Fas-670 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系研究

韓 俊，邵淑娟，孫 兵.大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院麻醉科，遼寧 大連，60；.大連醫(yī)科大學組織學與胚胎學教研室，遼寧 大連，6044；.大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院胸外科，遼寧 大連，60

Fas-670 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系研究

韓 俊1，邵淑娟2，孫 兵3
1.大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院麻醉科，遼寧 大連，116011；2.大連醫(yī)科大學組織學與胚胎學教研室，遼寧 大連，116044；3.大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院胸外科，遼寧 大連，116011

背景與目的：肺癌是全球腫瘤相關(guān)性死亡的主要病因之一。該研究旨在探索Fas-670 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系。方法：2010—2015年，共收集400例具有明確病理診斷的肺癌病例，同時按照同性別，選取年齡±5歲進行匹配健康對照，采用TaqMan熒光探針法進行基因分型檢測。對實驗結(jié)果，采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析。結(jié)果：共386例肺癌患者和394例健康對照者分型成功，與Fas基因的AA基因型攜帶者相比，GA和GG基因型攜帶者肺癌發(fā)病風險無顯著性增加，OR值分別為1.05（0.77～1.44）和1.27（0.81～1.99），與Fasl基因的TT基因型攜帶者相比，CT和CC基因型攜帶者患肺癌的風險顯著升高，調(diào)整年齡、性別和吸煙狀態(tài)后，OR值分別為1.37（1.01～1.86）和1.74（1.09～2.77）。結(jié)論：Fasl-844 T＞C多態(tài)性可能與肺癌易感性有關(guān)，F(xiàn)as-670 G＞A多態(tài)性可能與肺癌易感性無關(guān)。

Fas基因；Fasl基因；多態(tài)性；肺癌；易感性

肺癌是全球腫瘤相關(guān)性死亡的主要病因之一。有數(shù)據(jù)顯示，2012年在全世界范圍內(nèi)新增肺癌患者達180萬例，占全部腫瘤新發(fā)病例的13%。2012年死于肺癌的患者數(shù)達159萬例，占全球腫瘤相關(guān)性死亡總?cè)藬?shù)的1/5，嚴重影響人們健康水平［1］。肺癌的發(fā)生是集環(huán)境、生活方式和遺傳背景等多因素共同作用下的多階段過程，然而其早期癥狀隱匿，缺乏有效早期診斷手段，導致大部分患者發(fā)現(xiàn)時已是中晚期。Fas及其受體基因Fasl是凋亡誘導家族的重要成員，可以直接啟動細胞凋亡信號途徑。Fas蛋白表達下調(diào)或者Fasl表達上調(diào)均可導致腫瘤的發(fā)生。在Fas和Fasl基因啟動子區(qū)上存在著遺傳多態(tài)性，可以影響其表達水平，進而影響肺癌患者的個體易感性。目前研究較多的是Fas-1377 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多態(tài)性與肺癌易感性之間的關(guān)系，但是Fas-670 A＞G與中國人肺癌易感性關(guān)系，以及和Fasl-844 T＞C 基因多態(tài)性的聯(lián)合作用尚不清楚，本研究對此進行初步探討。

1　資料和方法

1.1研究對象

患者組選取大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2010—2015年具有明確病理診斷的早期肺癌患者400例，對照組選擇同期的健康體檢者，按照同性別，年齡±5歲進行匹配。按照WHO吸煙者定義，將連續(xù)或累積吸煙6個月或以上者定義為吸煙者。

1.2樣本采集和DNA制備

所有實驗對象均空腹采集靜脈血5 mL，采用EDTA抗凝，混勻后于－70 ℃冰箱保存，并同時對研究對象進行基本信息調(diào)查，包括年齡、性別及吸煙狀況等。DNA的提取采用經(jīng)典酚氯仿法進行DNA萃取，紫外分光光度法測定DNA的純度和濃度，并將DNA濃度調(diào)整至50 ng/μL。

1.3基因分型

采用TaqMan熒光探針法進行基因分型，按照試劑盒說明進行操作，結(jié)果在ABI 7500基因分析儀上進行檢測。采用SDS 2.2.1進行基因分型結(jié)果判定?？偟姆磻w系為10 μL，包括：2×Master Mix 5 μL，DNA 1 μL，80×探針引物0.2 μL，雙蒸水3.8 μL。反應條件為：95 ℃預變性10 min，92 ℃變性30 s，60 ℃退火延伸1 min，共45個循環(huán)。質(zhì)量控制采取隨機抽取10%的樣品進行重復檢測的方法。Fas-670 G＞A 和Fasl-844 T＞C基因多態(tài)性檢測探針和引物設(shè)計序列見表1。

1.4統(tǒng)計學處理

采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析，用Pearson χ2進行分類資料的相關(guān)統(tǒng)計分析，兩樣本t檢驗比較兩組連續(xù)變量的差異，logistic回歸分析進行校正分析。相對風險采用比值比（OR）及其95%可信區(qū)間（CI）進行表示。

表1　Fas-670 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多態(tài)性檢測探針和引物設(shè)計序列Tab.1　The probes and primer sequences in detecting gene polymorphisms of Fas-670 G＞A and Fasl-844 T＞C

2　結(jié)　果

2.1納入研究對象基本特征

患者組分型失敗14例，對照組分型失敗6例，因此共有386例肺癌患者和394例健康對照納入到最終的分析中?；颊呓M男性274例，女性112例，平均年齡58.1歲；對照組男性286例，女性108例，平均年齡57歲。兩組間年齡和性別分布差異無統(tǒng)計學意義（P＜0.05）?；颊呓M吸煙者286例，對照組235例，患者組顯著高于對照組（表2）。

2.2Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C基因型的分布及其與肺癌易感性之間的關(guān)系

Fas和Fasl基因各基因型在患者組和對照組中的分布見表3。Fas基因的AA、AG和GG基因型在對照組中的分布頻率分別為40.4%、46.7%和12.9%，符合遺傳平衡定律（χ2=0.04，P=0.84），與實驗組頻率分布差異無統(tǒng)計學意義（χ2=1.52，P=0.47）；Fasl基因的TT、TC和CC基因型在對照組中的分布頻率分別為52.5%、37.3%和10.2%，符合遺傳平衡定律（χ2=3.22，P=0.07），在實驗組中的分布頻率分別為38.1%、46.6%和15.3%，與實驗組頻率分布差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.49，P=0.02）。

Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C與肺癌易感性之間的關(guān)系見表3。與Fas基因的AA基因型攜帶者相比，GA和GG基因型攜帶者肺癌發(fā)病風險未顯著增加，按照隱性遺傳模型進行比較，亦未發(fā)現(xiàn)GG基因型攜帶者肺癌易感性顯著高于AA+GA基因型攜帶者。與Fasl基因TT基因型攜帶者相比，CT和CC基因型攜帶者患肺癌的風險顯著升高，調(diào)整年齡、性別和吸煙狀態(tài)后，OR值分別為1.37和1.74。

2.3Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C聯(lián)合作用

經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，同時攜帶Fas-670 GG基因型和Fasl-844 C等位基因個體肺癌易感性是攜帶Fas-670 A等位基因和Fasl-844 TT基因型個體的1.96倍（95%CI：1.16～3.32，表4）。

表2　納入研究對象基本特征Fig.2　The characteristics of the patient group and control group

表3　Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C與肺癌易感性之間的關(guān)系Fig.3　The relationship between the distribution of Fas-670 A＞G and Fasl-844 T＞C，and lung cancer susceptibility　n（%）

表4　Fas-670 A＞G和Fasl-844 T＞C聯(lián)合作用Tab.4　The function of the combination of Fas-670 A＞G and Fasl-844 T＞C　n（%）

3　討　論

細胞凋亡和增殖失衡是腫瘤形成的重要作用機制之一。Fas基因及其受體基因Fasl是凋亡誘導家族的重要成員，兩者的相互作用可以直接啟動細胞凋亡信號途徑。一般情況下，F(xiàn)as在多種組織細胞中表達穩(wěn)定，F(xiàn)asl表達非常局限，只有在受到外界刺激下其表達水平才會迅速增加?；诖嗽颍狙芯刻剿髁薋as-670 A＞G和Fasl-844 T＞C多態(tài)位點與肺癌易感性之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)asl-844 CT和CC基因型攜帶者患肺癌風險顯著增高，F(xiàn)as-670 A＞G多態(tài)可能與肺癌易感性無關(guān)，但是同時攜帶Fas-670 GG和Fasl-844 CT/CC基因型的個體易感性更高。

Fas-670 G等位基因在健康人中的頻率為0.36，與我國之間的研究報道結(jié)果一致［2-3］，顯著低于韓國以及我國臺灣省的數(shù)據(jù)［4-5］，F(xiàn)asl-844 C等位基因在健康人中的頻率為0.29，與我國以往的研究報道結(jié)果相似［2-5］。Fas-670 A＞G 和Fasl-844 T＞C多態(tài)各基因型在對照組的分布均符合遺傳平衡定律，表明本研究的對照組具有較好的代表性。

到目前為止，已有許多關(guān)于Fas-1377 G＞A 和FasL-844 T＞C基因多態(tài)性與腫瘤易感性關(guān)系的研究報道［2-6］，但是只有少量的文章關(guān)于Fas-670 A＞G多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系的研究。Fas-670位點位于該基因的啟動子區(qū)，A堿基被G堿基替代后導致Fas基因啟動子活性降低，進而使基因的表達減弱，導致Fas介導的細胞凋亡功能減弱，增加腫瘤發(fā)生風險［7］。Shao等［8］在研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)as-670 AG或者GG基因型攜帶者具有更高的前列腺癌易感性。然而，在我國臺灣省報道的一項關(guān)于宮頸癌的研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)as-670 A等位基因攜帶者具有更高的易感性［5］。本研究未發(fā)現(xiàn)該多態(tài)性與肺癌易感性顯著相關(guān)，這與之前的肺癌研究結(jié)果一致［4］。Fasl-844位點同樣位于基因的啟動子區(qū)，T堿基被C堿基替代后導致Fasl基因啟動子活性升高進而基因表達增強，腫瘤發(fā)病風險升高。Park等［4］的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)asl-844 C＞T多態(tài)與韓國人肺癌發(fā)病風險無關(guān)。然而，在我國南方地區(qū)的研究發(fā)現(xiàn)，CC基因型攜帶者肺癌易感性顯著升高［9］，于此相同，本研究發(fā)現(xiàn)，校正年齡、性別和吸煙狀態(tài)后，CT和CC基因型攜帶者發(fā)病風險分別是TT基因型攜帶者的1.37和1.74倍。這些不同結(jié)果可能是因為：第一，不同人種的遺傳背景不同，各等位基因頻率在不同的人群中的分布不同；第二，不同腫瘤類型的發(fā)病機制不同，基因多態(tài)性在不同腫瘤類型中發(fā)揮的作用亦不相同。

本研究進一步分析了在肺癌易感性中，F(xiàn)as-670 G＞A和Fasl-844 T＞C基因多態(tài)性的聯(lián)合作用，同時攜帶Fas-670 GG基因型和Fasl-844 C等位基因個體肺癌易感性是攜帶Fas-670 A等位基因和Fasl-844 TT基因型個體的1.96倍，表明兩者在肺癌的發(fā)生中可能存在聯(lián)合作用。

綜上所述，F(xiàn)asl-844 T＞C可能與肺癌易感性相關(guān)，F(xiàn)as-670 G＞A可能與肺癌易感性無關(guān)，本研究的結(jié)果尚需更大樣本量的研究進一步驗證。

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A study on the relationship between Fas-670 G＞A and Fasl-844 T＞C polymorphisms and the susceptibility to lung cancer

HAN Jun1，SHAO Shujuan2，SUN Bing3（1.Department of Anesthesiology，the 1stHospital Affiliated to Dalian Medical University，Dalian 116011，Liaoning Province，China；2.Department of Histology and Embryology，Dalian 116044，Liaoning Province，China； 3.Department of Thoracic Surgery，the 1stHospital Affiliated to Dalian Medical University，Dalian 116011，Liaoning Province，China）

Correspondence to: SUN BingE-mail: junhan_1981@126.com

Background and purpose： Lung cancer is one of the leading causes of cancer death in the world.The aim of this study was to evaluate whether Fas-670 G＞A and Fasl-844 T＞C polymorphisms were associated with the risk of lung cancer.Methods： Data from 400 lung cancer patients with specifc histological diagnosis were collected from 2010 to 2015.Meanwhile，data from matched healthy controls with the same gender and ±5 years were also collected.The genotypes of Fas-670 G＞A and Fasl-844 T＞C polymorphisms were determined by TaqMan fuorescent probe method，and the results were analyzed using SPSS 16.0 software.Results： A total number of 386 cases and 394 controls were successfully genotyped.Compared with AA genotype of Fas gene，the GA and GG genotype carriers had no signifcantly increased risk of lung cancer.The OR values were 1.05 （95%CI: 0.77-1.44） and 0.77 （95%CI: 0.81-1.99） respectively.Compared with TT genotype of Fasl gene，the CT and CC genotype carriers had signifcantly increased risk of lung cancer.The OR values were 1.37 （95%CI: 1.01-1.86） and 1.74 （95%CI: 1.09-2.77），respectively.Conclusion： Fasl-844 T＞C polymorphism may be involved in lung cancer risk but not Fas-670 G＞A polymorphism.

Fas gene；Fasl gene；Polymorphism；Lung cancer；Susceptibility

10.19401/j.cnki.1007-3639.2016.07.006

R734.2

A

1007-3639（2016）07-0596-05

國家自然科學基金面上項目（81470367）。

孫 兵 E-mail:junhan_1981@126.com

2016-01-29

2016-03-31）