人大腸癌癌旁不同部位組織生長(zhǎng)活性與組織微環(huán)境相關(guān)細(xì)胞組分差異分析

劉 紅，文 彬，吳麗云，劉金元廣州中醫(yī)藥大學(xué)脾胃研究所，廣東 廣州，510405

人大腸癌癌旁不同部位組織生長(zhǎng)活性與組織微環(huán)境相關(guān)細(xì)胞組分差異分析

劉 紅，文 彬，吳麗云，劉金元
廣州中醫(yī)藥大學(xué)脾胃研究所，廣東 廣州，510405

背景與目的：腫瘤微環(huán)境已成為現(xiàn)今的腫瘤研究熱點(diǎn)，而其對(duì)大腸癌啟動(dòng)也有重要意義。建立大腸癌癌旁組織體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)體系，觀察距大腸癌病灶不同距離腸上皮組織體外生長(zhǎng)特性，并對(duì)這些不同部位腫瘤組織微環(huán)境中主要的細(xì)胞組分進(jìn)行檢測(cè)，研究不同部位組織體外生長(zhǎng)特性與細(xì)胞組分間可能的相關(guān)性。方法：在距離大腸癌病灶近端手術(shù)切除取最遠(yuǎn)端（大于等于10 cm），癌旁（約2 cm）和二者中間位（約5 cm）分別取得組織樣本，根據(jù)距病灶遠(yuǎn)近依次命名為1、2和3號(hào)位組織樣本。通過(guò)重復(fù)貼壁法對(duì)組織塊進(jìn)行體外培養(yǎng)，觀察組織的生長(zhǎng)活性的差異。使用常規(guī)石蠟切片-HE染色方法和免疫組織化學(xué)檢測(cè)3個(gè)部位中不同細(xì)胞組分標(biāo)志物Cyclin D1（CD1）、CD133、細(xì)胞角蛋白（cytokeratin18，CK18）、波形蛋白（vimentin）和α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表達(dá)及分布情況。結(jié)果：在最靠近腫瘤病灶的3號(hào)位組織細(xì)胞生長(zhǎng)活性最高，其爬出細(xì)胞量與速度均高于2號(hào)位和1號(hào)位，且3號(hào)位組織的生長(zhǎng)活性與患者的腫瘤惡性分期相關(guān)。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，在1、2、3號(hào)位中，CD1、CD133、vimentin和α-SMA表達(dá)逐漸增高，而CK18表達(dá)逐漸降低。結(jié)論：在大腸癌變過(guò)程中，其組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞組分發(fā)生了明顯的變化，提示微環(huán)境的結(jié)構(gòu)和成分改變可能促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展。

腫瘤微環(huán)境；大腸癌；免疫組織化學(xué)

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程不僅與自身的突變和基因不穩(wěn)定性相關(guān)，更離不開(kāi)腫瘤細(xì)胞與其所處的微環(huán)境之間的動(dòng)態(tài)交換及反應(yīng)的作用。這些行為逐漸破壞鄰近的細(xì)胞與基質(zhì)之間的正常聯(lián)系和組織的正常結(jié)構(gòu)，組織架構(gòu)和內(nèi)穩(wěn)態(tài)的改變是腫瘤啟動(dòng)的早期信號(hào)。微環(huán)境的穩(wěn)定是保證細(xì)胞正常增殖、分化、代謝和功能活動(dòng)的重要前提。腫瘤微環(huán)境（cancer microenvironment）是指由腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及其前體細(xì)胞、周細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、腫瘤相關(guān)性成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)等相互作用形成的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的特殊環(huán)境［1］，它們?cè)诎┳儼l(fā)生過(guò)程中均發(fā)生了不同的變化。組織的結(jié)構(gòu)及相關(guān)微環(huán)境的細(xì)胞類型、豐度、表型特征對(duì)組織重塑有重要作用，它們的改變與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［2-4］。 隨著對(duì)腫瘤的深入研究，越來(lái)越多的研究者認(rèn)識(shí)到腫瘤微環(huán)境對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展至關(guān)重要［5-7］。而正常微環(huán)境下的組織結(jié)構(gòu)及相關(guān)細(xì)胞的類型、豐度是組織重塑的重要內(nèi)容；其改變則與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究對(duì)腸腫瘤細(xì)胞選用Cylin D1（CD1）作為其標(biāo)志物［8-10］，大腸腫瘤干細(xì)胞選用CD133［11-12］，上皮細(xì)胞選用細(xì)胞角蛋白（cytokeratin 18，CK18）［13-14］，成纖維細(xì)胞選用波形蛋白（vimentin）和α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）［15-17］。

本研究通過(guò)對(duì)距離大腸癌癌旁組織不同距離的癌旁組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，探索組織結(jié)構(gòu)的改變?cè)谀[瘤發(fā)生中的意義；并通過(guò)對(duì)腫瘤微環(huán)境中的不同細(xì)胞類型標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，探討不同距離癌旁組織的體外培養(yǎng)的生長(zhǎng)活性差異與腫瘤微環(huán)境改變的相關(guān)性以及腫瘤微環(huán)境細(xì)胞成分的改變對(duì)大腸癌發(fā)生的意義。

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1組織樣本

標(biāo)本取自廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院2013年11月—2014年6月手術(shù)切除的23例中分化結(jié)腸癌患者，其中男性16例，女性7例，平均年齡（56.8±10.6）歲。所有患者均為散發(fā)性大腸癌，術(shù)前未接受任何放、化療，所有病例均經(jīng)兩位以上病理醫(yī)師確診。標(biāo)本獲取位置如圖1所示，每例依次在距離大腸癌病灶近端（大于等于10 cm）、二者中間位（約5 cm）、癌旁（約2 cm）處切取，按順序標(biāo)記為1、2和3號(hào)位。

圖1　標(biāo)本取材部位示意圖Fig.1　Position of tissues used in this research

1.1.2主要試劑

CK18（bs-1339R）、vimentin（bs-8533R）、CD1（bs-0623R）和CD133（bs-0209R） 購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，α-SMA （ab124964）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，SABC大鼠IgG試劑盒（SA1025）和SABC兔IgG試劑盒（SA1022） 購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，培養(yǎng)液RPMI-1640（C11875）、Hanks 緩沖液（C14175）、青霉素和鏈霉素（15140）購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，CO2培養(yǎng)箱購(gòu)自美國(guó)Thermo公司，倒置相差顯微鏡（DP70）購(gòu)自日本Olympus公司?；A(chǔ)培養(yǎng)液：RPMI-1640（含青霉素100U/mL、鏈霉素100 g/ mL）、Hanks運(yùn)輸液（含青霉素200 U/mL、鏈霉素200 μg/mL）、Hanks 洗液（含青霉素100 U/mL、鏈霉素100 μg/mL）。

1.2主要方法

1.2.1組織培養(yǎng)

手術(shù)室取新鮮組織標(biāo)本，置于預(yù)冷的Hanks運(yùn)輸液中帶回實(shí)驗(yàn)室。無(wú)菌條件下，分別將3個(gè)部位的組織樣本去除壞死組織、脂肪組織和血凝塊，用Hanks洗液沖洗10次，然后將組織塊置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，將組織塊剪成大小為1～2 mm3小塊，用培養(yǎng)液再清洗3次，將切好的組織塊均勻地置于6孔培養(yǎng)板上，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5 cm。蓋好培養(yǎng)板蓋，倒置于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中，3 h后，待組織塊邊緣微干涸，將培養(yǎng)板取出，加入培養(yǎng)液，組織黏膜層向上，處于氣-液交界面，平放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。每24 h換液1 次。7 d后對(duì)其組織生長(zhǎng)形態(tài)學(xué)進(jìn)行分析。

1.2.2免疫組織化學(xué)檢測(cè)

標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，采用4 μm厚連續(xù)切片。常規(guī)脫蠟水化，PBS沖洗，3%過(guò)氧化氫滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，微波修復(fù)15 min，加入一抗于4 ℃過(guò)夜；用PBS沖洗2 min重復(fù)3次，滴加相應(yīng)二抗于37 ℃衡溫箱溫育30 min，具體步驟按試劑盒說(shuō)明書操作。采用DAB顯色，蘇木精復(fù)染，常規(guī)乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，置于顯微鏡下觀察結(jié)果。每例標(biāo)本均采用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照組。應(yīng)用IPP 6.0病理圖像分析軟件測(cè)定各組免疫陽(yáng)性產(chǎn)物的光密度值（D值），每張切片隨機(jī)測(cè)定6個(gè)視野，同時(shí)測(cè)定同一張切片上組織的D值作為背景，免疫反應(yīng)產(chǎn)物的D值減去背景D值得到校正的D值（COD值），即為各陽(yáng)性產(chǎn)物的實(shí)際吸光度值，然后求平均值作為該樣本的COD值。用COD值進(jìn)行分析和比較，以避免染色過(guò)程中的非特異性染色等導(dǎo)致的誤差。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s 表示，計(jì)量資料進(jìn)行均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)或方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1組織培養(yǎng)結(jié)果

組織培養(yǎng)7 d后發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)樣本在最靠近大腸癌病灶的3號(hào)位組織細(xì)胞生長(zhǎng)活性最高，有較多的細(xì)胞從組織中爬出，且細(xì)胞生長(zhǎng)速度較快，而1、2號(hào)位組織從組織塊中爬出細(xì)胞量與速度較3號(hào)位低（圖2）。

2.2腸組織隱窩結(jié)構(gòu)分析

異常隱窩的出現(xiàn)是大腸癌發(fā)生的最早期事件，它也是大腸癌早期診斷的觀察指標(biāo)之一，正常隱窩和異常隱窩在形態(tài)學(xué)上有很大差異［18-20］。在本研究中，通過(guò)HE染色對(duì)3個(gè)不同部位組織中隱窩的形態(tài)特征進(jìn)行觀察。在距離大腸癌病灶最遠(yuǎn)的1號(hào)部位組織中，隱窩結(jié)構(gòu)基本正常無(wú)明顯改變，排列緊密且整齊，腺腔直徑正常，單層排列，細(xì)胞核大小正常（圖3A）。而部分樣本的2號(hào)位則表現(xiàn)出較大的隱窩，直徑大小不一，有的管腔呈鋸齒狀，細(xì)胞核增大拉長(zhǎng)，排列擁擠，隱窩間質(zhì)細(xì)胞和杯狀細(xì)胞有所增加（圖3B）。在距離癌變病灶最近的3號(hào)位中出現(xiàn)大量異常隱窩病灶，柱狀細(xì)胞減少，杯狀細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞明顯增多，排列擁擠、紊亂，細(xì)胞組分發(fā)生明顯改變。上皮層增厚，細(xì)胞核增大，隱窩異型增生明顯，腺管染色加深，隱窩直徑異常增大，有的隱窩結(jié)構(gòu)完全消失，喪失組織正常結(jié)構(gòu)（圖3C）。

圖2　體外培養(yǎng)Fig.2　Culture in vitro?。ā?00）

圖3　HE染色Fig.3　HE staining?。ā?00）

2.3腸組織細(xì)胞組分差異分析

CD1作為腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志物，主要分布在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，1、2和3號(hào)部位組織中均有CD1表達(dá)（圖4A～C），1號(hào)位上僅有極少數(shù)細(xì)胞表達(dá)，但在3號(hào)位間質(zhì)中大量表達(dá)。應(yīng)用IPP 6.0病理圖像分析軟件測(cè)定各組免疫陽(yáng)性產(chǎn)物的光密度值：1、2和3號(hào)部位光密度值分別為0.334 004±0.039 739、0.331 365±0.042 054和0.380 984±0.022 47。3號(hào)位的表達(dá)明顯高于1、2號(hào)位，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

CD133作為腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物，主要表達(dá)在腫瘤干細(xì)胞的細(xì)胞膜上。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，1、2和3號(hào)部位組織中均有CD133表達(dá)（圖4D～F），1號(hào)位上僅有極少數(shù)細(xì)胞表達(dá)，3號(hào)位隱窩中大量表達(dá)。應(yīng)用IPP 6.0病理圖像分析軟件測(cè)定各組免疫陽(yáng)性產(chǎn)物的光密度值，1、2、3號(hào)部位光密度值分別為0.320 269±0.031 419、0.379 482±0.059 796和0.409 386±0.024 943。2、3號(hào)位的表達(dá)高于1號(hào)位，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

CK18作為上皮細(xì)胞的標(biāo)志物，主要表達(dá)在單層上皮組織中。免疫組織化學(xué)結(jié)果表明，1、2和3號(hào)部位組織中均有CK18表達(dá)（圖4G～I(xiàn)），1號(hào)位在上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中有表達(dá)，3號(hào)位幾乎無(wú)表達(dá)。應(yīng)用IPP 6.0病理圖像分析軟件測(cè)定各組免疫陽(yáng)性產(chǎn)物的光密度值，1、2和3號(hào)部位光密度值分別為0.317 105±0.022 426、0.233 354±0.025 799和0.286 773±0.003 611。1號(hào)位的表達(dá)高于2、3號(hào)位，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

作為成纖維細(xì)胞的標(biāo)志物，vimentin主要在成纖維細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。α-SMA作為肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志物，主要表達(dá)在肌成纖維細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，1、2和3號(hào)部位組織中均有vimentin（圖4J～L）和α-SMA（圖4M～O）表達(dá)，1號(hào)位少量表達(dá)，2、3號(hào)位組織的間質(zhì)中大量表達(dá)。應(yīng)用IPP 6.0病理圖像分析軟件測(cè)定各組免疫陽(yáng)性產(chǎn)物的光密度值，vimentin在1、2和3號(hào)部位光密度值分別為0.346 010±0.043 541、0.383 070±0.052 834 和0.405 510±0.003 268。2、3號(hào)位的表達(dá)都高于1號(hào)位，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；α-SMA在1、2和3號(hào)部位光密度值分別為0.213 457±0.033 147、0.312 185±0.031 564和0.284 130±0.048 783。2、3號(hào)位的表達(dá)都高于1號(hào)位，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

陰性對(duì)照中用PBS代替一抗，其余步驟試劑及方法不變。陰性對(duì)照中無(wú)棕黃色染色（圖5）。

圖4　免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)CD1、CD133、vimentin、CK18和α-SMA的表達(dá)Fig.4　The expressions of CD1，CD133，vimentin，CK18 and α-SMA in diferent positions detected by immunohistochemistry?。ā?00）

圖5　陰性對(duì)照Fig.5　Negative staining?。ā?00）

3　討　論

本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)組織的細(xì)胞成分的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。腫瘤發(fā)生的微環(huán)境不僅包括腫瘤所在組織的結(jié)構(gòu)，也包括其周圍的組織細(xì)胞及其分泌的各種因子。腫瘤發(fā)生、發(fā)展是細(xì)胞增生和死亡的動(dòng)態(tài)過(guò)程。一方面是腫瘤細(xì)胞大量增殖分裂，同時(shí)伴間質(zhì)細(xì)胞的激活和增生，以及基質(zhì)成分結(jié)構(gòu)異常，導(dǎo)致腫瘤組織結(jié)構(gòu)異常；另一方面是正常細(xì)胞和部分腫瘤細(xì)胞的凋亡和壞死，引起腫瘤組織發(fā)生炎性反應(yīng)，大量炎性細(xì)胞聚集、小血管增生、成纖維細(xì)胞增多和肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，以及細(xì)胞基質(zhì)分泌增加。

目前已有很多學(xué)者認(rèn)為，異常隱窩的出現(xiàn)是大腸癌發(fā)生的最早期事件，并把它作為大腸癌早期診斷的觀察指標(biāo)之一［21］。有研究發(fā)現(xiàn)，不同病變時(shí)期的隱窩在形態(tài)學(xué)上存在很大差異，其體積、形狀、細(xì)胞核大小、表面光滑程度以及有無(wú)分支都與正常隱窩不同［22］。正常隱窩結(jié)構(gòu)的改變對(duì)大腸癌癌變的診斷有重要意義。在HE染色中可以看到柱狀細(xì)胞減少，杯狀細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞明顯增多，細(xì)胞核增大、排列紊亂，隱窩異型增生，這些現(xiàn)象提示，隱窩結(jié)構(gòu)的改變可能與組織微環(huán)境內(nèi)的細(xì)胞組分改變相關(guān)。

CD1是腸腫瘤細(xì)胞的特異標(biāo)志物［8-10］。CD133是大腸腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物［11-12］，這兩種蛋白表達(dá)水平的上升提示大腸腫瘤細(xì)胞、大腸腫瘤干細(xì)胞在大腸癌變過(guò)程中數(shù)量增加。CD1是調(diào)控細(xì)胞周期的重要因子，能調(diào)控細(xì)胞G1/S期轉(zhuǎn)換，也是最早發(fā)現(xiàn)的原癌基因，在很多腫瘤中都出現(xiàn)過(guò)表達(dá)［8-10］。過(guò)表達(dá)的CD1能使細(xì)胞周期使細(xì)胞始終處于旺盛分裂狀態(tài)，造成細(xì)胞的失控性生長(zhǎng)而引發(fā)癌變。大腸腫瘤干細(xì)胞僅占腫瘤細(xì)胞的小部分，具有自我更新的能力，并能產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞。而本研究檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在大腸癌變過(guò)程中，大腸腫瘤干細(xì)胞的分布范圍并不局限于隱窩基底，而是在整個(gè)隱窩中都有分布。

Vimentin是一種中間絲蛋白，參與維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定、細(xì)胞的生長(zhǎng)分化狀態(tài)［15-16］及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，還能調(diào)節(jié)蛋白間的相互作用。Vimentin主要表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞中，是成纖維細(xì)胞的標(biāo)志物［15-17］，而α-SMA是肌成纖維細(xì)胞表型的標(biāo)志性蛋白。在癌變發(fā)生過(guò)程中，成纖維細(xì)胞被激活轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞。在正常組織中α-SMA不表達(dá)，說(shuō)明癌細(xì)胞突破基底膜后，正常的成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性開(kāi)始發(fā)生改變，即出現(xiàn)了肌成纖維細(xì)胞。肌成纖維細(xì)胞的出現(xiàn)，是癌細(xì)胞和間質(zhì)成分相互作用的結(jié)果。肌成纖維細(xì)胞是原位腫瘤和轉(zhuǎn)移癌組織的特征性間質(zhì)表現(xiàn)，是膠原積聚和組織結(jié)構(gòu)改建的重要原因，具有一定的收縮功能。腫瘤細(xì)胞激活的成纖維細(xì)胞表達(dá)α-SMA、大量膠原，以及其他基質(zhì)成分的病理現(xiàn)象，稱為“纖維成形反應(yīng)”。高表達(dá)的vimentin和α-SMA增強(qiáng)了細(xì)胞侵襲和游走的能力。而這恰好可能解釋了為什么越靠近腫瘤病灶的組織塊生長(zhǎng)活性越好。

CK18是一種直徑8～l0 nm的中間絲，為上皮細(xì)胞細(xì)胞骨架的組成成分，是上皮細(xì)胞的特異性標(biāo)志物［13-14］。本研究中CK18的低表達(dá)提示在癌變過(guò)程中上皮細(xì)胞逐漸減少，這可能與上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變，參與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程相關(guān)。細(xì)胞骨架是支撐細(xì)胞和容納細(xì)胞內(nèi)成分的主要結(jié)構(gòu)。CK18和vimentin都是中間絲蛋白，在癌變過(guò)程中，CK18的下調(diào)和vimentin的上調(diào)可能導(dǎo)致細(xì)胞骨架的重構(gòu)，促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。

正常的組織結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定的細(xì)胞組分對(duì)維持組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)有重要意義。越靠近腫瘤病灶的組織爬出細(xì)胞量與速度越高，可以推斷越靠近腫瘤病灶的組織其微環(huán)境的重構(gòu)性越大。細(xì)胞組分的改變導(dǎo)致所處的微環(huán)境改變，促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

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Comparing the characteristics of tissue culture in vitro and different cell types of cancer microenvironment in tissues at diferent distances from colorectal cancer lesions

LIU Hong，WEN Bin，WU Liyun，LIU Jinyuan （Piwei Institute，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，Guangdong Province，China）

Correspondence to: WEN BinE-mail: wenbin@gzucm.edu.cn

Background and purpose： Cancer microenvironment has become a hot topic of cancer research.It is important in the initiation of colorectal cancer.This study aimed to discuss the correlation between the characteristics of tissue culture in vitro and different cell types in cancer microenvironment.Methods： Samples were collected at different distances from the colorectal cancer lesions，which were named as positions 1，2 and 3 from distal to proximal.Tissues were cut into 1-2 mm3for in vitro culturing.HE staining was used to observe the structure of crypts.Immunohistochemistry was used to detect the expressions of Cyclin D1 （CD1），CD133，cytokeratin18 （CK18），vimentin and α-smooth muscle actin （α-SMA）.Results： Position 3 grew faster than position 2 and position 1.As getting closer to the colorectal cancer lesions，expressions of CD1，CD133，vimentin and α-SMA were increased while expression of CK18 was decreased.Conclusion：The tissue structure and the expression of different cell types in cancer microenvironment changed more seriously as getting closer to the colorectal cancer lesions.This indicated that the change of cancer microenvironment may contribute to the initiation of colorectal cancer.

Cancer microenvironment； Colorectal cancer； Immunohistochemistry

10.19401/j.cnki.1007-3639.2016.07.007

R735.3+4

A

1007-3639（2016）07-0601-07

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81173257）。

文 彬 E-mail:wenbin@gzucm.edu.cn

2015-10-15

2015-12-30）