PARP抑制劑對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞及移植瘤放療增敏作用及其機(jī)制

王維 段碧霞 曾麗

電離輻射所致的腫瘤細(xì)胞DNA損傷主要為鏈斷裂：?jiǎn)捂湐嗔眩╯ingle strand breaks,SSBs）與雙鏈斷裂（double strand breaks,DSBs）；其中SSBs發(fā)生的頻率是DSBs的10倍-20倍[1]。在通常情況下，電離單擊所致的SSBs多能通過(guò)細(xì)胞內(nèi)聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-rbose)polymerase,PARP]、DNA連接酶以及其他損傷修復(fù)相關(guān)因子的參與進(jìn)行較完整的修復(fù)[2]，而DSBs的修復(fù)則要困難很多，需通過(guò)激活同源重組（homologous recombination,HR）或非同源末端連接（nonhomologous end joining,NHEJ）途徑完成[1,3]。DSBs成為電離輻射在細(xì)胞染色體上最致命的損傷，DNA損傷修復(fù)與否則是影響受照細(xì)胞存活的關(guān)鍵因素[1,4]?；赑ARP在細(xì)胞SSBs修復(fù)中的關(guān)鍵性作用，靶向抑制其修復(fù)的新思路成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)之一，相關(guān)新藥Olaparib（PARP1/PARP2/PARP3抑制劑，奧拉帕尼）于2014年12月美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市。臨床研究[5-7]結(jié)果表明，Olaparib聯(lián)合紫杉醇、吉西他濱、鉑類等化療藥物治療可使得患者獲益。目前，PARP抑制劑在聯(lián)合放療方面研究較少，已有的相關(guān)研究報(bào)告[8,9]顯示，其在體外聯(lián)合照射細(xì)胞可提高放療生物效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)在Lewis肺癌細(xì)胞及小鼠移植瘤模型上研究PARP抑制劑聯(lián)合放療時(shí)生物效應(yīng)的變化，并探索其可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞株與實(shí)驗(yàn)小鼠 Lewis肺癌細(xì)胞株為本實(shí)驗(yàn)室保存。C57/BL小鼠：雌性，6周-8周齡，重15 g-20 g，飼養(yǎng)于無(wú)特定病原體（specific pathogen free,SPF）級(jí)環(huán)境，購(gòu)于北京華阜康生物科技公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證編號(hào)：SCXK(京)2014-0004。實(shí)驗(yàn)獲本院動(dòng)物保護(hù)和應(yīng)用委員會(huì)批準(zhǔn)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)人員資格證書(shū)編號(hào)：CQLA-2013-0734。

1.1.2 主要試劑 MTT試劑盒購(gòu)于北京康為世紀(jì)生物科技公司，Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)于Biosciences公司，Olaparib-AZD2281購(gòu)于Selleck Chemicals公司，BCA蛋白濃度測(cè)定、Beyo ECL Plus發(fā)光試劑購(gòu)于上海碧云天生物技術(shù)公司，Anti-Phospho-Histone H2AX(Ser139)購(gòu)于Upstate公司，Bax、caspase-3、Bcl-2兔抗鼠單克隆抗體購(gòu)于Abcam公司，TUNEL試劑盒購(gòu)自美國(guó)羅氏公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及移植瘤小鼠建模 Lewis肺癌細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM/HIGHGLUCOSE培養(yǎng)基中（10%胎牛血清，100 μg/mL青霉素-鏈霉素），于37℃、5%CO2、90%濕度孵箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁。取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)細(xì)胞，消化計(jì)數(shù)，約1.5×106個(gè)細(xì)胞/只接種于小鼠右側(cè)肋部。

1.3 MTT檢測(cè)Olaparib IC10濃度 Lewis細(xì)胞以8.0×103個(gè)/孔接種于96孔板，細(xì)胞貼壁，各孔加入Olaparib［濃度梯度（μmol/L）：0、3.125、6.25、12.5、25、50］，各濃度3個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)48 h后各孔中加入20 μL MTT，避光4 h棄上清，加入150 μL二甲基亞砜，避光振蕩5 min。酶標(biāo)儀測(cè)各孔吸光度（density,D）值（570 nm波長(zhǎng)處）。存活率=（實(shí)驗(yàn)組各孔D值/空白組D值）×100%，通過(guò)BLISS法計(jì)算10%抑制濃度（10% inhibitory concentration,IC10）與50%抑制濃度（50% inhibitory concentration,IC50）值。IC10作為后續(xù)Olaparib體外用藥濃度。

1.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)比較 實(shí)驗(yàn)分為放療（radiotherapy,RT）組與Olaparib+RT組，兩組照射均含0 Gy、0.5 Gy、1 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy劑量點(diǎn)。均使用Synergy直線加速器6 MV X射線（劑量率：1 Gy/min）等中心照射，射野10 cm×15 cm，源皮距=100 cm，瓶面放一1.5 cm厚等效有機(jī)玻璃。取對(duì)數(shù)期細(xì)胞，根據(jù)不同照射劑量點(diǎn)以100個(gè)-10,000個(gè)細(xì)胞/孔（表1）接種于6孔板，待細(xì)胞貼壁后，用藥組照射前2 h加入Olaparib后行相應(yīng)劑量點(diǎn)照射。受照細(xì)胞培養(yǎng)10 d后，經(jīng)固定、染色、晾干處理，采用光鏡計(jì)數(shù)各劑量點(diǎn)集落數(shù)目（≥50個(gè)細(xì)胞為一集落）。接種效率=0 Gy點(diǎn)平均集落數(shù)/100，存活分?jǐn)?shù)（survival fraction,SF）=該劑量點(diǎn)平均集落數(shù)/(該點(diǎn)接種細(xì)胞數(shù)×接種效率），根據(jù)經(jīng)典單擊多靶模型SF=1-[1-exp(-D/D0)]N擬合曲線，得到平均致死劑量D0值，放療增敏比（sensitivity enhancement ratio,SER）=D0（RT組）/D0（Olaparib+RT組）。

1.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)體外細(xì)胞凋亡 實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照、Olaparib、RT（2 Gy）、Olaparib+RT（2 Gy）組，細(xì)胞以3.5×105個(gè)/孔密度接種于6孔板上培養(yǎng)24 h（用藥組照射前2 h加入Olaparib），接受2 Gy照射。培養(yǎng)24 h，消化、洗滌、離心收集細(xì)胞，加入200 μL緩沖液重懸，再加入5 μL Annexin V/FITC和10 μL碘化丙啶，避光孵育15 min后加入300 μL緩沖液待用。使用流式細(xì)胞儀分類計(jì)數(shù)。右上象限及右下象限分別代表晚期與早期凋亡細(xì)胞。

1.6 小鼠移植瘤外照射 小鼠移植瘤體積平均長(zhǎng)至250 mm3后，隨機(jī)分為4組（n=5）：空白對(duì)照、Olaparib、RT（2 Gy×5 d）、Olaparib+RT組，0.9%Nacl或Olaparib（用法用量依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及已有研究資料[10]：50 mg/kg/d，灌胃，照射前30 min-60 min給藥）?？瞻讓?duì)照（0.9%Nacl,d1-d5）、Olaparib組（Olaparib,d1-d5）、RT組（移植瘤照射，2 Gy/d，d1-d5）、Olaparib+RT組（Olaparib，d1-d5；移植瘤照射，2 Gy/d，d1-d5）。每隔2天游標(biāo)卡尺外部測(cè)量移植瘤最大徑A及最小徑B，瘤塊體積V=π/6×[（A+B）/2]3，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，移植瘤長(zhǎng)至4倍初體積（1,000 mm3）后處死小鼠。比較各組小鼠移植瘤長(zhǎng)至4倍初體積（1,000 mm3）時(shí)所需天數(shù)。

1.7 Western blot檢測(cè)γH2AX、Bax/Bcl-2、Caspase-3蛋白表達(dá) 收集目的細(xì)胞（2 Gy劑量點(diǎn)，受照后2 h）、瘤塊組織（小鼠放療結(jié)束后，即d6），RIPA裂解液裂解細(xì)胞（組織），調(diào)整樣品蛋白濃度。8%SDS-PAGE分離樣品蛋白60 μg，250 mA恒流電轉(zhuǎn)膜至硝酸纖維濾膜，封閉2 h，置于一抗封閉液中，4℃孵育過(guò)夜。將膜置于含辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的IgG二抗中，孵育2 h后采用ECL Plus發(fā)光試劑顯色。以GAPDH為內(nèi)參，采用Image Lab軟件分析條帶灰度值，以目的蛋白/GAPDH比值半定量反應(yīng)蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

1.8 TUNEL法檢測(cè)瘤塊細(xì)胞凋亡 采用凋亡細(xì)胞的原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法（TUNEL法），TdT酶液和熒光標(biāo)記液按1:9比例混合，配成TUNEL反應(yīng)液（整個(gè)操作步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行）。正常細(xì)胞核染為藍(lán)色，凋亡細(xì)胞核染為棕黃色，在×400高倍視野（high power,HP）光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)癌區(qū)，計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞數(shù)（個(gè)/HP）。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用IBM SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)以Mean±SD表示，兩組數(shù)據(jù)間比較使用t檢驗(yàn)，兩組以上數(shù)據(jù)比較使用單因素方差分析（ANOVA）。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

圖1 多靶單擊模型擬合細(xì)胞存活曲線Fig 1 Cell survival curves plotted by the “single-hit multi-target model”.RT：Radiotherapy.

2.1 Olaparib對(duì)Lewis細(xì)胞增殖抑制作用 MTT檢測(cè)結(jié)果示，Lewis細(xì)胞在濃度梯度（μmol/L）為：0、3.125、6.25、12.5、25、50的Olaparib作用下存活百分比依次為：100%、97.33%、84.36%、59.67%、39.16%、24.56%，計(jì)算得出IC10與IC50值分別為：4.4 μmol/L、19.6 μmol/L?？梢?jiàn)隨Olaparib濃度增高，細(xì)胞存活率降低，即Olaparib體外對(duì)Lewis細(xì)胞存在劑量毒性，故選擇低毒劑量IC10值作為Olaparib體外用藥濃度。

2.2 細(xì)胞克隆形成情況 克隆形成實(shí)驗(yàn)得出，RT組與Olaparib+RT組細(xì)胞在0 Gy、0.5 Gy、1 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy各劑量點(diǎn)存活分?jǐn)?shù)（表1）。多靶單擊模型SF=1-[1-exp(-D/D0)]N擬合曲線（圖1）得出放射生物學(xué)指標(biāo)D0值（Gy）在RT組與Olaparib+RT組中分別為：0.797、0.658。Olaparib聯(lián)合放療SER為1.211（0.797/0.658）。

2.3 不同處理組細(xì)胞體外凋亡差異 細(xì)胞接受2 Gy照射后24 h，行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率（圖2）。Olaparib+RT組、Olaparib組、RT組、空白組中Lewis細(xì)胞凋亡率依次為：（24.77±2.0）%、（3.89±1.1）%、（16.22±2.4）%、（0.53±0.1）%?？梢?jiàn)Olaparib+RT組細(xì)胞凋亡率顯著高于其余三組（均P＜0.05）。

2.4 不同處理組移植瘤細(xì)胞體內(nèi)凋亡差異 光鏡下（×400）Olaparib+RT組、Olaparib組、RT組、空白組移植瘤組織中TUNEL染色陽(yáng)性（凋亡）細(xì)胞的細(xì)胞核呈棕黃色（圖3），其平均凋亡細(xì)胞數(shù)（個(gè)/HP）依次為：（12.4±1.1）、（4.4±1.1）、（8.0±1.2）、（2.2±0.8）。統(tǒng)計(jì)得出，Olaparib+RT組細(xì)胞凋亡率顯著高于其余三組（均P＜0.05）。

表1 各劑量點(diǎn)細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)Tab 1 Cell survival fraction at each dose point

圖2 Lewis細(xì)胞體外凋亡率差異。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率，可見(jiàn)Olaparib+RT組細(xì)胞體外凋亡率顯著高于其余三組（均P＜0.05）。Fig 2 Differential cell apoptotic rate in vitro.Cell apoptotic rate was measured by flow cytometry analysis.The apoptotic cells in Olaparib+RT group were significantly higher than the other three groups in vitro (all P＜0.05).

2.5 DNA損傷及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)差異 Lewis細(xì)胞在接受2 Gy照射后2 h與移植瘤照射（2 Gy×5 d）后1天，Western blot檢測(cè)各處理組γH2AX（DNA雙鏈斷裂相關(guān)蛋白），促凋亡蛋白Bax、Caspase-3，抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)。結(jié)果顯示，Olaparib+RT組與RT組相比，γH2AX、Bax、Caspase-3蛋白在體外實(shí)驗(yàn)中分別上調(diào)60.5%、40.0%、42.0%，在移植瘤中分別上調(diào)71.4%、37.7%、31.3%；Bcl-2體外實(shí)驗(yàn)中下調(diào)45.2%，移植瘤中下調(diào)61.0%（圖4）。

2.6 移植瘤生長(zhǎng)曲線比較 各處理組小鼠用藥及放療過(guò)程中精神飲食狀態(tài)正常，無(wú)明顯全身性不良反應(yīng)，各組移植瘤體積平緩長(zhǎng)至250 mm3左右，開(kāi)始相關(guān)實(shí)驗(yàn)。各組移植瘤增長(zhǎng)過(guò)程中均有出現(xiàn)1個(gè)-2個(gè)移植瘤中央部破潰。10 Gy劑量照射結(jié)束后同時(shí)剝?nèi)∥雌茲⒘鰤K行前述組織相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)（圖5A）。在Olaparib+RT組、Olaparib組、RT組、空白組中移植瘤增長(zhǎng)至4倍初體積（1,000 mm3）所需時(shí)間（d）依次為：（29.6±3.8）、（11.6±2.6）、（21.2±2.3）、（10.8±1.1）（圖5B）。可見(jiàn)，Olaparib+RT組移植瘤長(zhǎng)至4倍初體積所需天數(shù)顯著高于其余三組（均P＜0.05）。

圖3 Lewis細(xì)胞體內(nèi)凋亡率差異。TUNEL染色檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況（×400）。Olaparib+RT組細(xì)胞體內(nèi)凋亡率顯著高于其余三組（均P＜0.05）。Fig 3 Differential cell apoptotic rate in vivo.Cell apoptotic rate in xenograft tissues was observed by TUNEL stain (×400).The apoptotic cells in Olaparib+RT group were significantly higher than the other three groups in vivo (all P＜0.05).

圖4 Lewis細(xì)胞體內(nèi)外DNA損傷及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)。A：Lewis細(xì)胞體外照射（2 Gy）后；B：Lewis移植瘤照射結(jié)束（2 Gy×5 d）后，Western blot檢測(cè)γH2AX、Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白表達(dá)。*P＜0.05，**P＜0.01相較于RT組。Fig 4 DNA damage and apoptosis related protein expression of Lewis cells in vitro and in vivo.The ralative protein levels of γH2AX,Bax/Bcl-2,Caspase-3 were measured by Western blot.A：After Lewis cells were irradiated in vitro (2 Gy)；B：After Lewis xenografts were irradiated (2 Gy×5 d ).*P＜0.05,**P＜0.01 vs RT group.

圖5 荷瘤小鼠與移植瘤生長(zhǎng)延緩曲線。A1：Lewis移植瘤照射（2 Gy×5 d）后剝?nèi)×鰤K用于相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)；A2：荷瘤小鼠（未破潰）；A3：荷瘤小鼠（瘤塊中心破潰）；B：移植瘤增長(zhǎng)至4倍初體積（1,000 mm3）生長(zhǎng)延緩曲線。Fig 5 Tumor-bearing mice and Lewis xenografts growth delay curves.A1：Xenografts were isolated for detecting at the next day after irradiated (2 Gy×5 d)；A2：Tumor-bearing mice without xenograft rupture；A3：Tumor-bearing mice with xenograft rupture；B：Delay curves of Lewis xenografts increasing to quadruple size from the start.

3 討論

根據(jù)經(jīng)典的“單擊多靶”模型，電離輻射可致腫瘤細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量的SSBs，同樣的，作用于DNA化學(xué)結(jié)構(gòu)的細(xì)胞毒類藥物也可使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生較多SSBs。多數(shù)的SSBs能通過(guò)PARP等相關(guān)因子修復(fù)，當(dāng)PARP活性被靶向抑制后，大量外源性的SSBs存在于細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)進(jìn)入下一個(gè)復(fù)制叉后，SSBs可轉(zhuǎn)變?yōu)镈SBs[11]。修復(fù)DSB，必須通過(guò)激活HR或NHEJ信號(hào)通路來(lái)完成，若該通路中的關(guān)鍵分子（如BRCA1/2、ATM等）發(fā)生功能突變，即可對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生所謂的“合成致死”效應(yīng)，這就是Olaparib及其他PARP抑制劑在臨床研究中單藥或聯(lián)合化療治療伴有BRCA1/2突變的惡性腫瘤的基礎(chǔ)。

凋亡是腫瘤細(xì)胞受電離輻射后產(chǎn)生的主要生物效應(yīng)之一，在線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑中，細(xì)胞在生存信號(hào)缺失、DNA嚴(yán)重受損（如DSB）、生長(zhǎng)因子缺乏等情況下，可通過(guò)Bcl家族的促凋亡成員（如Bax等）與抗凋亡成員（如Bcl-2等）調(diào)控線粒體膜通透性，釋放凋亡活性物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，引起Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[12]。與正常組織細(xì)胞相比，DNA損傷修復(fù)通路在腫瘤細(xì)胞中過(guò)度激活，并且在機(jī)體接受放化療時(shí)，對(duì)其有著負(fù)性調(diào)控作用[13]。本實(shí)驗(yàn)旨在研究Olaparib聯(lián)合放療時(shí)，是否可通過(guò)增加Lewis細(xì)胞DNA損傷及凋亡而起到放療增敏作用。

本實(shí)驗(yàn)首先在體外細(xì)胞水平研究Olaparib聯(lián)合放療時(shí)的增敏效應(yīng)。運(yùn)用MTT技術(shù)檢測(cè)Olaparib對(duì)Lewis細(xì)胞的增殖抑制作用，可見(jiàn)隨藥物濃度增加，抑制率上升，即Olaparib單藥對(duì)Lewis細(xì)胞存在細(xì)胞毒作用，故選擇低毒劑量IC10值作為體外聯(lián)合放療時(shí)的藥物濃度。通過(guò)放射生物學(xué)研究常用的克隆形成實(shí)驗(yàn)，比較了單純放療與Olaparib聯(lián)合放療在Lewis細(xì)胞層面的生物效應(yīng)差異，得出Olaparib聯(lián)合放療組D0值較RT組增加了21.1%，SER為1.211，證實(shí)了Olaparib體外的放療增敏效應(yīng)。為進(jìn)一步探究其可能機(jī)制，檢測(cè)不同處理組與受照細(xì)胞DSBs相關(guān)的敏感指標(biāo)，即與DSBs量存在對(duì)應(yīng)關(guān)系的磷酸化組蛋白H2AX（γH2AX），其被認(rèn)為是檢測(cè)DNA雙鏈斷裂的“金標(biāo)準(zhǔn)”。通過(guò)蛋白印跡相對(duì)定量得出，γH2AX在空白及單藥Olaparib組中未表達(dá)，而在RT與Olaparib+RT組中高表達(dá)，且聯(lián)合組γH2AX表達(dá)量較RT組增加約60%?？梢?jiàn)，體外Lewis細(xì)胞在低劑量Olaparib聯(lián)合放療時(shí)即可顯著增加DSBs形成。

實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同處理組細(xì)胞的凋亡率得出，Olaparib聯(lián)合放療組較單放療組細(xì)胞凋亡率顯著提高。研究[14-16]表明，Bax與Bcl-2蛋白可形成異源二聚體抑制凋亡，Bax間可形成同源二聚體促進(jìn)凋亡，即在Bax/Bcl-2途徑中Bax促進(jìn)凋亡而B(niǎo)cl-2抑制凋亡，并進(jìn)一步通過(guò)細(xì)胞色素C及Caspase-9等因子激活下游Caspase-3蛋白，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本研究對(duì)這些凋亡相關(guān)蛋白檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，Lewis細(xì)胞在接受2 Gy照射后，Olaparib聯(lián)合放療組促凋亡蛋白Bax及Caspase-3較單純放療顯著增加，抗凋亡蛋白Bcl-2顯著下降。Wesierska等[17]研究PARP-1抑制劑AZD2261發(fā)現(xiàn)，其可顯著抑制乳腺癌MCF-7與Skbr-3細(xì)胞克隆形成，并通過(guò)Caspase-3蛋白的激活誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在本實(shí)驗(yàn)中，Olaparib單藥組對(duì)Lewis細(xì)胞凋亡影響較?。s3.89%），考慮與用藥濃度較低相關(guān)（IC10值濃度）。Tuli等[18]研究PARP1/2抑制劑ABT-888聯(lián)合放療胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)，ABT-888單藥（10 μmol/L）時(shí)對(duì)MiaPaCa-2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase表達(dá)影響小，而當(dāng)聯(lián)合放療時(shí)可顯著提高促凋亡蛋白表達(dá)。這與本研究結(jié)果相一致。

在Lewis細(xì)胞移植瘤模型實(shí)驗(yàn)中，Olaparib單藥給予5 d較空白對(duì)照組并未引起明顯的腫瘤生長(zhǎng)延緩，而當(dāng)聯(lián)合放療（2 Gy×5 d）后，觀察到移植瘤顯著的生長(zhǎng)延緩效應(yīng)，與單純放療組相比，其增長(zhǎng)至4倍初體積所需天數(shù)多出近10 d。同體外研究類似，實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了受照射后移植瘤組織中凋亡細(xì)胞、DNA損傷及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況，獲得了與體外研究一致的結(jié)果，即聯(lián)合組較單純放療組移植瘤組織中凋亡細(xì)胞更多，DSBs相關(guān)γH2AX、促凋亡蛋白Bax與Caspase-3表達(dá)更高，抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào)，進(jìn)一步驗(yàn)證了體內(nèi)外Olaparib聯(lián)合放療時(shí)的增敏效應(yīng)。

綜上所述，本研究通過(guò)Lewis肺癌細(xì)胞及移植瘤模型證實(shí)了Olaparib的放療增敏效應(yīng)，其可通過(guò)增加受照Lewis細(xì)胞的DSBs形成，上調(diào)Bax/Bcl-2促凋亡體系蛋白表達(dá)而提高照射生物效應(yīng)。為PARP抑制劑在聯(lián)合放療方面的應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為臨床肺癌放療提供一個(gè)新的優(yōu)良的放療增敏劑，值得進(jìn)一步的體內(nèi)及臨床研究。