；糊精；定量測(cè)定

糊精是淀粉的水解產(chǎn)物，呈白色或黃色，固體，有固定的分子式［（C6H12O5）·2H2O］，但是碳鏈長(zhǎng)短不一定相同，稍溶于冷水，易溶于熱水，不溶于乙醚和乙醇，是葡萄糖向淀粉轉(zhuǎn)化的中間產(chǎn)物。有些奶農(nóng)為了提高生乳中的固形物含量，將價(jià)格低廉的糊精摻入生乳中，從中獲利。

1材料與方法

1.1原理

樣品除去蛋白質(zhì)后，用體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇溶液除去可溶性糖，隨后苯酚-硫酸溶液與提取出的糊精反應(yīng)生成有色絡(luò)合物，并且其顏色強(qiáng)度與溶液中糊精的含量成正比，通過(guò)以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)參照物繪制的工作曲線來(lái)計(jì)算樣品中糊精的含量。

1.2試劑和材料

乙酸鋅溶液（219 g/L）：稱取219 g乙酸鋅［Zn（CH3COO）2·2H2O］，加入30 mL冰乙酸，然后加水溶解并稀釋至1 000 mL；

亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）：稱取106 g的亞鐵氰化鉀［K4Fe （CN）6·3H2O］，加水溶解并稀釋至1 000 mL；

苯酚溶液（800 g/L）：稱取精制苯酚80 g，加水溶解并稀釋至100 mL，混勻，貯存于棕色玻璃瓶中，置冰箱中可保存1 個(gè)月；

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（0.5 mg/mL）：準(zhǔn)確稱取0.5000 g經(jīng)98～100 ℃干燥至恒重的純葡萄糖，加水溶解后加入5 mL鹽酸，然后加水稀釋并定容至1 000 mL；

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.1 mg/mL）：精確吸取10 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，加水稀釋并定容至50 mL；

硫酸溶液（100 mL/L）：準(zhǔn)確量取濃硫酸（比重為1.84）100 mL，緩慢加入到一定量的水中，待冷卻后加水稀釋至1 000 mL；

1.3儀器和設(shè)備

天平；離心機(jī)；旋轉(zhuǎn)混勻器；水浴鍋；分光光度計(jì)。

1.4分析步驟

1.4.1樣品預(yù)處理

稱量20 g樣品于250 mL容量瓶中，加入10 mL乙酸鋅溶液和10 mL亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，混勻，靜置，用干燥濾紙過(guò)濾，棄去初濾液，濾液備用。

1.4.2糊精的沉淀及處理

吸取上述溶液7.5 mL，置于50 mL離心管中，加入無(wú)水乙醇42.5 mL，邊加邊振搖，靜置，8 000 r/min離心10 min，棄去上清液。殘?jiān)皿w積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇溶液15 mL洗滌，隨后離心，棄去上清液，重復(fù)3 次此操作，最后殘?jiān)?00 mL/L硫酸溶液20 mL溶解，并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，此溶液為試樣待測(cè)液，備用。

1.4.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mL分別置于25 mL試管中，準(zhǔn)確補(bǔ)充水至2.00 mL，加入800 g/L苯酚溶液0.05 mL，旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，然后小心加入濃硫酸5.0 mL，于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置于沸水浴中煮沸5 min，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在485.0 nm波長(zhǎng)處，以試劑空白溶液為參比，1 cm比色皿測(cè)定吸光度值。

1.4.4試樣中糊精質(zhì)量濃度的測(cè)定

準(zhǔn)確移取試樣測(cè)定液2.0 mL置于25 mL試管中，加入800 g/L苯酚溶液0.05 mL，旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸5.0 mL，于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置于沸水浴中煮沸5 min，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在485.0 nm波長(zhǎng)處，以試劑空白溶液為參比，1 cm比色皿測(cè)定吸光度值。利用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和計(jì)算公式，計(jì)算試樣中糊精的質(zhì)量濃度。

1.4.5方法的重復(fù)性測(cè)定

將糊精濃度為0.25 g/100 g的生乳樣品由同一操作者使用相同的方法和設(shè)備，在短時(shí)間內(nèi)重復(fù)測(cè)定糊精濃度。

1.5結(jié)果計(jì)算公式

式中：

0.9——葡萄糖折算成糊精的換算系數(shù)。

2　結(jié)果

表1　不同質(zhì)量葡萄糖的吸光度值

2.1標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的建立

不同質(zhì)量的葡萄糖對(duì)應(yīng)的吸光度值見(jiàn)表1。以葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），線性方程為：C=0.0615（A）+0.0031，R2=0.9967，線性關(guān)系良好。

2.2重復(fù)性試驗(yàn)

重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。由表2可知，重復(fù)測(cè)定5 次，結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.007，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.88%，說(shuō)明該方法精密度良好。

表2　重復(fù)性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

圖1　標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

3　方法討論與注意事項(xiàng)

本方法靈敏度高，重復(fù)性條件下的精密度好，填補(bǔ)了目前大部分檢測(cè)糊精標(biāo)準(zhǔn)只能定性測(cè)定，而不能準(zhǔn)確檢測(cè)出糊精含量的空缺。對(duì)于生乳中摻假糊精的檢測(cè)和監(jiān)督具有指導(dǎo)性和突破性的意義。

用本方法測(cè)定生乳中糊精含量時(shí)，若試液中糊精的質(zhì)量濃度超出或低于標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的濃度，應(yīng)把試液進(jìn)行適當(dāng)稀釋或濃縮，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性；而且由于濃硫酸的腐蝕性較高，因此在加入濃硫酸時(shí)，一定要加倍小心，以免灼傷。

［1］ GB/T 20884-2007 麥芽糊精.

［2］ QB 1613-92 食品添加劑.

［3］ 王丹慧，王春苗，李梅，等. 原料乳及乳粉中糊精摻假的檢測(cè)方法. 中國(guó)乳品工業(yè)，2008，36（4）：62-64.

徐萍（1976-），本科，食品檢驗(yàn)高級(jí)工程師，從事食品及農(nóng)產(chǎn)品的檢驗(yàn)與研究工作。

劉振邦教授追思&學(xué)術(shù)思想理論研討會(huì)在京召開(kāi)

【本刊訊】（記者 祝文琪）2016年7月13日，由農(nóng)業(yè)部原常務(wù)副部長(zhǎng)，中國(guó)奶業(yè)協(xié)會(huì)名譽(yù)會(huì)長(zhǎng)劉成果倡導(dǎo)提議的“劉振邦教授追思&學(xué)術(shù)思想理論研討會(huì)”在京召開(kāi)。劉振邦教授是我國(guó)著名農(nóng)業(yè)專家，中國(guó)社會(huì)科學(xué)院世界經(jīng)濟(jì)與政治研究所研究員，博士生導(dǎo)師，享受國(guó)務(wù)院政府特殊津貼。他一生潛心研究世界農(nóng)業(yè)的發(fā)展，在改革開(kāi)放前夕大膽地提出中國(guó)要大力發(fā)展畜牧業(yè)，特別是草食畜牧業(yè)的論斷。他擯棄學(xué)院式研究，深入農(nóng)村，和農(nóng)民共同探討和推廣農(nóng)業(yè)一體化思想，用合作社的形式組織農(nóng)民，搞規(guī)模農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)的實(shí)踐，幫助農(nóng)民走上致富的道路。研討會(huì)上，劉振邦教授生前的同事、家人、朋友、學(xué)生、仰慕老先生的行業(yè)人士以及多家畜牧行業(yè)和大眾媒體60 余人到會(huì)，表達(dá)了對(duì)劉振邦教授的默哀和追思，并對(duì)劉振邦教授的學(xué)術(shù)思想進(jìn)行研討學(xué)習(xí)，氣氛莊重而熱烈。

Discussion of Determination Method for Dextrin in Raw Milk with Spectrophotometer

XU Ping1，LU Li2
﹝1 Ministry of Agriculture Dairy Quality Supervision and Testing Center（Harbin）；2 QingDao Municipal Centre for Disease and Control﹞

After removing the protein，fat，and soluble sugar in raw milk，the extracted dextrin reacted with phenol-sulfuric acid solution，and the color depth of generated complex was proportional to the concentration of dextrin in the solution，therefore the concentration of dextrin in raw milk could be calculated by the standard curve. The results showed that the developed method has high sensitivity and good precision，with the standard deviation of 0.007 and the relative standard deviation of 2.88%. It provided guiding significance for the determination and supervision of dextrin adulteration in raw milk.

raw milk；dextrin；quantitative determination

2015-12-21）