錫類散栓劑對大鼠宮頸炎治療作用的實驗研究

吳芊，崔人勻，托托，肖伊，黃羚，劉豫玥，劉錦林，牟天龍，潘彥舒.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 0009；.北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院，北京 00078；.北京中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，北京 0009

錫類散栓劑對大鼠宮頸炎治療作用的實驗研究

吳芊1，崔人勻1，托托1，肖伊1，黃羚1，劉豫玥2，劉錦林1，牟天龍2，潘彥舒3
1.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院，北京 100078；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，北京 100029

目的 基于“異病同治”理論探討錫類散栓劑對大鼠宮頸炎的治療作用。方法 采用陰道灌注苯酚膠漿制作大鼠宮頸炎模型。實驗大鼠隨機分為正常組、模型組、陽性藥組和錫類散低、中、高劑量組。造模結(jié)束后次日錫類散栓劑陰道給藥，連續(xù)10 d，血常規(guī)分析儀檢測大鼠血液中性粒細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞總數(shù)，HE染色行宮頸病理組織學(xué)檢查。結(jié)果 與正常組比較，模型組中性粒細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞總數(shù)顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，錫類散低劑量組血液中性粒細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），大鼠宮頸黏膜上皮炎癥及組織損傷均明顯減輕；錫類散中劑量組血液中性粒細(xì)胞數(shù)有降低趨勢（P＞0.05），白細(xì)胞總數(shù)無明顯變化；錫類散高劑量組血液中性粒細(xì)胞數(shù)顯著升高（P＜0.01），白細(xì)胞總數(shù)有升高趨勢（P＞0.05）；陽性藥組血液中性粒細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞總數(shù)顯著降低（P＜0.01），大鼠宮頸黏膜上皮炎癥及組織損傷均明顯減輕。結(jié)論 錫類散可減輕大鼠宮頸炎癥損傷，修復(fù)受損宮頸黏膜，具有異病同治的作用。

錫類散；栓劑；宮頸炎；異病同治；大鼠

DOl：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.09.020

錫類散源于清?尤在涇《金匱翼?卷五》中的爛喉痧方，由象牙屑、牛黃、青黛、冰片等7味藥組成，主治咽喉紅腫糜爛、唇舌腫痛等癥?？谇粷兊闹嗅t(yī)病機是濕熱火毒上炎、氣血郁滯、血瘀肉腐，同為以黏膜損傷為主要病變的宮頸炎屬中醫(yī)學(xué)“帶下病”范疇，多因濕熱毒邪下侵、氣血郁滯、血瘀肉腐而成。從中醫(yī)學(xué)理論角度闡釋口腔潰瘍與宮頸炎病機具有一些共同特點，均為濕毒熱毒侵襲、氣血郁滯、血瘀肉腐所致。因此，我們根據(jù)“異病同治”的辨證思想，結(jié)合上述理論探索及文獻(xiàn)研究，提出如下假說：錫類散對宮頸炎同樣可能發(fā)揮抗炎作用，能夠加速修復(fù)宮頸黏膜，可以運用于宮頸炎的治療。此外，為使藥物更適合臨床使用，將錫類散傳統(tǒng)粉劑創(chuàng)新性地改良為栓劑，采用陰道灌注苯酚膠漿制作大鼠宮頸炎模型，觀察其對大鼠宮頸炎治療作用。

1 實驗材料

1.1動物

清潔級SD雌性大鼠75只，體質(zhì)量170～240 g，7～12周齡，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證號SCXK（京）2012-0001。飼養(yǎng)于清潔級動物房，室溫23～25 ℃，相對濕度50%～70%。

1.2藥物及制備

錫類散，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號1309412；半合成脂肪酸酯，上海雷虹工貿(mào)有限公司，批號140801；聚甲酚磺醛栓，湖北東信藥業(yè)有限公司，批號20140610。實驗用栓制備：參照《中藥藥劑學(xué)》［1］進(jìn)行重量轉(zhuǎn)換，按照栓劑制作法中熱熔法，選取半合成脂肪酸酯作為基質(zhì)，置于發(fā)皿中水浴加熱，待2/3基質(zhì)熔化時停止加熱，攪拌使全熔；稱取錫類散分次加入熔化的基質(zhì)中，不斷攪拌使藥物均勻分散，待此混合物呈黏稠狀態(tài)時，灌入已涂有潤滑劑的實驗動物硅膠栓劑模具內(nèi)，冷卻凝固后削去?？谏弦绯霾糠?，脫模，制成黃豆大小的鴨嘴形栓劑備用。實驗用栓分為低劑量藥栓（錫類散含量0.17 mg/粒）、中劑量藥栓（錫類散含量0.34 mg/粒）、高劑量藥栓（錫類散含量0.68 mg/粒）、基質(zhì)栓（無藥物）和陽性對照藥物栓（聚甲酚磺醛含量0.45 mg/粒），規(guī)格0.3 g/粒。

1.3試劑

水合三氯乙醛，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；醫(yī)用生理鹽水，大冢制藥有限公司；阿拉伯樹膠粉，天津市福晨化學(xué)試劑廠；苯酚，Amresco；二甲苯，北京化工廠；無水乙醇，北京化工廠；蘇木素，中杉金橋；伊紅，Coolaber；氨水，Biotopped；25%苯酚膠漿（精密稱取苯酚1.25 g、阿拉伯樹膠粉3.75 g，溶于蒸餾水5 mL中制成膠漿）。

1.4儀器

XI-800型全自動血液分析儀，希斯美康公司；R320型臺式冷凍低速離心機，北京白洋淀醫(yī)療器械有限公司；YP601N型電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司；HHW-420型小型三用水箱，北京醫(yī)療設(shè)備廠。

2 實驗方法

2.1造模

大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.4 mL/100 g）麻醉，仰臥位固定，先將0.5 mL玻璃注射器針?biāo)ㄝp輕插入大鼠宮頸內(nèi)，進(jìn)入即止，約3～4 mm，并向其中緩慢注入25%苯酚膠漿0.15 mL，注入同時緩慢撤針，而后將大鼠頭低尾高體位傾斜放置，5 min后放回籠內(nèi)，隔日1次，共5次［2］。大鼠陰道有黃白色分泌物，陰道壁充血、紅腫，表示造模成功。

2.2分組及給藥

50只成模大鼠隨機分為模型組、陽性藥組和錫類散低、中、高劑量組，每組10只，另取未造模大鼠8只作為正常組。正常組和模型組給予基質(zhì)栓，錫類散低、中、高劑量組分別給予低、中、高劑量藥栓，陽性藥組給予陽性對照藥物栓。以栓劑進(jìn)入陰道深部近宮頸口處為準(zhǔn)，每日1次，每次1粒，連續(xù)10 d。

2.3一般狀況觀察

觀察大鼠體質(zhì)量、毛發(fā)色澤、飲食、飲水、陰道分泌物及陰道壁變化等。

2.4指標(biāo)檢測

給藥10 d，大鼠腹主動脈取血，血常規(guī)分析儀定量測量血液中性粒細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞總數(shù)。腹主動脈取血后摘取大鼠宮頸組織，置于10%甲醛標(biāo)本瓶中浸泡固定24 h，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片（4 μm厚），HE染色，光鏡下觀察宮頸陰道組織病理形態(tài)。

3 統(tǒng)計學(xué)方法

4 結(jié)果

4.1一般狀況結(jié)果

實驗過程中除正常組和模型組外，其余4組均有部分大鼠死亡，錫類散低、中、高劑量組大鼠各死亡1只，陽性藥組死亡2只，最終進(jìn)入結(jié)果分析大鼠53只。正常組大鼠體質(zhì)量呈進(jìn)行性增長，飲食、飲水正常，眼光有神，毛發(fā)有光澤，陰道無黃白色分泌物，陰道壁未見充血、紅腫；模型組大鼠陰道有黃白色分泌物，陰道壁充血、紅腫；錫類散低、中、高劑量組大鼠及陽性藥組大鼠陰道有黃白色分泌物，陰道壁不同程度充血、紅腫，肉眼觀察高劑量組大鼠陰道分泌物情況及充血、紅腫程度最嚴(yán)重，陽性藥組及低劑量組最輕，中劑量組適中。

4.2錫類散對模型大鼠血液中性粒細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞總數(shù)的影響

與正常組比較，模型組中性粒細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，錫類散低劑量組中性粒細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01），錫類散中劑量組中性粒細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），錫類散高劑量組中性粒細(xì)胞數(shù)顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），白細(xì)胞總數(shù)有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），陽性藥組中性粒細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果見表1。

表1　各組大鼠中性粒細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞總數(shù)比較（±s，×109/L）

表1　各組大鼠中性粒細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞總數(shù)比較（±s，×109/L）

注：與正常組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 　只數(shù) 　 中性粒細(xì)胞數(shù) 　 白細(xì)胞總數(shù)正常組 　8 　0.842 5±0.500 8 　7.157 5±2.490 5模型組 　10 　2.616 0±1.385 0##　10.787 0±1.141 0##錫類散低劑量組 　9 　1.167 8±0.273 0*　6.176 7±1.381 0**錫類散中劑量組 　9 　1.660 0±0.803 9 　10.272 0±0.812 8錫類散高劑量組 　9 　4.355 6±2.124 6**　11.997 8±2.583 7陽性藥組 　8 　0.828 8±0.859 5**　7.086 3±2.482 0**

4.3錫類散對模型大鼠宮頸組織病理形態(tài)學(xué)的影響

正常組宮頸與陰道交界處單層柱狀上皮移行為復(fù)層扁平上皮，細(xì)胞排列整齊，黏膜下固有層纖維排列致密，無充血及炎細(xì)胞浸潤；模型組大鼠宮頸黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落，黏膜及黏膜下固有層充血水腫，炎細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)可見大量膿性滲出物，伴有出血及脫落的上皮細(xì)胞；錫類散低劑量組宮頸黏膜炎癥損傷明顯減輕，上皮細(xì)胞大多恢復(fù)正常，黏膜及黏膜下固有層輕度充血，未見明顯炎細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)未見膿性滲出物、出血及脫落的上皮細(xì)胞；錫類散中劑量組宮頸黏膜炎癥損傷有一定程度減輕，仍可見部分上皮細(xì)胞壞死脫落，黏膜及黏膜下固有層輕度充血，可見少量炎細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)未見膿性滲出物及出血，可見少量脫落的上皮細(xì)胞；錫類散高劑量組宮頸黏膜未見改善，可見宮頸黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落，黏膜及黏膜下固有層充血水腫，炎細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)可見少量脫落的上皮細(xì)胞；陽性藥組宮頸黏膜炎癥損傷有一定程度減輕，仍可見部分上皮細(xì)胞壞死脫落，黏膜及黏膜下固有層輕度充血，可見少量炎細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)未見膿性滲出物及出血，可見少量脫落的上皮細(xì)胞。結(jié)果見圖1。

圖1　各組大鼠宮頸組織病理形態(tài)（HE染色，×100）

4.4錫類散對模型大鼠陰道組織病理形態(tài)學(xué)的影響

正常組陰道黏膜有許多橫行皺襞，表面為非角化的復(fù)層扁平上皮，細(xì)胞排列整齊，黏膜下固有層纖維排列致密，無充血及炎細(xì)胞浸潤；模型組大鼠陰道黏膜部分缺損，表面被覆上皮細(xì)胞壞死脫落，黏膜及黏膜下固有層充血水腫，炎細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)可見大量出血及脫落的上皮細(xì)胞；錫類散低劑量組陰道黏膜炎癥損傷明顯減輕，上皮細(xì)胞大多已恢復(fù)正常，黏膜及黏膜下固有層未見明顯充血及炎細(xì)胞浸潤，未見腔內(nèi)膿性滲出物、出血及脫落的上皮細(xì)胞；錫類散中劑量組陰道黏膜炎癥損傷有一定程度減輕，仍可見部分上皮細(xì)胞壞死脫落，黏膜及黏膜下固有層輕度充血，可見少量炎細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)未見膿性滲出物及出血，可見少量脫落的上皮細(xì)胞。錫類散高劑量組陰道黏膜未見改善，可見陰道黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落，黏膜及黏膜下固有層充血水腫，炎細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)可見大量出血及少量脫落的上皮細(xì)胞；陽性藥組陰道黏膜炎癥損傷有一定程度減輕，仍可見大量上皮細(xì)胞壞死脫落，黏膜及黏膜下固有層輕度充血，可見少量炎細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)未見膿性滲出物及出血，可見少量脫落的上皮細(xì)胞。結(jié)果見圖2。

圖2　各組大鼠陰道組織病理形態(tài)（HE染色，×100）

5 討論

“蝕于喉為惑，蝕于陰為狐”，張仲景在《金匱要略》的“狐惑病篇”就言明，“狐”“惑”本為相同病機，只是發(fā)作部位不同。依據(jù)中醫(yī)學(xué)“謹(jǐn)守病機，各司其屬”（《素問?至真要大論篇》），錫類散可治咽喉糜爛、唇舌腫痛證屬濕熱之毒上侵，錫類散清熱解毒、化腐生肌的藥物作用恰與宮頸炎濕熱下侵、血癖肉腐的病機相吻合。從病理學(xué)角度解釋，口腔潰瘍和宮頸炎均伴有黏膜糜爛或潰瘍，兩者在病理形態(tài)上亦有很多相似之處。所以運用錫類散治療宮頸炎，理論上也應(yīng)有較滿意的效果，即張仲景所言“觀其脈證，知犯何逆，隨證治之”（《傷寒論》），這個“證”就是“病機”，這就是中醫(yī)學(xué)的“異病同治”思想。

錫類散的組成藥物有象牙屑、青黛、壁錢炭、人指甲（滑石粉制）、珍珠、冰片、牛黃。方中象牙屑清熱、拔毒生肌，另外有研究發(fā)現(xiàn)，象牙屑中MW14 和MW5可以引發(fā)相應(yīng)機制，促進(jìn)傷口的愈合［3］；青黛清熱解毒、涼血，內(nèi)服和外用均有抗炎鎮(zhèn)痛的作用［4］；壁錢炭清熱解毒、止血生肌，同時具有良好的抗炎作用［5］；人指甲止血、利尿；珍珠可解毒生肌，從三角帆蛙珍珠中提取的總卟啉成分，可抑制自由基反應(yīng)，并可清除體內(nèi)氧自由基［6］；冰片清熱止痛，有文獻(xiàn)表明冰片外用有良好的抗炎鎮(zhèn)痛作用［7］；人工牛黃清熱解毒，有明顯的抗炎作用［8］。諸藥共奏清熱解毒、化腐生肌的功效。

血液中白細(xì)胞尤其是中性粒細(xì)胞能趨化吞噬異物，同時產(chǎn)生多種炎癥介質(zhì)，如前列腺素、白細(xì)胞介素等。中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的組織損傷是急性炎癥引起組織損傷的主要原因。本實驗結(jié)果表明，錫類散低、中劑量組宮頸炎大鼠血液白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)有所下降，推測錫類散能減少大鼠血中白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)，從而減輕其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。其中錫類散低劑量組白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)較中劑量組下降明顯，故本實驗中、低劑量組為錫類散治療大鼠宮頸炎的最佳劑量。而錫類散高劑量組中性粒細(xì)胞和白細(xì)胞總數(shù)較模型組明顯增加，提示高劑量組大鼠炎癥反應(yīng)較模型組更重。但查閱文獻(xiàn)，并無明確實驗研究表明錫類散中藥物組成成分有此不良反應(yīng)，故猜測可能是因為栓劑中藥物濃度太高，導(dǎo)致細(xì)胞處于高滲液體環(huán)境而失水，加重細(xì)胞的損傷，從而進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)，使中性粒細(xì)胞及其他白細(xì)胞趨化作用加強，最終導(dǎo)致中性粒細(xì)胞和白細(xì)胞總數(shù)增加。錫類散低、中、高劑量組中性粒細(xì)胞有逐步升高的趨勢，亦考慮為細(xì)胞受損程度隨細(xì)胞外液體環(huán)境滲透壓升高而加重，其確切原因有待進(jìn)一步研究。

病理形態(tài)觀察結(jié)果顯示，模型組宮頸黏膜充血水腫明顯，炎細(xì)胞浸潤，腔內(nèi)可見大量膿性滲出物，伴有出血及脫落的上皮細(xì)胞：而錫類散低劑量組宮頸黏膜炎癥較模型組損傷明顯減輕，黏膜僅有輕度充血，未見明顯炎細(xì)胞浸潤以及炎性滲出物、出血及脫落的上皮細(xì)胞。這是因為錫類散的清熱解毒和其中各藥物的抗炎鎮(zhèn)痛作用可以減輕其炎癥損傷，使充血水腫減輕；其化腐生肌的功效和象牙屑、珍珠促進(jìn)傷口愈合的機制有助于祛除已經(jīng)脫落壞死的組織，清除炎性分泌物，加快新的黏膜和組織的生長。病理觀察結(jié)果顯示，錫類散低劑量組被覆上皮完好率明顯高于模型組，鱗柱交界處兩種上皮移行部清晰，其形態(tài)結(jié)構(gòu)、鱗狀上皮層次相較于陽性藥組更接近于正常組。其總體炎癥改變均較模型組輕微，更接近于正常組。提示錫類散低劑量組對實驗動物所造成的陰道及宮頸黏膜的炎性損傷有較理想的治療作用。

本研究表明，經(jīng)錫類散治療后模型大鼠血液白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)均有所下降，說明錫類散能減少大鼠血液白細(xì)胞總數(shù)，從而減輕其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而促進(jìn)其黏膜的愈合和再生。

鑒于實驗動物研究相關(guān)文獻(xiàn)中缺乏大鼠標(biāo)準(zhǔn)化栓劑給藥方式，且大鼠陰道窄而深的生理特點，為便于實驗給藥并提高實驗結(jié)果的可靠性，本實驗將錫類散原有散劑改良為栓劑，作用時間較灌腸長（本實驗為大鼠用栓，融變時限短，故為5 min，人用栓劑作用時間更長），基本可以達(dá)到恒速釋藥［9］，減少了因藥物流失導(dǎo)致的實驗誤差以及藥物浪費，并為錫類散治療宮頸炎的臨床使用提供了實驗基礎(chǔ)。本實驗根據(jù)文獻(xiàn)確定陰道給藥劑量，“至少相當(dāng)于口服劑量，或口服劑量的 1.5～2倍”［10］，將中劑量組設(shè)置為散劑最適劑量組的2倍，故低、中、高劑量組分別為臨床最適劑量的1、2、4倍。

綜上所述，錫類散是用于口腔潰瘍的常用中藥，我們根據(jù)其對黏膜的修復(fù)作用探索其對宮頸炎的治療作用，探尋錫類散運用于黏膜潰瘍類疾病的新思路、新方法，為擴大錫類散的臨床適用范圍和提高宮頸炎的臨床療效提供了實驗依據(jù)。

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（修回日期：2015-11-30；編輯：華強）

Experimental Study on Therapeutic Effects of Xileisan Pessary on Rats with Cervicitis

WU Qian1， CUI Ren-yun1， TUO Tuo1， XIAO Yi1， HUANG Ling1， LIU Yu-yue2， LIU Jin-lin1， MU Tian-long2，PAN Yan-shu3（1. Basic Medical College， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China； 2. East Hospital of Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100078， China； 3. Graduate School of Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

Objective To study the therapeutic effects of Xileisan Pessary on rats with cervicitis based on the idea of treating different diseases with the same therapy. Methods Vagina perfusion of hydroxybenzene mucilage was used to establish rat cervicitis models. Rats were randomly divided into normal group， model group， positive medicine group， low-， medium-， and high-dose Xileisan Pessary groups. Rats with cervicitis were treated with Xileisan Pessary from the next day after modeling for 10 days. The amount of neutrophilic granulocytes and leukocytes were detected by blood routine analysis meter； cervial histopathologic examination was conducted by HE staining. Results Compared with normal group， the numbers of granulocyte and leucocyte increased significantly in the model group （P＜0.01）. Compared with the model group， the numbers of granulocyte and leucocyte in the low-dose Xileisan Pessary group showed a decreasing trend （P＜0.05， P＜0.01）； cervical inflammation mucosal epithelium and tissue necrosis were signally alleviated； granulocyte in the medium-dose Xileisan Pessary group showed a decreasing trend （P＞0.05）； the content of leucocyte hardly changed； granulocyte in the high-dose Xileisan Pessary group increased observably （P＜0.01）； the number of leucocyte showed an increasing trend （P＞0.05）， and the numbers of granulocyte and leucocyte in positive medicine group decreased observably （P＜0.01）， and cervical inflammation mucosal epithelium and tissue necrosis were also signally alleviated. Conclusion Xileisan Perssary can relieve the inflammation of cervix and repair injured mucosa. It has the function of treating different diseases with the same therapy.

Xileisan； perssary； cervicitis； treating different diseases with the same therapy； rats

·中藥研究與開發(fā)·

R285.5

A

1005-5304（2016）09-0082-05

教育部大學(xué)生創(chuàng)新性實驗計劃項目（201410026008）

潘彥舒，E-mail：13911209998@163.com

2015-11-02）