核酸探針和PCR技術(shù)在食品致病菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用

□ 劉　洋　李苗苗　烏海市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

核酸探針和PCR技術(shù)在食品致病菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用

□ 劉洋李苗苗烏海市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們生活水平越來(lái)越高，越來(lái)越重視食品安全問(wèn)題，與此同時(shí)，食品安全檢驗(yàn)技術(shù)也得到了廣泛應(yīng)用。由于傳統(tǒng)的食品檢驗(yàn)方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力、繁瑣、準(zhǔn)確性低，人們開(kāi)始致力于研發(fā)新的檢測(cè)技術(shù)，其中核酸探針和PCR技術(shù)是最近發(fā)展起來(lái)的兩種食品安全檢驗(yàn)高新生物技術(shù)，有著快速、敏感、準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)，具有很大的投資效益。

核酸探針?lè)N類(lèi)及應(yīng)用

核酸探針原理是堿基配對(duì)，是將帶有標(biāo)記物的已知序列的核酸片段，與其互補(bǔ)的核酸序列雜交，形成雙鏈，用以檢測(cè)未知樣品中是否具有與其相同的序列，并能進(jìn)一步判定其與已知序列的同源程度。由于每一種致病菌都具有獨(dú)特的核酸片段，所以核酸探針技術(shù)具有較強(qiáng)的敏感性和特異性，因此適用于多種致病菌的檢驗(yàn)中。

放射性標(biāo)記探針

放射性標(biāo)記探針用放射性同位素作為標(biāo)記物。常用的同位素有32P、3H、35S。放射性標(biāo)記探針的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，缺點(diǎn)是易造成放射性污染，同位素半衰期短、對(duì)人體有傷害，因此，目前放射性標(biāo)記的探針不能實(shí)現(xiàn)商品化。

非放射性標(biāo)記探針

非放射性標(biāo)記探針的標(biāo)記物是生物素和地高辛，二者都是半抗原。生物素標(biāo)記核酸探針對(duì)身體無(wú)害，但是受到紫外線(xiàn)的光照射后易發(fā)分解。地高辛標(biāo)記核酸探針的檢測(cè)靈敏度相當(dāng)于放射性同位素標(biāo)記探針，并且特異性?xún)?yōu)于生物素標(biāo)記探針，其應(yīng)用日趨廣泛。

核酸探針?lè)N類(lèi)不同會(huì)給檢驗(yàn)帶來(lái)不同程度的影響，我國(guó)正在積極地投入研究，找到科學(xué)的策略。

PCR技術(shù)應(yīng)用

PCR技術(shù)主要的原理就是針對(duì)生物體外的特定DNA分子鏈進(jìn)行高效擴(kuò)增，將微量的DNA大幅增加。就是通過(guò)人為控制體外合成系統(tǒng)的溫度，使雙鏈DNA變成單鏈DNA，單鏈DNA與人工合成的引物配對(duì)，形成部分雙鏈，在DNA聚合酶的催化下使引物沿著單鏈模板延伸為雙鏈DNA。由于其在食品的致病菌檢驗(yàn)過(guò)程中具有特異、敏感的特點(diǎn)，因此在食品的檢驗(yàn)中具有廣泛的應(yīng)用潛力。

對(duì)單核細(xì)胞增多癥李氏桿菌的應(yīng)用

Deneer 等人采用PCR技術(shù)對(duì)食品中李氏桿菌的溶血基因進(jìn)行擴(kuò)增，不僅檢驗(yàn)用時(shí)短，并且樣品中只需含有少量細(xì)菌即可被檢出。

對(duì)沙門(mén)氏菌的應(yīng)用

Nguyen 等人根據(jù)沙門(mén)氏菌某段克隆株具有的屬特異性序列設(shè)計(jì)出一對(duì)引物,能快速地檢出肉食品標(biāo)本中的沙門(mén)氏菌，檢測(cè)的敏感性和特異性很高，保證了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

PCR技術(shù)應(yīng)用雖然可以準(zhǔn)確地檢測(cè)到食品中的致病菌，提高食品安全、食品質(zhì)量，但是 目前還是有較大的弊端，主要在于不能正確地對(duì)該項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行規(guī)范性的操作，導(dǎo)致結(jié)果差異很大，降低其方法的靈敏度和特異性。盡管如此，相信隨著經(jīng)濟(jì)不斷的發(fā)展，技術(shù)不斷的創(chuàng)新、普及與發(fā)展，PCR技術(shù)會(huì)在食品檢測(cè)中會(huì)得到更多地應(yīng)用。

結(jié)語(yǔ)

本文對(duì)兩種生物技術(shù)的詳細(xì)介紹，尤其是核酸探針技術(shù)和PCR技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的重要性和優(yōu)缺點(diǎn)，這兩種技術(shù)雖然存在著一定的缺陷，但是它們?cè)谑称窓z驗(yàn)中有很高的應(yīng)用價(jià)值，我國(guó)還是應(yīng)該加大投入力度，重視管理，使其為我國(guó)將來(lái)食品安全提供重要的保障。