枸杞炭疽病防治藥劑篩選

劉永剛,　李佳佳,　李昭煜,　申培增,　張海英,　張新瑞*

(1. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所, 蘭州　730070; 2.甘肅省白銀市農(nóng)技中心, 白銀　730900)

?

枸杞炭疽病防治藥劑篩選

劉永剛1,李佳佳1,李昭煜1,申培增2,張海英1,張新瑞1*

(1. 甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所, 蘭州730070; 2.甘肅省白銀市農(nóng)技中心, 白銀730900)

本試驗(yàn)分別采用抑菌圈法和孢子萌發(fā)法測定了枸杞炭疽病菌對19種藥劑的敏感性以及各種藥劑對孢子萌發(fā)的抑制作用。對篩選出的10種藥劑進(jìn)行田間藥效試驗(yàn),結(jié)果表明:430 g/L戊唑醇SC 3 000倍液、60%唑醚·代森聯(lián)WG 2 000倍液、450 g/L咪鮮胺EW 1 200倍液、40%氟硅唑EC 6 000倍液對枸杞炭疽病7 d的治療效果和預(yù)防效果均在70%以上。

枸杞;膠孢炭疽菌;殺菌劑;毒力;田間藥效

枸杞炭疽病又名枸杞黑果病,是由膠孢炭疽菌[Colletotrichumgloeosporioides(Penz.)Sacc.]引起的枸杞生產(chǎn)上的一種常見病害[1-2]。枸杞炭疽病菌主要危害枸杞青果,在枸杞產(chǎn)區(qū)造成毀滅性危害。當(dāng)前化學(xué)防治仍然是控制該病害的主要手段,有關(guān)殺菌劑對膠孢炭疽菌毒力測定的研究報道較多[3-8],但膠孢炭疽菌可在470多屬寄主植物上引起炭疽病,且其遺傳多樣性豐富,變異類型多;有關(guān)殺菌劑對枸杞炭疽病防治的研究雖已有報道[9-12],但篩選的藥劑種類有限,且多為室內(nèi)的毒力測定結(jié)果。本試驗(yàn)針對枸杞炭疽病菌選擇了19種藥劑,室內(nèi)測定各種藥劑對菌絲生長及孢子萌發(fā)的抑制作用,在室內(nèi)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上篩選出了10種藥劑進(jìn)行田間藥效試驗(yàn),并設(shè)計了先接種病原菌后噴藥和先噴藥后接種病原菌兩個處理。以期篩選出對枸杞炭疽病高效的殺菌劑及其適宜的施用時間。

1　材料與方法

1.1供試菌種

枸杞炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)由甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所分離鑒定。

1.2供試藥劑

60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑(巴斯夫歐洲公司);450 g/L咪鮮胺水乳劑(河北省農(nóng)藥化工有限公司);400 g/L氟硅唑乳油、300 g/L苯甲·丙環(huán)唑乳油(永農(nóng)生物科學(xué)有限公司);430 g/L戊唑醇懸浮劑、80%代森錳鋅可濕性粉劑、250 g/L苯醚甲環(huán)唑乳油、12.5%腈菌唑乳油(華北制藥集團(tuán)愛諾有限公司);50%異菌脲可濕性粉劑(天津市漢邦植物保護(hù)劑有限公司); 50%多菌靈可濕性粉劑(爾福農(nóng)藥廠);70%甲基硫菌靈可濕性粉劑、250 g/L嘧菌酯懸浮劑(美國默賽技術(shù)公司);3%多抗霉素可濕性粉劑、33.5%喹啉銅懸浮劑(興農(nóng)股份有限公司);75%百菌清可濕性粉劑(上海亞泰農(nóng)資有限公司); 103億活芽胞/g枯草芽胞桿菌可濕性粉劑、24%井岡霉素水劑、2%嘧啶核苷類抗菌素水劑(武漢科諾生物科技股份有限公司);2%春雷霉素水劑(日本北興化學(xué)工業(yè)株式會社)。

1.3藥劑對菌絲生長的抑制作用

將供試藥劑按推薦濃度設(shè)定6個濃度梯度,采用濾紙片法[10]。將病原菌接種到PDA培養(yǎng)基上,置于25℃、連續(xù)光照條件下培養(yǎng)10 d左右,挑取橘紅色的分生孢子團(tuán)用無菌水稀釋,制成10倍鏡下每視野50～60個孢子的懸浮液。

培養(yǎng)皿中加入500 μL配好的孢子懸浮液,然后將冷卻到45℃左右的PDA培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿內(nèi),與孢子懸浮液充分混勻,制備含菌培養(yǎng)基,待冷卻后每個培養(yǎng)皿放置1枚浸有不同濃度藥液的直徑為6 mm的濾紙片,每個處理重復(fù)3次,置于培養(yǎng)箱中25℃培養(yǎng),以浸有無菌水的濾紙片為對照,6 d后用十字交叉法測量抑菌圈直徑,抑菌圈直徑越大表明病菌對該殺菌劑越敏感[13],通過稀釋倍數(shù)與抑菌圈的大小初步篩選出抑菌較好的藥劑。

1.4藥劑對孢子萌發(fā)的抑制作用

采用孢子萌發(fā)法[14],用配好的孢子懸浮液將各藥劑稀釋成一定的濃度梯度,滴在載玻片上,每處理重復(fù)3次,置于25℃恒溫箱中保濕培養(yǎng),24 h后鏡檢孢子萌發(fā)情況,以芽管長度大于孢子最大長度的一半為萌發(fā),每個處理隨機(jī)鏡檢100個分生孢子,記載孢子萌發(fā)數(shù),計算孢子萌發(fā)率,并計算孢子萌發(fā)抑制率。

求出每個處理3次重復(fù)的平均值,及孢子萌發(fā)抑制率的幾率值(y)與藥劑濃度的對數(shù)值(x)之間的毒力回歸方程,計算相關(guān)系數(shù)、EC50,比較供試的10種藥劑對孢子的毒力大小。

孢子萌發(fā)抑制率(%)=

1.5田間藥效試驗(yàn)

田間藥效試驗(yàn)在甘肅省靖遠(yuǎn)縣五合鄉(xiāng)白茨林村苗圃地進(jìn)行。根據(jù)室內(nèi)抑菌結(jié)果,篩選出10種效果較明顯的藥劑(表3)。每種藥劑設(shè)2種不同的稀釋倍數(shù),每處理設(shè)3個重復(fù),以清水為對照。具體設(shè)計如下:

(1) 治療作用:先接種病原菌后噴藥。選擇20 cm左右的枝條,對上面的青果(20個左右)進(jìn)行針刺處理后噴施10 mL左右孢子懸浮液(10倍鏡下每視野200個左右),以清水為對照,套上保鮮袋保濕12 h,再噴施10 mL左右各處理藥劑。7、10 d后調(diào)查發(fā)病情況,計算病情指數(shù)及防效。

(2) 預(yù)防作用:先噴藥后接種病原菌。選擇20 cm左右的枝條,對上面的青果(20個左右)進(jìn)行針刺處理,先噴施10 mL左右各處理藥劑,12 h后,再噴施10 mL左右孢子懸浮液(10倍鏡下每視野200個左右),套上保鮮袋保濕12 h,以清水為對照。7、10 d后調(diào)查發(fā)病情況,并計算病情指數(shù)及防效。

枸杞炭疽病分級標(biāo)準(zhǔn)[15],0級:果實(shí)表面?zhèn)谟?不擴(kuò)展;1級:果實(shí)表面(0～1/8]變黑;2級:果實(shí)表面(1/8～1/4]變黑;3級:果實(shí)表面(1/4～1/2]變黑;4級:果實(shí)表面1/2以上變黑。

防治效果(%)=

2　結(jié)果與分析

2.1病原菌對10種藥劑的敏感性比較

供試的19種藥劑中,有10種藥劑對枸杞炭疽病菌有抑制作用(表1),其他藥劑無抑菌作用。50%多菌靈WP、40%氟硅唑EC和450 g/L咪鮮胺EW的抑菌圈相對較大,300 g/L苯甲·丙環(huán)唑EC、25%苯醚甲環(huán)唑EC、430 g/L戊唑醇SC、50%異菌脲WP、70%甲基硫菌靈WP和80%代森錳鋅WP的抑菌圈較小,60%唑醚·代森聯(lián)WG的抑菌圈最小。

2.210種藥劑對孢子萌發(fā)的抑制作用

將毒力最小的60%唑醚·代森聯(lián)WG毒力倍數(shù)設(shè)為1,10種藥劑對孢子萌發(fā)的抑制作用有較大的差異(表2),其中40%氟硅唑EC的抑制作用最強(qiáng),EC50為0.061 5 mg/mL,為60%唑醚·代森聯(lián)WG的10.56倍;其次為430 g/L戊唑醇SC和50%異菌脲WP,EC50分別為0.109 6和0.194 1 mg/mL,為60%唑醚·代森聯(lián)WG的5.92和3.34倍。

表1　菌絲生長對10種藥劑的敏感性1)Table 1　Sensitivity of the mycelia growth of Colletotrichum gloeosporioides to 10 fungicides

1) 表中各數(shù)值為3次重復(fù)的平均值,不同的小寫字母代表在0.05水平具有顯著差異。下同。

Data in the table are the mean value of 3 replicates. Different small letters in the same column indicate significant difference at 0.05 level.The same below.

表2　10種殺菌劑對枸杞炭疽病菌孢子萌發(fā)的抑制作用Table 2　Toxicity of 10 fungicides to conidia of Colletotrichum gloeosporioides

2.3藥劑田間防治試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1治療作用試驗(yàn)結(jié)果

田間治療試驗(yàn)結(jié)果表明(表3):450 g/L咪鮮胺EW、430 g/L戊唑醇SC以及60%唑醚·代森聯(lián)WG在兩個稀釋倍數(shù)下7 d均有較好的防效,且防效均在70%以上,10 d防效58%以上,持效期長;70%甲基硫菌靈WP、50%多菌靈WP、80%代森錳鋅WP、50%異菌脲WP、25%苯醚甲環(huán)唑EC和300 g/L苯甲·丙環(huán)唑EC以較小倍數(shù)稀釋時7 d均有一定的防效,10 d的防效均較差,它們以較大倍數(shù)稀釋時7 d和10 d的防效均較小;40%氟硅唑EC 6 000倍液在施藥7 d和10 d的防效分別為75.38%和53.09%,9 000倍液7 d和10 d的防效均較差。

2.3.2藥劑預(yù)防作用試驗(yàn)結(jié)果

田間預(yù)防試驗(yàn)結(jié)果表明(表4):430 g/L戊唑醇SC和60%唑醚·代森聯(lián)WG、450 g/L咪鮮胺EW在兩個稀釋倍數(shù)下的防效均較好,前兩者在85%以上,后者在53%以上。50%異菌脲WP、25%苯醚甲環(huán)唑EC、300 g/L苯甲·丙環(huán)唑EC和70%甲基硫菌靈WP在較小稀釋倍數(shù)下7 d的防效較好,均在53%以上,在較大稀釋倍數(shù)下的防效則較差;40%氟硅唑EC 6 000倍液7 d和10 d的防效分別為76.26%和74.55%,9 000倍液的防效則較差;50%多菌靈WP和80%代森錳鋅WP兩個稀釋倍數(shù)下的防效均較差,最高僅為28.57%。

表3　治療試驗(yàn)中10種藥劑對枸杞炭疽病的田間防治效果Table 3　Field control efficacy of 10 fungicides to Colletotrichum gloeosporioides in treatment trials

表4　 預(yù)防試驗(yàn)中10種藥劑對枸杞炭疽病的田間防治效果Table 4　Field control efficacy of 10 fungicides to Colletotrichum gloeosporioides in prevention trials

續(xù)表4Table 4(Continued)

藥劑Fungicide稀釋倍數(shù)/倍Dilutionratio7d病情指數(shù)Diseaseindex防治效果/%Controlefficacy10d病情指數(shù)Diseaseindex防治效果/%Controlefficacy25%苯醚甲環(huán)唑EC25%DifenoconazoleEC10000.354658.78cde0.865913.41e20000.672221.22g0.96773.23fg300g/L苯甲·丙環(huán)唑EC300g/LDifenoconazole·propiconazoleEC5000.321762.60cd0.872512.75ef10000.598830.39e1.00000.00g70%甲基硫菌靈WP70%Thiophanate-methylWP5000.402353.23cdef0.93166.84fg10000.483343.82d0.93726.28fg50%多菌靈WP50%CarbendazimWP5000.629226.85efg0.93066.94fg10000.679820.97g0.98431.57g80%代森錳鋅WP80%MancozebWP5000.614428.57ef0.888911.11efg10000.625027.34ef0.91198.81fCK—0.8602—1 —

3　結(jié)論與討論

本試驗(yàn)篩選出430 g/L戊唑醇SC、60%唑醚·代森聯(lián)WG、450 g/L咪鮮胺EW、40%氟硅唑EC、50%異菌脲WP、25%苯醚甲環(huán)唑EC、300 g/L苯甲·丙環(huán)唑EC、70%甲基硫菌靈WP、50%多菌靈WP、80%代森錳鋅WP 10種藥劑進(jìn)行田間防治試驗(yàn),結(jié)果顯示430 g/L戊唑醇SC、60%唑醚·代森聯(lián)WG、450 g/L咪鮮胺EW、40%氟硅唑EC 4種藥劑對枸杞炭疽病具有非常好的預(yù)防和治療效果。可在枸杞炭疽病防治中選用。本試驗(yàn)篩選出的防效較好的4種藥劑中,40%氟硅唑EC的防治效果與張麗榮等[11]報道的防治效果基本一致,430 g/L戊唑醇SC、60%唑醚·代森聯(lián)WG和450 g/L咪鮮胺EW在以往的枸杞炭疽病化學(xué)防治中均未見報道,其中60%唑醚·代森聯(lián)WG是首次發(fā)現(xiàn)對膠孢炭疽菌有較好的抑菌效果。

在整個藥劑篩選過程中發(fā)現(xiàn)室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果和田間試驗(yàn)結(jié)果并不完全一致,例如50%多菌靈WP對孢子萌發(fā)的抑制作用較好,但是田間防治結(jié)果卻不是很好,而60%唑醚·代森聯(lián)WG對孢子萌發(fā)抑制作用最小,而田間試驗(yàn)1 000倍液7 d的防效均在80%以上,10 d的防效也在70%以上。這說明在藥劑篩選過程中需要將室內(nèi)試驗(yàn)和田間試驗(yàn)相結(jié)合。另外,在設(shè)計田間試驗(yàn)時,先對青果進(jìn)行孢子懸浮液接種,以保證發(fā)病的一致性;噴施的每種藥劑都設(shè)計了2個濃度,以期篩選出用量少、效果好的藥劑;根據(jù)施藥的時間設(shè)計了治療和預(yù)防兩種處理,以期確定最佳的施藥時間。在2個濃度中,濃度大的防效相對較好,但是綜合考慮到農(nóng)藥殘留和防治成本,篩選出了430 g/L戊唑醇SC、60%唑醚·代森聯(lián)WG、450 g/L咪鮮胺EW、40%氟硅唑EC 4種藥劑,建議根據(jù)病害發(fā)生程度選擇藥劑的使用濃度,并交替使用不同種類藥劑,避免產(chǎn)生抗藥性。

[1]曲嶺,焦恩寧,張宗山.枸杞炭疽病研究進(jìn)展[J].北方園藝,2011(20):195-199.

[2]張錦秀,李巖濤,楊寶勝,等.枸杞炭疽病病原菌鑒定[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技,1991(2):34.

[3]曲健祿,武海斌,范昆,等.柿樹炭疽病菌的生物學(xué)特性及幾種殺菌劑對其的抑制作用[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報, 2012, 14(5): 503-509.

[4]范昆,張雪丹,余賢美,等.無花果炭疽病菌的生物學(xué)特性及8種殺菌劑對其抑制作用[J].植物病理學(xué)報, 2013, 43(1): 75-81.

[5]劉霞,楊克強(qiáng),朱玉鳳,等.8種殺菌劑對核桃炭疽病病原菌膠孢炭疽菌的室內(nèi)毒力[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報, 2013, 15(4): 412-420.

[6]張胡煥,謝藝賢,蒲金基,等.常用殺菌劑及其混劑對芒果炭疽病菌的毒力測定[J].農(nóng)藥,2010, 49(1): 64-68.

[7]凌金鋒,彭埃天,宋曉兵,等.17種殺菌劑對貢柑炭疽病菌的生物活性測定研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010(1): 72-76.

[8]楊成德,姜紅霞,陳秀蓉,等.甘肅省馬鈴薯炭疽病的鑒定及室內(nèi)藥劑篩選[J].植物保護(hù),2012, 38(6): 127-133.

[9]李巖濤, 張錦秀,鄧振榮,等.枸杞炭疽病發(fā)生規(guī)律及防治對策研究[J].內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院學(xué)報,1992, 13(3): 64-70.

[10]張錦秀, 李巖濤,楊寶勝,等.枸杞炭疽病化學(xué)防治研究[J].內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院學(xué)報,1993,14(1): 31-34.

[11]張麗榮,張宗山,劉靜.枸杞炭疽病室內(nèi)藥劑篩選及田間藥效防治試驗(yàn)[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2007,6(6): 47-49.

[12]孫海霞,何嘉,張蓉,等.9種殺菌劑對枸杞炭疽病菌的室內(nèi)毒力測定[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013, 41(12): 139-141.

[13]白慶榮,呂來燕,翟亞娟,等.玉米葉斑病菌對23種殺菌劑敏感性測定[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2011(7):81-85.

[14]溫少華,晏立英,方先蘭,等.五種殺菌劑對花生褐斑病菌室內(nèi)毒力的影響和田間藥效[J].中國油料作物學(xué)報,2012,34(4):433-437.

[15]張曉煜,張磊,劉靜,等.寧夏枸杞炭疽病發(fā)生流行的氣象條件分析[J].干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究,2007,25(1):181-184.

(責(zé)任編輯：王音)

Screening of fungicides forColletotrichumgloeosporioidescontrol

Liu Yonggang1,Li Jiajia1,Li Zhaoyu1,Shen Peizeng2,Zhang Haiying1,Zhang Xinrui1

(1. Institute of Plant Protection, Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou730070, China;2. Baiyin Agricultural Technology Service Center of Gansu Province, Baiyin730900, China)

Sensitivity ofColletotrichumgloeosporioidesto 19 fungicides was tested by inhibition zone method. The inhibition activity of the fungicides on spore germination was also determined. Field trials demonstrated that the control and prevent efficacy of 430 g/L tebuconazole SC (3 000×), 60% pyraclostrobin·metiram WG (2 000×), 450 g/L prochloraz EW (1 200×) and 40% flusilazole EC (6 000×) againstC.gloeosporioides, were all more than 70%.

Chinese wolfberry;Colletotrichumgloeosporioides;fungicide;toxicity;field efficacy

2014-11-18

2015-02-18

甘肅中藥產(chǎn)業(yè)科技攻關(guān)項(xiàng)目(GYC12-03, GYC11-02)

E-mail:zhxinrui@sohu.com

S 482.2

B

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.01.043