地黃與白芍合煎及單煎對(duì)有效成分梓醇溶出量的影響

陳麗萍，李茂星，周珺蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院藥材科，全軍高原環(huán)境損傷防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730050

地黃與白芍合煎及單煎對(duì)有效成分梓醇溶出量的影響

陳麗萍，李茂星，周珺
蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院藥材科，全軍高原環(huán)境損傷防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730050

目的 比較地黃單煎及其與白芍合煎液中有效成分梓醇含量的變化，初步探索2味中藥配伍的變化規(guī)律。方法 采用高效液相色譜法，選用Waters symmetry C18色譜柱（4.6 mm×150 mm， 5 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.01%磷酸水等度洗脫系統(tǒng)，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，柱溫25 ℃。結(jié)果 梓醇的回歸方程為Y=270 054X-57 724，r=0.999 6，在 0.225～7.2 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為 101.15%，RSD=0.39%。地黃-白芍合煎液中梓醇含量比地黃單煎液平均升高18.66%。結(jié)論 地黃-白芍合煎液中梓醇含量比單煎液高，合煎更有助于有效成分的溶出，二者配伍具有一定的合理性。

地黃；白芍；梓醇；單煎；合煎；高效液相色譜法

DOl：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.09.023

地黃為玄參科植物地黃 Rehmannia glutinosa Libosch.的新鮮或干燥塊根，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品。地黃的化學(xué)成分主要有環(huán)烯醚萜苷類、糖類、倍半萜類和苯乙醇苷等［1］。梓醇是地黃中含量最高的環(huán)烯醚苷類成分［2］，為極性結(jié)構(gòu)，易溶于水，對(duì)老年癡呆、帕金森病、腦缺血、糖尿病及其并發(fā)癥有一定預(yù)防和治療作用［3-4］。白芍為毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，主要含有芍藥苷等有效成分，用于治療陰虛發(fā)熱、月經(jīng)不調(diào)等。中藥配伍應(yīng)用是中醫(yī)藥理論的精髓之一。深入研究藥對(duì)配伍后主要活性成分的變化，有助于復(fù)方藥效基礎(chǔ)的剖析與理解。地黃、白芍為常用涼血滋陰藥對(duì)，屬相使為用。早在《仙授理傷續(xù)斷秘方》中即有將該藥對(duì)用于四物湯的記載。統(tǒng)計(jì)表明，與地黃配伍的1034首方劑，在配伍的前30位高頻藥中，白芍居第3位［5］。

近年來(lái)，配方顆粒以免于煎煮、使用方便的優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越受到醫(yī)藥界及患者的推崇。但是否所有的中藥復(fù)方均可以配方顆粒來(lái)替代傳統(tǒng)湯劑，則成為學(xué)術(shù)界爭(zhēng)論的焦點(diǎn)。中藥湯劑在煎煮過(guò)程中，藥味成分相互影響，可能會(huì)存在化學(xué)成分之間的化合、絡(luò)合、共溶等相互作用和動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)化過(guò)程，引起藥效成分、毒性、功效等一系列的變化，尤其是有效成分的提取率變化各異［6-8］。配方顆粒是以單味飲片為原料，經(jīng)過(guò)提取、濃縮等現(xiàn)代技術(shù)制成，其先煎后混的調(diào)配方法、有效成分、組分溶出度等均與飲片單煎基本一致［9］。目前，對(duì)于常用藥對(duì)單煎、合煎后藥效成分的差異性研究越來(lái)越多，但尚未見(jiàn)有關(guān)地黃-白芍的研究報(bào)道。因此，本研究測(cè)定地黃單煎及其與白芍合煎液中的有效成分梓醇的含量，探討不同調(diào)配方法對(duì)藥物組分溶出量的影響，旨在為中藥配伍和組方原理的研究提供依據(jù)，為配方顆粒的合理使用提供參考。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，Waters 996紫外檢測(cè)器，Waters 600泵；Mettler AE 240電子分析天平（瑞典），Thermo Sorvall Legend Micro 17型電動(dòng)離心機(jī)，KQ-100A超聲波清洗機(jī)（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）。

梓醇對(duì)照品（純度＞98%，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)0302-201504）；生地黃飲片（產(chǎn)地河南，批號(hào)20150501）、白芍飲片（產(chǎn)地杭州，批號(hào)20150306）均由蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院中藥房提供，經(jīng)蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院藥材科李茂星博士鑒定，為玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥塊根和毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。乙腈（色譜純，SK Chemicals Korea），磷酸（分析純，天津科密歐化學(xué)試劑公司），滅菌注射用水（四川科倫藥業(yè)股份有限公司），自制超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

Waters Symmetry C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99），流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃，進(jìn)樣量10 μL。理論塔板數(shù)按梓醇計(jì)不低于5000。在此條件下記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。

圖1　地黃單煎液及其與白芍合煎液中梓醇HPLC圖

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取梓醇對(duì)照品0.004 5 g，置于10 mL容量瓶中，用滅菌注射用水溶解，并定容至刻度，配制成0.45 mg/mL對(duì)照品溶液，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，置于冰箱4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3供試品溶液的制備

稱取低溫烘干至恒重的生地黃飲片10 g，粉碎至粒徑為40目。水煎煮2次，第1次用10倍量水浸泡30 min后煎煮2 h，第2次用8倍量水煎煮1 h，合并2次煎煮液，并定容至250 mL容量瓶中，即得地黃單煎液，置于冰箱4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

稱取低溫烘干至恒重的生地黃飲片、白芍飲片各10 g，粉碎至粒徑為40目。按上述方法煎煮，并定容至500 mL容量瓶中，即得地黃白芍合煎液，置于冰箱4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

分別吸取一定量各煎液于離心管中，8000 r/min離心5 min，吸取上清液，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣測(cè)定。分別按各煎液定容體積折算為等量藥材同體積煎液的梓醇含量。

2.4線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液0.5、1、2、4、8、16 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=270 054X-57 724，r=0.999 6，表明對(duì)照品在0.225～7.2 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

取地黃白芍合煎液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，測(cè)定梓醇峰面積積分值，RSD=1.26%，表明儀器精密度良好。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

取等量地黃、白芍飲片各6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10 μL檢測(cè)分析，結(jié)果單煎液、合煎液中梓醇含量RSD分別為1.15%、1.03%，表明本法重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別放置0、4、6、8、12、24 h后進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果單煎液、合煎液中梓醇含量RSD分別為1.05%、1.21%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

取已知梓醇含量的地黃白芍合煎液6份，精密加入梓醇對(duì)照品溶液適量，在上述色譜條件下測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果平均加樣回收率為101.15%，RSD= 0.39%，見(jiàn)表1。

表1　梓醇加樣回收率試驗(yàn)

2.9樣品含量測(cè)定

分別取生地黃、白芍飲片，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。每個(gè)樣品連續(xù)進(jìn)樣3次，測(cè)定單煎液、合煎液中梓醇溶出量（見(jiàn)表 2）。計(jì)算溶出量變化率［（合煎液中溶出量-單煎液中溶出量）÷單煎液中溶出量×100%］。結(jié)果顯示，梓醇在地黃單煎液中含量低于其在合煎液中的含量，溶出量變化率為18.64%，表明2味藥合煎有利于其有效成分梓醇的溶出。

表2　地黃單煎液及其與白芍合煎液中梓醇溶出量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

藥對(duì)研究已成為中藥研究的熱點(diǎn)之一，現(xiàn)代研究逐步從藥效成分的溶出增加、毒物吸附及共沉淀等多角度解釋藥對(duì)的作用機(jī)理。本研究顯示，與單煎液相比，合煎液中梓醇溶出量明顯提高，提示在合煎過(guò)程中可能存在助溶作用。梓醇屬環(huán)烯醚萜苷類，白芍主要有效成分芍藥苷為雙環(huán)單萜苷，兩者均屬于單萜苷類成分。地黃白芍配伍后梓醇溶出量顯著增加，說(shuō)明地黃-白芍藥對(duì)化學(xué)層面配伍的協(xié)同增效作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，在其他條件相同的情況下，中藥化學(xué)成分的溶出度與調(diào)配方法存在一定相關(guān)性。因此，中藥配方顆粒不能完全替代傳統(tǒng)中藥湯劑。若能將一些常用經(jīng)典藥對(duì)制成免煎顆粒，在臨床應(yīng)用中將更具有實(shí)際操作的可行性。

中藥湯劑通常用水來(lái)煎煮，本研究供試品溶液亦選擇水煎液。但在實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)2個(gè)問(wèn)題：其一，水煎液含雜質(zhì)較多；其二，除芍藥苷外，白芍還含有糖、淀粉、黏液質(zhì)等多種成分，與地黃合煎后的濾液質(zhì)地較為黏稠，直接過(guò)濾比較困難。因此，試驗(yàn)中將水煎液用8000 r/min高速離心5 min，取其上清液，再以微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣，梓醇與其他組分可得到有效分離，峰形良好且穩(wěn)定。

［1］楊彥飛.地黃活性物質(zhì)與功能研究［D］.北京：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2013.

［2］吉雪琪，孫鵬，祁建軍，等.地黃生長(zhǎng)期根葉中梓醇及總環(huán)烯醚萜苷含量變化［J］.中國(guó)中藥雜志，2014，39（3）：466-470.

［3］XU G， XIONG Z， YONG Y， et al. Catalpol attenuates MPTP induced neuronal degeneration of nigral-striatal dopaminergic pathway in mice through elevating glial cell derived neurotrophic factor in striatum［J］. Neuroscience，2010，167（1）：174-184.

［4］董炤，陳長(zhǎng)勛.梓醇藥理作用的研究進(jìn)展［J］.中成藥，2013，35（5）：1047-1051.

［5］李衛(wèi)民，李衛(wèi)紅.方劑中生地黃配伍規(guī)律的研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26（3）：483-485.

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［7］王彬，韓剛，張學(xué)俊，等.大黃甘草湯單煎液與合煎液中蒽醌類化合物和甘草酸煎出量的變化［J］.中成藥，2010，32（10）：1794-1796.

［8］劉立，段金廒，朱振華，等.當(dāng)歸-紅花藥物組合效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)研究［J］.中草藥，2011，42（5）：929-934.

［9］魏飛，石維，魏睦新.黃芩柴胡分煎合煎色譜組分的對(duì)比研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26（11）：2427-2429.

Effects of Decocting Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix Alba Single and Mixed on Dissolving-out Quantity of Catalpol

CHEN Li-ping， LI Mao-xing， ZHOU Jun （Department of Pharmacy，Lanzhou General Hospital of PLA； Key Laboratory of Prevention and Cure for Plateau Environment Damage， PLA，Lanzhou 730050， China）

Objective To compare the content variation of catalpol between single and mixed decocting Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix alba； To preliminarily explore the variation rules of compatibility of Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix alba. Methods HPLC method was used with Waters Symmetry C18column （4.6 mm×150 mm， 5 μm）， flow rate of 1.0 mL/min， detection wavelength of 210 nm， column temperature at 25 ℃. The mobile phase was acetonitrile-0.01% phosphoric acid in water isocratic elution system. Results Catalpol regression equation was Y=270 054X-57 724， r=0.999 6， showing good linear range among 0.225-7.2 μg. The average recovery rate was 101.15%， RSD=0.39%. The average content of catalpol in the mixed decoction of Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix alba was 18.66% more than the single decoction of Rehmanniae Radix. Conclusion The content of catalpol in mixed decoction is higher than the single decoction of Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix alba. The mixed decoction is favorable for the dissolving of catalpol from the medicine. The compatibility of Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix alba is rational.

Rehmanniae Radix； Paeoniae Radix alba； catalpol； single decoction； mixed decoction； HPLC

R284.1

A

1005-5304（2016）09-0096-03

國(guó)家自然科學(xué)基金（30672643、30472186、30772773）；甘肅省自然科學(xué)基金（3ZS051-A25-078）

李茂星，E-mail：Limaox2005@aliyun.com

2015-12-09；編輯：陳靜）