不育男性精子中的頂體酶活性及精液參數(shù)研究

成艷君，李雪梅，楊則寶，覃春容，楊宇霞，吳正中，周永紅，楊蔚深圳市婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心，廣東深圳518000

不育男性精子中的頂體酶活性及精液參數(shù)研究

成艷君，李雪梅，楊則寶，覃春容，楊宇霞，吳正中，周永紅，楊蔚
深圳市婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心，廣東深圳518000

目的研究不育男性精子中頂體酶活性與精液參數(shù)。方法選取我院收治的不育男性140例作為研究對(duì)象，再按照頂體酶參數(shù)是否正常劃分為兩組，觀察組1（n=68）為精液參數(shù)正常組，即精液量、液化時(shí)間、外觀、精子活力、外形以及數(shù)量等均無(wú)明顯異常，觀察組2（n=72）為精液參數(shù)異常組，即抗精抗體為陽(yáng)性或上述檢查有不少于1項(xiàng)明顯異常，且存在生殖系統(tǒng)急慢性炎癥史；選取1年內(nèi)正常生育男性70例作為研究對(duì)象，設(shè)為對(duì)照組。應(yīng)用手淫法對(duì)所有男性精液予以收集，且應(yīng)用改良Kennedy法檢測(cè)精子頂體酶活性，對(duì)比3組男性精子頂體酶活性。結(jié)果觀察組2（a+b）級(jí)精子活動(dòng)率明顯低于其他兩組（P＜0.05）；對(duì)照組精子濃度明顯高于觀察組（P＜0.05）；對(duì)照組頂體酶活性明顯高于觀察組1與觀察組2（P＜0.05）。結(jié)論頂體酶活性低下密切關(guān)聯(lián)于男性不育，檢測(cè)不育男性精子中頂體酶活性臨床價(jià)值重大，可將精子質(zhì)量全面反映出來(lái)，進(jìn)而評(píng)價(jià)其功能狀態(tài)，有推廣價(jià)值。

不育男性；精液；頂體酶活性

當(dāng)前育齡夫婦受到的最大困擾為男性不育，該問(wèn)題具有全球性。據(jù)調(diào)查，育齡夫婦不孕不育癥發(fā)生率為10%～15%，其中一半為男性原因［1-3］。導(dǎo)致男性不育的因素較多，主要分為外部因素與內(nèi)部因素，包括遺傳、分子突變、酒精、煙草、毒品以及環(huán)境等。當(dāng)前有較多精液分析法，比如精子正常形態(tài)比例、精子計(jì)數(shù)等，但是無(wú)法全面了解男性生育能力。經(jīng)研究得知，正常形態(tài)精子率與受精率顯著正相關(guān)，精子頂體酶在精子受孕過(guò)程中有重要參與作用，酶含量直接影響精子生育力［4-6］，因此其完整性可將精子頂體酶含量直接反映出來(lái)。若精子頂體酶不完整會(huì)導(dǎo)致酶漏出，對(duì)精子質(zhì)量與卵子受精產(chǎn)生影響。然而臨床很少細(xì)致研究精子頂體酶活性與男性不育的關(guān)系，本文現(xiàn)選取140例患者與70例健康男性作為研究對(duì)象，報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取我院2014年1月～2015年1月收治的不育男性140例作為研究對(duì)象，再按照頂體酶參數(shù)是否正常劃分為兩組，觀察組1（n=68）為精液參數(shù)正常組，觀察組2 （n=72）為精液參數(shù)異常組。本組患者均有正常性功能，超過(guò)2年未采取避孕措施女方仍未妊娠，且女方開(kāi)展諸項(xiàng)檢查均無(wú)異常。選取1年內(nèi)正常生育男性70例作為研究對(duì)象，設(shè)為對(duì)照組，均已生產(chǎn)但育齡在2年以內(nèi)或者妻子處于妊娠期，行精液常規(guī)分析結(jié)果正常。所有入選對(duì)象年齡為23～43歲，平均34.2±7.3歲。3組患者在一般資料上對(duì)比差異不明顯（P＞0.05），具有可比性。

1.2檢測(cè)方法

所有患者禁欲時(shí)間為3～7 d，而后應(yīng)用手淫法對(duì)精液予以收集，在精液采集管中放置，稱重精液質(zhì)量對(duì)精液體積予以推測(cè)，再在37℃實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放置，用多方位陶瓷加熱棒，處于溫度均衡，使其充分液化后開(kāi)展檢測(cè)。開(kāi)展精液常規(guī)分析，充分混勻后制備濕片對(duì)顯微鏡下精子外觀等予以觀察，將精液稀釋以檢測(cè)精子濃度。主要應(yīng)用計(jì)算機(jī)輔助精子分析系統(tǒng)檢測(cè)精子活力，操作時(shí)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明書流程；應(yīng)用改良Kennedy法對(duì)精子頂體酶活性進(jìn)行檢測(cè)，采用722紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。1份精液標(biāo)本需取樣2次開(kāi)展分別檢測(cè)，精子計(jì)數(shù)分別為200個(gè)，于95%可信區(qū)間內(nèi)取均值，若不在可信區(qū)間內(nèi)則重新取樣重復(fù)計(jì)數(shù)2次。

1.3判定標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)WHO精液常規(guī)分析標(biāo)準(zhǔn)判定精液常規(guī)結(jié)果，正常值為精子濃度不低于20×106/mL，a級(jí)不低于25%或者a級(jí)與b級(jí)精子活動(dòng)率之和不低于50%（精子活動(dòng)率包括前向運(yùn)動(dòng)精子百分率和非前向運(yùn)動(dòng)精子百分率，前向運(yùn)動(dòng)精子為前向性a+b，非前向運(yùn)動(dòng)精子為非前向性b+c。對(duì)3組頂體酶活性水平差異予以比較分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用軟件SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)處理上述數(shù)據(jù)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示計(jì)量資料，組間對(duì)比用t檢驗(yàn)，對(duì)比以P＜0.05代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

3組頂體酶活性及精液常規(guī)分析結(jié)果對(duì)比，觀察組2精子活動(dòng)率、頂體酶活性以及精子濃度均明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），對(duì)照組精子濃度為（136.84±21.77）×106/mL，明顯高于觀察組（P＜0.05）；對(duì)照組頂體酶活性為92.64± 18.75 μIU/106，明顯高于觀察組1的28.79±3.05 μIU/106與16.47±2.47 μIU/106（P＜0.05）。觀察組1與觀察組2上述指標(biāo)對(duì)比均明顯（P＜0.05）；觀察組1頂體酶活性與精子濃度明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）。本組觀察組2（a+ b）級(jí)精子活動(dòng)率為21.18%±3.95%，明顯低于其他兩組（P＜0.05，表1）。

表1　3組頂體酶活性及精液常規(guī)分析結(jié)果對(duì)比

3　討論

男性不育即夫妻婚后同居時(shí)間不低于2年沒(méi)有采取避孕措施，且女方也無(wú)異常受到男方因素影響女方未懷孕者［7］。有原發(fā)性與繼發(fā)性不孕兩種類型，前者為特發(fā)性不孕，即夫妻婚后從未懷孕；后者為女方流產(chǎn)或懷孕或者有過(guò)生育后不低于兩年在沒(méi)有采取任何避孕措施的前提下未使女方懷孕者。男性不育屬于復(fù)雜綜合征，有諸多因素會(huì)影響男性不育，比如分子突變或者遺傳因素，Y染色體缺失或微小，因子基因受睪丸決定、微衛(wèi)星CAG多態(tài)性以及生精基因突變等［8-9］，且食品包裝、噪聲、研究、毒品、汽車尾氣、微生物感染以及輻射等均會(huì)影響男性不孕［10］。

經(jīng)臨床研究后得知頂體酶密切關(guān)聯(lián)于男性不育。頂體為扁囊狀結(jié)構(gòu)，在精子細(xì)胞核前方覆蓋，其組成包括3部分，分別為頂體內(nèi)膜、外膜以及頂體腔。細(xì)胞膜與頂體外膜間有薄層細(xì)胞質(zhì)存在，且存在多種關(guān)聯(lián)于受精的化學(xué)物質(zhì)。頂體反應(yīng)為精子獲能后從細(xì)胞卵丘、透明帶與放射冠穿透前或者穿透期間頂體產(chǎn)生的諸多變化，而后釋放頂體內(nèi)容物，將卵細(xì)胞周便透明帶與放射冠溶解，繼而從卵細(xì)胞與透明帶中穿透融合后受精。細(xì)胞膜與頂體外膜融合后會(huì)產(chǎn)生囊狀小泡，突狀小泡消失后暴露頂體內(nèi)膜。此間會(huì)暴露或者釋放各種頂體酶，并具備活性，將各自作用發(fā)揮出來(lái)后將卵子邊透明帶溶解，精子可靠近卵子繼而結(jié)合受精。男性不育密切關(guān)聯(lián)于頂體酶活性低下。精子頂體酶相連于頂體膜，屬于胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶，在頂體中合成與儲(chǔ)存時(shí)主要應(yīng)用酶原形式，受精時(shí)其為關(guān)鍵酶，精子結(jié)合于卵子且產(chǎn)生頂體反應(yīng)后釋放出頂體酶原，營(yíng)造優(yōu)良條件促進(jìn)精卵結(jié)合。頂體酶活性較低時(shí)會(huì)導(dǎo)致卵細(xì)胞卵丘分解受到影響，且精子在穿透卵細(xì)胞透明帶時(shí)也有一定影響，最終誘發(fā)男性不育。因此在對(duì)精子生育能力予以判斷時(shí)頂體酶活性為重要指標(biāo)，可對(duì)精液常規(guī)分子中只能對(duì)男性一般生育能力比如精子活動(dòng)率、密度以及活力等予以判斷但無(wú)法對(duì)精子功能狀態(tài)進(jìn)行判斷的缺陷予以彌補(bǔ)［11］。臨床檢測(cè)頂體酶活性可將精子質(zhì)量更好反映出來(lái)，便于找出不育主要原因。

影響精子頂體酶活性的因素有很多，如禁欲時(shí)間，藥物、精液的保存方式及精液體外停留的時(shí)間［12-15］。本組觀察組2 a+b級(jí)精子活動(dòng)率明顯低于其他兩組；對(duì)照組精子濃度明顯高于觀察組；對(duì)照組頂體酶活性明顯高于觀察組1。由此可知，精子頂體酶活性密切關(guān)聯(lián)于精子質(zhì)量，且精子活動(dòng)率與密度下降后頂體酶活性也會(huì)相應(yīng)降低。

綜上所述，頂體酶活性低下密切關(guān)聯(lián)于男性不育，檢測(cè)不育男性精子中頂體酶活性臨床價(jià)值重大，可將精子質(zhì)量全面反映出來(lái)，進(jìn)而評(píng)價(jià)其功能狀態(tài)，有推廣價(jià)值。

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The acrosome enzyme activity and the semen parameters in infertile males

CHEN Yanjun，LI Xuemei，YANG Zebao，QIN Chunrong，YANG Yuxia，WU Zhengzhong，ZHOU Yonghong，YANG Wei Department of Reproductive Center，Shenzhen Maternal and Child Health Care Hospital，Shenzhen 518000，China

Objective To study sperm acrosome enzyme activity and sperm parameters in infertile men.Methods A total of 140 cases of infertile subjects were enrolled and divided into two observation groups by the parameter of acrosome enzyme. Semen parameters included shape and number of semen volume，liquefaction time，appearance，sperm motility.68 subjects with completely normal semen parameters were selected as observation group 1，while the other 72 subjects in observation group 2 has a history of reproductive system inflammation and at least one abnormal semen parameters，or showed an obvious exception of anti-sperm antibodies（AsAb）.Control group was set with 70 cases of normal fertile men.Sperm acrosome activity was analysed by improved Kennedy and compared between these three groups.Sperm samples were all collected by masturbation.Results Observation group 2 shows a significantly lower value of male sperm acrosome activity than the other two groups（P＜0.05）；Sperm concentration of the control group was（136.84±21.77）×106/mL，higher than the observation group（P＜0.05）；Acrosome enzyme activity in control group was 92.64±18.75 iIU/106/mL，significantly higher than the observation group 1（28.79±3.05 iIU/106/mL）and observation group2（16.47±2.47 iIU/106/mL）（P＜0.05）.Conclusion Reduction of acrosome activity is closely associated with male infertility，Detection of sperm acrosome activity in infertile men，which can fully reflected in the quality of sperm，evaluation of their functional status，is of major clinical value.

infertile males；semen；acrosome enzyme activity

2016-03-01

成艷君，E-mail:cyjun118@126.com