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    消化性潰瘍氣虛血瘀證的代謝組學(xué)研究

    2016-09-10 20:05:03惲海峰張哲華葛惠男
    云南中醫(yī)中藥雜志 2016年10期
    關(guān)鍵詞:代謝組學(xué)消化性潰瘍

    惲海峰 張哲華 葛惠男

    摘要:目的研究消化性潰瘍氣虛血瘀癥的代謝組學(xué)特征,以代謝組學(xué)的角度,全面闡明該證型的物質(zhì)化基礎(chǔ)。方法選擇2014年1月—2015年1月本院脾胃科收治的80例消化性潰瘍患者為研究對象,將其設(shè)定為觀察組,另取同期來本院行健康檢查的正常者為對照組,收集受試者的血液,胃鏡病理標(biāo)本,實施病理表述和代謝組學(xué)研究,對結(jié)果使用多元化數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。結(jié)果和正常對照組相比,氣虛血瘀組患者在血清代謝物圖譜上存在顯著差異。結(jié)論和正常人相比,氣虛血瘀癥在代謝譜上存在顯著差異,這些差異化代謝產(chǎn)物可能為病癥形成的物質(zhì)性基礎(chǔ),在對患者進(jìn)行臨床診斷與治療的過程中,將中醫(yī)辨證理論與代謝組學(xué)全面結(jié)合,可起到辨別患者疾病嚴(yán)重程度,對于其疾病預(yù)后來講,有著非常重要的現(xiàn)實意義,在很大程度上增加了診斷客觀性,值得進(jìn)一步推廣使用。

    關(guān)鍵詞:消化性潰瘍;氣虛血瘀癥;代謝組學(xué)

    中圖分類號:R256.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號:1007-2349(2016)10-0025-04

    辨證論治為祖國醫(yī)學(xué)中重要組成部分之一[1]。癥候來自于前人總結(jié),有著較強(qiáng)的主觀性,辨證施治的準(zhǔn)確程度和治療結(jié)果息息相關(guān)。隨著我國中醫(yī)現(xiàn)代化進(jìn)程的不斷加速,在衛(wèi)生部門也制定出了一些癥候的規(guī)范性標(biāo)準(zhǔn)。這些均為臨床診斷提供了理論依據(jù),但值得說明的是,對于癥候的診斷依舊缺少公允性標(biāo)準(zhǔn)。這也就證實,使用有效方式,對中醫(yī)癥候本質(zhì)和理論依據(jù)加以研究有著非常重要的現(xiàn)實意義存在。中醫(yī)癥候?qū)W為多因素參與的開放性系統(tǒng)[2],有著多層次的特征,該研究和代謝組學(xué)研究對象有相似的地方,把代謝組學(xué)理論和方式引入到癥候研究之中,對有關(guān)證型進(jìn)行量化分析,探究中醫(yī)證型之基源,為中醫(yī)癥候?qū)W研究的切入點(diǎn)。

    1資料與方法

    1.1一般資料選擇2014年1月—2015年1月本院脾胃科收治的80例消化性潰瘍患者為研究對象,經(jīng)臨床診斷與相關(guān)檢查,患者確診。本實驗通過我院倫理委員會審查,同意執(zhí)行,患者自愿參加實驗調(diào)查,在此同時簽署了知情同意書。經(jīng)中醫(yī)診斷,患者均符合氣虛血瘀證臨床診斷標(biāo)準(zhǔn):胃脘痛,脹滿,困乏無力,胃中嘈雜,不思飲食,大便困難,偶有黑便。舌紫,存在瘀癥。脈弦澀或脈細(xì)數(shù)。在此其中男48例,女32例。年齡區(qū)間為35.9~68.4歲,平均年齡為(44.7±2.3)歲。患者符合實驗標(biāo)準(zhǔn),排除對象為[3]:(1)存在消化道大出血或者球后潰瘍者;(2)在治療一周內(nèi)使用過甾體消炎藥或抗生素者;(3)其他器官器質(zhì)性病變者;(4)惡性腫瘤者;(5)經(jīng)內(nèi)窺鏡檢查證實為潰瘍合并穿孔性潰瘍,胃底部潰瘍與巨大潰瘍者;(6)精神疾患者;(7)孕期,哺乳期女性;(8)不同意參加實驗調(diào)查者;(9)繼發(fā)性病變者。另取同期來我院體檢的健康者80例為對照組,2組受試者的年齡,性別文化程度等基線資料不存在統(tǒng)計學(xué)差異,具有可比性(P>0.05.)

    1.2方法

    1.2.1實驗器材本實驗使用德國西門子公司生產(chǎn)的渦旋儀和冷凍離心機(jī)進(jìn)行相關(guān)檢查。

    1.2.2實驗材料本實驗材料為甲酸,乙腈與甲醇,均由北京諾康生物有限公司提供。濃度符合實驗標(biāo)準(zhǔn)。色譜柱為ZORBAX C18柱,由安捷倫公司提供。

    1.2.3樣本收集在明確患者疾病分型之后,采取清晨空腹血液,共計6ml,后在采血管內(nèi)靜置30 min后,目的在于凝固血液,實現(xiàn)血清分離,后使用5000轉(zhuǎn)/min離心5分鐘。后取用上清液,在每個管內(nèi)放置0.5 mL,于-80攝氏度環(huán)境下保存。

    1.2.4收集樣本檢測前的相關(guān)處理工作選擇患者的受試患者的血清樣本,每組設(shè)定為7個,于常溫環(huán)境下融化。選擇吸取0.2~2 mL血清放置在子彈頭中,加入容量為0.8 mL甲醇,渦旋設(shè)定為30 s,環(huán)境為4℃。10 000 g離心時間為10 min。選擇上清液0.5 mL。放在液相進(jìn)樣瓶內(nèi)實施檢測。

    1.2.5質(zhì)譜條件本實驗使用TOF MS-IDA-MS/MS視為質(zhì)譜條件,使用正離子方式加以檢測,氣簾氣設(shè)定為40psi,噴霧電壓設(shè)定為5500eV。輔助氣為60psi,離子源溫度為550℃,去簇電壓為70eV.TOF MS的掃描范圍為50~1500 m/z。于IDA條件下實施下述設(shè)置:碰撞電壓差為10eV.碰撞電壓為35eV.實施開啟動態(tài)背景扣除。

    1.2.6色譜條件在0 min時,乙腈(其中含有0.1%甲酸)占有5%,純凈水占有95%;在10 min時,全部為乙腈(其中含有0.1%甲酸)。

    1.3觀察指標(biāo)(1)胃鏡病理學(xué)結(jié)果;(2)血液的代謝組學(xué)結(jié)果。

    1.4統(tǒng)計學(xué)原理本實驗使用高效液相色譜-質(zhì)譜法對血清代謝物譜實施檢查,實施PCA和最小化二乘法實施全面分析,識別模式,得到的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元化分析處理。

    2結(jié)果

    2.1氣虛血瘀型潰瘍者與正常對照組血清代謝學(xué)分析情況見圖1。

    從圖譜的結(jié)果中筆者能夠看出,1.氣虛血瘀組存在移除現(xiàn)象,正常組無溢出;2.氣虛血瘀組和正常對照組不存在分離交集情況;由此能夠看出,病例組與對照組的代謝譜存在異常,證實和正常人相比,患者代謝水平有差異。

    2.2氣虛血瘀組與正常組的比較分析情況見圖2。

    從圖譜結(jié)果中筆者能夠看出:(1)氣虛血瘀型患者與對照組數(shù)據(jù)不存在溢出點(diǎn);(2)氣虛血瘀型患者和對照組數(shù)據(jù)不存在分離交集現(xiàn)象;(3)和氣虛血瘀組相比,正常組分離情況更為顯著。上述結(jié)果證實,氣虛血瘀組與健康對照組的代謝水平上存在差異性。

    3討論

    3.1代謝組學(xué)的簡單介紹在蛋白質(zhì)組學(xué),基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)被研究出成果后,代謝組學(xué)作為一種新學(xué)科,被相關(guān)學(xué)者所知曉,外國學(xué)者Nicho lson將代謝組學(xué)做出如下定義[4]:將動物相關(guān)組織與液體視為研究對象,對機(jī)體生理病理性刺激或者由基因修飾而產(chǎn)生的代謝物質(zhì)量比較動態(tài)變化情況。其研究對象為分子量小于1000kDa的小分子化合物。該學(xué)科主要對相關(guān)代謝路徑的底物和產(chǎn)物中的小分子物質(zhì)進(jìn)行研究,血清,腦脊液,唾液等均可以被視作研究樣本。當(dāng)前在代謝組學(xué)研究領(lǐng)域中,應(yīng)用最為廣泛的當(dāng)屬M(fèi)RI技術(shù),質(zhì)譜技術(shù),氣相色譜技術(shù)等等。代謝組學(xué)的產(chǎn)生,令西醫(yī)研究更具有前瞻性,對于中醫(yī)整體化觀念,證候的現(xiàn)代化研究等,也不再是夢想。

    3.2中醫(yī)辨證法和代謝組學(xué)的關(guān)系代謝組學(xué)在一定程度上反應(yīng)出機(jī)體相關(guān)功能與分子集合的關(guān)聯(lián)性。幾乎所有對機(jī)體健康造成影響的因素均會在代謝組中有所體現(xiàn),基因、環(huán)境、營養(yǎng)、藥物與時間最后會以代謝組對表達(dá)施加影響的方式加以展現(xiàn)。由此能夠看出,代謝組學(xué)屬于后基因組時代的新式研究方式,這種方式比較符合對中醫(yī)藥多層次,多靶點(diǎn)宏觀化研究。從對證候的分析中能夠看出,結(jié)合代謝組學(xué)平臺意義顯著,其研究方式也更加接近,中醫(yī)學(xué)研究中“司外揣內(nèi)”思維方法。其并不局限于受到外界影響因素后,一些物質(zhì)或者通路變化詳情,而是更加重視整體性變化,簡單的將,代謝組學(xué)能夠利用對于機(jī)體黑箱內(nèi)產(chǎn)生的代謝物加以觀察,結(jié)合對某個病癥組共性加以分析,進(jìn)而更好的理解發(fā)病過程中機(jī)體內(nèi)代謝情況與波動詳情。相關(guān)文獻(xiàn)指出,不同種類的消化性潰瘍中醫(yī)證型和健康對照組之間存在較為顯著差異,證該疾病性因素會對機(jī)體代謝系統(tǒng)造成顯著影響,進(jìn)而改變代謝模式。和濕熱證,氣滯證相比,氣虛血瘀證與上述兩種的代謝物譜并不一致。證實在中醫(yī)學(xué)理論中的“證”存在物質(zhì)性基礎(chǔ),上述內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化為辨證產(chǎn)生的直接性原因,但也有可能是經(jīng)過某個代謝通路所造成的結(jié)果,在特殊階段內(nèi),患者身體代謝產(chǎn)物類別和水平會呈現(xiàn)出一定變化,這或許能夠成為中醫(yī)證候量化標(biāo)準(zhǔn)。

    3.3辨證應(yīng)分清虛實從中醫(yī)的角度來講,氣虛血瘀為虛實夾雜癥狀,該癥狀的產(chǎn)生和后天失養(yǎng),先天不足等存在關(guān)聯(lián)性,在此因素下,機(jī)體遠(yuǎn)期不足,因氣虛無法推動基本運(yùn)行,血運(yùn)緩慢,進(jìn)而令瘀血內(nèi)阻,出現(xiàn)相關(guān)臨床癥狀。該證為長期病變演變而成,古代醫(yī)者葉天士曾經(jīng)這樣形容氣虛血瘀:“初病在氣,久病入血”。消化性潰瘍有著反復(fù)性發(fā)作,久治不愈的特征,隨著疾病的演變,必然呈現(xiàn)為氣虛血瘀癥,單純化脾虛癥甚為少見,氣虛血瘀癥為脾虛癥惡化結(jié)果。從病因上來講,兩者存在一定關(guān)聯(lián)性,因此氣虛血瘀癥也就可以成為虛癥之代表。

    從代謝水平上來講,實證和虛證存在顯著差異,古代醫(yī)書《素問》有云:“邪氣盛則實,精氣奪則虛。[5]”《景岳全書》對虛證做出了下述闡述:“虛實者,有余不足也”[6]。值得說明的是,虛證與實證也是鑒別邪正盛衰的重要基礎(chǔ),正邪之間的斗爭為發(fā)病過程中的矛盾點(diǎn),由此能夠看出,分清實證和虛證有著非常重要的現(xiàn)實意義。

    4小結(jié)

    綜上所述,和對照組相比,氣虛血瘀癥在代謝譜上存在顯著差異,這些差異化代謝產(chǎn)物可能為病癥形成的物質(zhì)性基礎(chǔ),在對患者進(jìn)行臨床診斷與治療的過程中,將中醫(yī)辨證理論與代謝組學(xué)全面結(jié)合,可起到辨別患者疾病嚴(yán)重程度,對于其疾病預(yù)后來講,有著非常重要的現(xiàn)實意義,在很大程度上增加了診斷客觀性,值得進(jìn)一步推廣使用。

    參考文獻(xiàn):

    [1]沈華娟,葛惠男.消化性潰瘍中醫(yī)辨證分型的研究[J].吉林中醫(yī)藥,2015,04:355-358.

    [2]黃張杰.補(bǔ)中益氣湯及其“益氣升陽”配比組方的藥效和代謝組學(xué)研究[D].廣州中醫(yī)藥大學(xué),2014.

    [3]曾浩,鄒全明.幽門螺桿菌代謝組學(xué)研究進(jìn)展[J].世界華人消化雜志,2005,20:2455-2458.

    [4]吳巧鳳,毛森,蔡瑋,等.針刺俞、募穴對功能性消化不良大鼠血清大分子代謝產(chǎn)物的影響[J].針刺研究,2010,04:287-292.

    [5]李均梅,于文濤,張文天,等.中藥復(fù)方治療消化性潰瘍的實驗研究概況[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2013,03:163-165.

    [6]施旭光,鄒忠杰,吳美音,等.慢性淺表性胃炎脾氣虛與脾胃濕熱證患者尿液~1H-NMR的代謝組學(xué)研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2015,12:1427-1432.

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