小柴胡湯拆方對慢性束縛抑郁模型大鼠腦組織神經(jīng)遞質的影響

李鵬英　吳婷婷　龍飛虎　孫　燕　王　旭

(北京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，北京，100029)

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實驗研究

小柴胡湯拆方對慢性束縛抑郁模型大鼠腦組織神經(jīng)遞質的影響

李鵬英吳婷婷龍飛虎孫燕王旭

(北京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，北京，100029)

目的：觀察小柴胡湯及其各藥對對抑郁模型大鼠腦組織單胺類神經(jīng)遞質的影響，探討小柴胡湯及其各藥配伍抗抑郁作用機制。方法：采用慢性束縛應激方法建立大鼠抑郁癥模型，觀察小柴胡湯對慢性應激抑郁模型大鼠的行為學改變，高效液相色譜法測定大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質的含量，評定小柴胡湯及各藥對對抑郁動物模型的影響。結果：模型組大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質含量與正常組差異有統(tǒng)計學意義；全方組大鼠海馬5-HT、NE、5-HIAA(5-HT的降解物)的含量明顯升高；姜夏組、參草組大鼠海馬NE含量顯著升高；全方組、柴芩組、參草組大鼠海馬5-HT含量顯著提高；全方組、柴芩組、姜夏組大鼠海馬5-HIAA含量極顯著增高。結論：小柴胡湯治療抑郁癥有良好的療效，各藥對作用于模型大鼠腦組織神經(jīng)遞質的靶點有一定的偏向性。柴胡與黃芩配伍主要通過提高大鼠海馬5-HT含量而發(fā)揮其抗抑郁作用；生姜與半夏配伍能顯著提高大鼠海馬NE含量，二者配伍雖然對抑郁大鼠海馬5-HT的改變影響不顯著，但能顯著增加5-HT的降解物5-HIAA的含量；人參、甘草、大棗能顯著提高抑郁大鼠腦內(nèi)5-HT和NE含量。

小柴胡湯；拆方；抑郁癥；單胺類神經(jīng)遞質；去甲腎上腺素；5-羥色胺

抑郁癥是與應激密切相關的一類精神疾病，以持續(xù)性的情緒低落為主要特征，是臨床的常見病和多發(fā)病，具有患病率高、復發(fā)的率高、自殺率高等特點[1-2]。目前國內(nèi)外采用部分抑郁動物模型對一系列天然藥物及中藥復方進行了研究，發(fā)現(xiàn)了許多具有抗抑郁活性的單味藥和復方[3-4]。中醫(yī)藥在中醫(yī)學的整體觀念和辨證論治指導之下，在抑郁癥治療中發(fā)揮著獨特優(yōu)勢。小柴胡湯源于《傷寒論》，是張仲景治療少陽證的主方，能夠和解表里，疏肝解郁，調(diào)和陰陽。該方在現(xiàn)代臨床上運用廣泛，可涵蓋內(nèi)、外、婦、兒、五官科疾病，精神病及神經(jīng)科疾病。實驗研究證明該方有一定的抗抑郁作用，各有效成分單獨作用于抑郁癥模型大鼠也表現(xiàn)出一定的抗抑郁作用，本實驗即從小柴胡湯藥對配伍入手，探討各藥配伍抗抑郁作用機制。

1　資料與方法

1.1實驗動物SPF級Wistar大鼠，雄性，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，合格證號：SCXX(京)2012-0001。實驗動物喂常規(guī)顆粒飼料，自由飲水，室溫(22±2)℃，相對濕度保持在30%～40%。

1.2實驗藥品中藥材購自北京中醫(yī)藥大學國醫(yī)堂中醫(yī)門診部。小柴胡湯劑量參考普通高等教育“十一五”國家級規(guī)劃教材《傷寒論講義》，換算成大鼠劑量為柴胡40 g、黃芩15 g、半夏15 g、生姜15 g、黨參15 g、甘草15 g、大棗4枚(15 g)。陽性藥采用鹽酸氟西汀膠囊，常州華生制藥有限公司，批號：80711001。

1.3動物分組及模型制備Wistar大鼠56只，適應性飼養(yǎng)7 d后隨機分為正常組，模型組，小柴胡湯全方組，柴芩組，姜夏組，參草棗組及陽性藥組，每組8只，每籠4只。應激和抑郁癥之間有著密切的聯(lián)系，慢性、低強度、長期的應激源是促進抑郁癥發(fā)生及發(fā)展的重要原因，應激可以作為制造抑郁模型的手段。本研究即參照文獻報道制備慢性束縛應激模型，大鼠適應性飼養(yǎng)7 d后開始造模，持續(xù)21 d。所用束縛筒為硬塑料特制，該筒為管狀，筒前端呈錐形，其尖端開口為通氣口，后端為可開關閘門。大鼠頭向通氣口進入后，關閉閘門，可通過調(diào)節(jié)閘門的聚通氣口的遠近改變大鼠活動空間。造模期間，每次束縛時，使大鼠鉆進束縛筒，時間為3 h/d。整個束縛過程中動物在同一環(huán)境中，不予進食水，應激結束后，將大鼠放回籠中自由進食和飲水[5-7]。

1.4藥物干預正常組正常飲水攝食，不給予任何刺激，其余各組動物接受21 d刺激。治療各組在刺激第2天灌胃給藥，正常組、模型組給予等量生理鹽水。各給藥組每天固定時間灌胃，1次/d，連續(xù)給藥21 d。各組每天每只大鼠灌胃給藥量為人臨床用量的等效劑量：全方組13 g/kg；柴芩組5.5 g/kg；姜夏組3 g/kg；參草棗組4.5 g/kg；陽性藥2 mg/kg。每7 d復測大鼠體重1次，根據(jù)體重變化更新灌胃劑量。

1.5觀測指標觀察各組大鼠的精神、進食、活動等一般狀態(tài)。在實驗第1天及第7、14、21天分別稱取各組大鼠體重，實驗第21天體重減去實驗第1天體重為各組大鼠的體重增長值。

1.6樣品制備末次刺激及行為學檢測后將大鼠斷頭處死，在冰上迅速剝離大腦，取左、右海馬，精確稱重后置離心管中，保存于-20 ℃的冰箱中。樣品中分別加入0.06 mol/L的二羥芐胺(DHBA)20 L，0.1 mol/L的高氯酸(HClO4)380 L。固體樣本冰浴條件下超聲勻漿30 s。常溫下11 000 r/min離心10 min，取上清液10 μL進行測定，采用高效液相色譜系統(tǒng)(HPLC)加電化學檢測器(ECD)檢測腦組織5-HT，NE，5-HIAA的含量。

2　結果

2.1各組大鼠體重增長變化實驗第1天至第14天，各組大鼠體重無明顯差異。至實驗第21天模型組大鼠體重明顯低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，各治療組大鼠體重均明顯低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；與模型組比較，參草組大鼠體重增長值明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其余各組大鼠體重增長值與模型組大鼠比較，有升高的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　各組大鼠體重(g)的變化

注：與正常組比較：▲▲P<0.01；與模型組比較：*P<0.05。

2.2大鼠海馬去甲腎上腺素(Norepinephrine，NE)含量變化與正常組比較，模型組大鼠海馬NE含量明顯降低(P<0.05)；與模型組比較，全方組、陽性藥組大鼠海馬NE含量極顯著提高(P<0.01)，姜夏組、參草組大鼠海馬NE含量顯著提高(P<0.05)；柴芩組大鼠海馬NE含量無顯著變化(P>0.05)。見表2。

表2　各組大鼠海馬去甲腎上腺素(NE，ng/g濕組織)

注：與正常組比較：▲P<0.05；與模型組比較：*P<0.05，**P<0.01。

2.3大鼠海馬5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量變化與正常組比較，模型組大鼠海馬5-HT含量明顯降低(P<0.01)；與模型組比較，陽性藥組、全方組、參草組大鼠海馬5-HT含量顯著提高(P<0.05)，柴芩組大鼠海馬5-HT含量極顯著提高(P<0.01)，姜夏組大鼠海馬5-HT與模型組相比無顯著變化；柴芩組大鼠海馬5-HT含量高于姜夏組大鼠，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3　各組大鼠海馬5-羥色胺(5-HT，ng/g濕組織)

注：與正常組比較：▲▲P<0.01，▲P<0.05；與模型組比較：*P<0.05,**P<0.01。

表4　各組大鼠海馬5-羥吲哚乙酸(5-HIAA，ng/g濕組織)

注：與正常組比較：▲▲P<0.01；與模型組比較：*P<0.05,**P<0.01。

2.4大鼠海馬5-羥吲哚乙酸(5-Hydroxyindoleacetic Acid 5-HIAA)含量變化與正常組比較，模型組大鼠海馬5-HIAA含量明顯降低(P<0.01)；與模型組比較，陽性藥組大鼠海馬5-HIAA含量顯著提高(P<0.05)，全方組、柴芩組、姜夏組大鼠海馬5-HIAA含量極顯著增高(P<0.01)，參草組大鼠海馬5-HIAA含量有增高趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表4。

3　討論

本實驗采用慢性束縛建立抑郁大鼠模型，通過對實驗第21天與實驗第1天時各組大鼠的行為學比較觀察到，與正常組大鼠相比，模型組大鼠曠場活動明顯減少，在中央?yún)^(qū)停留時間及移動總距離皆明顯降低，穿格次數(shù)及站立次數(shù)也都明顯少，并且大鼠體重增長值顯著降低，模型大鼠行為與抑郁癥之情緒低落、興趣喪失以及樂趣(快感)喪失等癥狀有一定程度的相似性，此種情況也驗證了慢性、低強度、長期的應激促進了抑郁癥發(fā)生及發(fā)展。研究中還觀察到在實驗1～14 d期間，各組大鼠體重增長無明顯差異，而14 d之后，各組大鼠與正常組比較，體重增長皆比較緩慢。

抑郁癥發(fā)病不是由某種單一因素引起的，可能是單胺類神經(jīng)遞質及其受體、HPA軸功能失調(diào)、NT和細胞反應等多因素綜合作用的結果[8]。其中單胺學說是抑郁癥發(fā)病機制研究中的經(jīng)典理論之一，單胺遞質5-HT和腎上腺功能不足可引起抑郁癥的發(fā)生[9]。這一假說得到了許多實驗的證實，如在抑郁癥患者的尿與腦脊液中，NE的代謝產(chǎn)物明顯減少。藥理學的研究表明NE再攝取抑制劑可以改善許多患者的抑郁癥狀，說明NE可能參與了抑郁癥的形成過程[10]。海馬是認知和情緒反應的重要中樞，也是應激易損傷的靶器官，長期嚴重抑郁癥患者出現(xiàn)海馬體積縮小，臨床觀察發(fā)現(xiàn)，抑郁癥患者大腦可表現(xiàn)為多種神經(jīng)遞質失常，多神經(jīng)遞質的同步變化又有一定的規(guī)律性[11]。本實驗中模型組大鼠海馬5-HT、NE和5-HIAA的含量均較正常組下降，其中5-HT、5-HIAA變化最為明顯，與文獻報道一致。經(jīng)治療后，與模型組比較，小柴胡湯與鹽酸氟西汀均可明顯提高大鼠海馬內(nèi)NE、5-HT、5-HIAA的含量，實驗結果提示小柴胡湯可通過增加模型大鼠海馬5-HT、NE含量發(fā)揮其抗抑郁作用。

小柴胡湯拆方各組比較，柴胡與黃芩配伍可以顯著升高抑郁大鼠海馬5-HT、5-HIAA的含量，而對NE含量影響不明顯，研究結果提示柴胡與黃芩主要通過提高大鼠海馬5-HT含量發(fā)揮其抗抑郁作用。生姜與半夏配伍可以顯著升高抑郁大鼠海馬NE、5-HIAA的含量，而對5-HT含量影響不明顯，5-HIAA為5-HT的降解物，二者配伍具體通過何種途徑提高抑郁大鼠腦內(nèi)5-HIAA含量，還有待進一步研究。黨參、甘草、大棗配伍可以顯著升高抑郁大鼠海馬5-HT、NE的含量，而對5-HIAA含量影響不明顯，研究結果提示黨參、甘草、大棗可以通過提高抑郁大鼠腦內(nèi)5-HT和NE含量發(fā)揮其抗抑郁作用。研究中發(fā)現(xiàn)參草組大鼠體重增長值與模型組比較明顯增高，黨參具有補中益氣、健脾益肺之功效，甘草能夠補脾益氣，大棗可以補中益氣、養(yǎng)血安神，三者共用可以補益脾氣，健運脾胃，脾胃為氣血生化之源，結果表明此組大鼠體重增長值增高與此三藥的作用密不可分。

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(2015-07-28收稿責任編輯：張文婷)

Effect of Minor Bupleurum Decoction and its Disassembled Prescription on Brain Neurotransmitter in Rats with Chronic Depression Model

Li Pengying, Wu Tingting, Long Feihu, Sun Yan, Wang Xu

(CollegeofBasicMedicine,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective: To observe the effect of Minor Bupleurum Decoction on monoamine neurotransmitters in brain tissue of rat model of depression, and to investigate the mechanism of antidepression of Minor Bupleurum Decoction. Methods: Rat model of depression built by chronic restraint stress was used to observe the behavioral changes of Minor Bupleurum Decoction. HPLC method was used to determine the content of monoamine neurotransmitters in brain of rats. And then the effects of Minor Bupleurum Decoction and other Chinese medicinals were evaluated on animal models of depression. Results: The contents of monoamine neurotransmitters, model group and the normal group were significantly different. The content of 5-HT, NE, 5-HIAA significantly increased in the Quan Fang group. The content of NE in the hippocampus of the Jiang Xia group and the Shen Cao group significantly increased. And the content of 5-HT also significantly increased in Quan Fang group, Chai Qin group, Shen Cao group. Moreover, the content of 5-HIAA in the hippocampus of the Quan Fang group, Chai Qin group and Jiang Xia group significantly increased. Conclusion: Minor Bupleurum Decoction has a good therapeutic effect on depression, each of the drugs on the role of brain tissue in rats with the target point of the neurotransmitter has a certain focus. Bupleurum and Scutellaria have antidepressant effects by increasing the content of 5-HT in rat hippocampus. Pinellia and ginger could significantly increase hippocampal NE content. Although the effects of the 5-HT were not significant, but it could significantly increase the content of 5-HT degradation of 5-HIAA; Ginseng, l Liquorice Root, and Chinese Date could significantly elevate the condition of depression 5-rat brain HT and NE content.

Minor Bupleurum Decoction; Disassembled prescription; Depression; Monoamine neurotransmitter; Norepinephrine; 5-hydroxytrytryptamine

國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥重點學科金匱要略學科

李鵬英(1973.01—)，女，醫(yī)學博士，副教授，研究方向：張仲景方證理論體系研究，E-mail:pengying73@126.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.08.048