• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    小細(xì)胞肺癌組織中LncRNA AK09398的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系研究

    2016-08-27 09:02:24柳斌劉曉琴楊業(yè)葛俊李靜
    中國肺癌雜志 2016年11期
    關(guān)鍵詞:肺癌分析研究

    柳斌 劉曉琴 楊業(yè) 葛俊 李靜

    肺癌為一種惡性程度較高的腫瘤性疾病,其病死率居各種惡性腫瘤之首,發(fā)病率逐年上升[1]。小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)是支氣管肺癌中未分化癌分型,約占全部肺癌的15%。由于較早發(fā)生較強(qiáng)的侵襲性和早期發(fā)生血行及淋巴轉(zhuǎn)移,大多數(shù)患者就診時(shí)已發(fā)生轉(zhuǎn)移,中位生存期不足1年,5年生存率不足5%[2]。SCLC的治療主要以化療為主。雖然SCLC患者早期對(duì)一線化療方案(足量EP方案:依托泊式或伊立替康+順鉑/卡鉑)敏感,但由于極易出現(xiàn)多藥耐藥(multidrug resistance, MDR)現(xiàn)象而導(dǎo)致治療失敗。因此,尋找有效的早期診斷及療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物是臨床亟待解決的難題。

    隨著非編碼RNA(noncoding RNA, ncRNA)研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)ncRNA(主要包括microRNA、長鏈非編碼RNA等)在腫瘤的的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、凋亡中起著重要的作用,雖然基因組分析發(fā)現(xiàn)了大量的LncRNAs,但目前只有少部分LncRNAs被廣泛用于研究,這些LncRNAs具有作為腫瘤診斷、預(yù)后分子標(biāo)志物的潛力,其表達(dá)水平與多種腫瘤的臨床病理特征以及預(yù)后相關(guān)[3-5]。研究其在SCLC發(fā)生發(fā)展中的作用及相關(guān)性將為SCLC的早期診斷及治療提供新突破。課題組前期通過LncRNA芯片發(fā)現(xiàn)LncRNA AK09398在SCLC耐藥細(xì)胞株中的表達(dá)較敏感細(xì)胞株明顯增高,提示LncRNA AK09398可能與SCLC的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。本研究通過qRT-PCR方法檢測(cè)LncRNA AK09398在SCLC患者肺癌組織及其對(duì)應(yīng)的正常肺組織標(biāo)本中的表達(dá)情況,并對(duì)患者的臨床病理特征進(jìn)行分析,揭示LncRNA AK09398在SCLC中的可能作用,并探討LncRNA AK09398在SCLC早期診斷及預(yù)后評(píng)估中的潛在作用。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本來源 118例SCLC患者化療前組織標(biāo)本均來源于2011年1月-2015年12月本院腫瘤科、胸外科及呼吸內(nèi)科行手術(shù)及穿刺活檢或支氣管鏡活檢的組織標(biāo)本,其中53例SCLC原發(fā)病灶及癌旁組織(癌旁組織距離癌組織達(dá)5 cm以上),65例患者癌組織取自支氣管鏡或計(jì)算機(jī)斷層掃描(computed tomopraphy, CT)引導(dǎo)下穿刺活檢標(biāo)本,65例非肺癌患者的正常肺組織取自各種原因?qū)е碌姆瓮鈧幕颊撸谢颊卟±Y料完整,術(shù)前均未行放化療。男性55例,女性63例,年齡30歲-83歲,平均年齡為(56±7.7)歲,體能狀態(tài)(performance status, PS)評(píng)分根據(jù)病程記錄和入院記錄進(jìn)行評(píng)價(jià),統(tǒng)一采用美國東部腫瘤協(xié)作組(Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),PS 0分-1分患者70例,PS≥2分48例,吸煙患者79例,有惡性腫瘤家族史24例,局限期50例,廣泛期68例。所有病例均經(jīng)過病理學(xué)檢查確診為SCLC,均接受EP(依托泊苷+順鉑/卡鉑)方案化療及全腦預(yù)防性放療,本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有患者均簽署知情同意書。隨訪:全部118例患者出院后均隨訪,隨訪方式為電話隨訪和門診隨訪,隨訪內(nèi)容包括一般情況、臨床癥狀及影像學(xué)檢查。隨訪起點(diǎn)為手術(shù)或病理活檢日期,末次隨訪時(shí)間為2016年6月30日,至隨訪截止日,存活病例49例,死亡病例69例,無失訪病例。

    1.2 方法

    1.2.1 Real-time PCR分析LncRNA AK09398的表達(dá)水平 采用Trizol(Invitrogen, Grand Island, NY)方法提取組織標(biāo)本中總RNA。將提取的總RNA,逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)參照AMV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明,在20 μL體系中加2 μg總RNA進(jìn)行cDNA的合成。Real-time PCR采用2×SYBR Green PCR Master Mix,取適量cDNA作為摸板,引物濃度0.4 mol/L,15 μL體系進(jìn)行擴(kuò)增,每個(gè)待測(cè)樣本設(shè)置3個(gè)平行樣,根據(jù)目標(biāo)基因設(shè)計(jì)合成相應(yīng)上下游引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以GAPDH作為內(nèi)參照。PCR反應(yīng)在定量PCR反應(yīng)儀上進(jìn)行。三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)后得到的數(shù)據(jù)運(yùn)用公式RQ=2-ΔΔCt的方法進(jìn)行分析。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。LncRNA AK09398在癌組織、癌旁正常組織中的表達(dá)差異采用方差分析。LncRNA AK09398在癌組織和癌旁組織中的表達(dá)及其與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系分析使用Chi-Square檢驗(yàn);采用Kaplan-Meier法分析LncRNA AK09398的表達(dá)與生存時(shí)間及預(yù)后的關(guān)系,應(yīng)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析影響非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)預(yù)后的因素,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 LncRNA AK09398在SCLC組織標(biāo)本中的表達(dá) LncRNA AK09398在肺癌癌組織中的平均表達(dá)水平為(7.813±0.373),與癌旁組織(1.782±0.116)及正常肺組織(1.209±0.200)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=58.41,P<0.001)(圖1)。

    2.2 SCLC組織標(biāo)本中LncRNA AK09398的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系 118例SCLC患者中男性55例,女性63例;年齡30歲-83歲,中位年齡56歲,<56歲52例,≥56歲66例。廣泛期68例,局限期50例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者70例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者48例;遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移68例,無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移50例。截止研究工作完成,存活病例49例,死亡病例69例。根據(jù)LncRNA AK09398平均表達(dá)水平(7.183),將SCLC患者分為LncRNA AK09398高表達(dá)組66例及低表達(dá)組52例,分析LncRNA AK09398的表達(dá)與患者年齡、性別、疾病分期、化療敏感性、轉(zhuǎn)移及患者的生存期的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)LncRNA AK09398的表達(dá)與患者的年齡、性別無關(guān),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05);與疾病分期、淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、化療敏感性及生存狀態(tài)明顯相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)(表1)。

    2.3 LncRNA AK09398的表達(dá)與SCLC患者生存分析 采用Kaplan-Meier法估計(jì)LncRNA AK09398的表達(dá)與患者生存時(shí)間的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)高表達(dá)LncRNA AK09398的患者的中位無進(jìn)展生存時(shí)間(progression-free survival, PFS)為9.06個(gè)月,較低表達(dá)者(19.92個(gè)月)縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=49.260,P<0.001);低表達(dá)LncRNA AK09398患者的中位總生存時(shí)間(overall survival, OS)為32.50個(gè)月,較高表達(dá)者(22.71個(gè)月)明顯延長,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=26.700,P=0.001)(圖2)。

    2.4 預(yù)后影響因素分析 多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示,LncRNA AK09398的表達(dá)、轉(zhuǎn)移及臨床分期是SCLC獨(dú)立的預(yù)后因素(表2)。

    3 討論

    SCLC是一種以生長迅速、早期轉(zhuǎn)移、高度侵襲性為特點(diǎn)的肺癌類型,其發(fā)病率約占原發(fā)性肺癌的15%-20%[6]。由于SCLC腫瘤細(xì)胞倍增時(shí)間短,進(jìn)展快,常伴內(nèi)分泌異?;蝾惏┚C合征[7];早期即發(fā)生血行轉(zhuǎn)移,故SCLC的治療應(yīng)以全身化療為主,聯(lián)合放療和手術(shù)為主要治療手段[8,9]。SCLC的腫瘤細(xì)胞早期對(duì)化療和放療都非常敏感,但幾十年來多方案的臨床試驗(yàn)并沒能找到徹底治愈SCLC的有效方法,因此,尋找SCLC的早期診斷及預(yù)后評(píng)估標(biāo)志物已成為目前臨床亟待解決的問題。

    表 1 SCLC患者組織標(biāo)本中LncRNA AK09398的表達(dá)與病理特征的關(guān)系Tab 1 Relationship of LncRNA AK09398 expression with pathological characteristics of SCLC patients

    圖 1 qRT-PCR法檢測(cè)LncRNA AK09398在非腫瘤組織及SCLC組織中的表達(dá)Fig 1 The expression of LncRNA AK09398 were measured in nontumor tissues and SCLC tissues by qRT-PCR

    圖 2 LncRNA AK09398的表達(dá)與SCLC患者無進(jìn)展生存時(shí)間及總生存時(shí)間的關(guān)系。A:LncRNA AK09398的表達(dá)與SCLC患者無進(jìn)展生存時(shí)間的關(guān)系;B:LncRNA AK09398的表達(dá)與SCLC患者總生存時(shí)間的關(guān)系。Fig 2 The relationship of LncRNA AK09398 expression with progression-free survival (PFS) and overall survival (OS) in SCLC patients.A: The relationship of LncRNA AK09398 expression with PFS in SCLC patients; B: The relationship of LncRNA AK09398 expression with OS in SCLC patients.

    表 2 Cox多因素分析影響SCLC預(yù)后的獨(dú)立因素Tab 2 Independent prognosis factors of SCLC by Cox multivariate analysis

    LncRNA是一類轉(zhuǎn)錄本長度超過200 nt的ncRNA,其本身缺乏明顯的開放閱讀框,不參與蛋白質(zhì)編碼功能,一直被認(rèn)為是基因轉(zhuǎn)錄的“噪音”而未受重視。然而最近的研究[10]表明,具有相對(duì)較長的核苷酸鏈,其分子內(nèi)部具有特定而又復(fù)雜的二級(jí)空間結(jié)構(gòu),能提供與蛋白質(zhì)結(jié)合的多個(gè)位點(diǎn),或與DNA、RNA之間通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則發(fā)生特異性、動(dòng)態(tài)性相互作用,形成由LncRNA參與的基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[11]。LncRNA作為近年來新發(fā)現(xiàn)的一類調(diào)控型非編碼RNA成為腫瘤生物學(xué)領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn),研究發(fā)現(xiàn),LncRNA與腫瘤的形成、浸潤、轉(zhuǎn)移過程相關(guān),有望成為新的腫瘤標(biāo)志物和腫瘤治療的靶點(diǎn),在腫瘤診斷和治療方面顯示出良好的臨床應(yīng)用前景。近年來的研究[12]發(fā)現(xiàn)LncRNA GAPLINC通過靶向作用于SNAI2促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲性。上調(diào)LncRNA NEAT1的表達(dá),促進(jìn)膀胱癌的進(jìn)展[13]。LncRNA CRNDE的上調(diào)與結(jié)直腸癌預(yù)后差相關(guān),其表達(dá)與IRX5 mRNA的表達(dá)呈正相關(guān)[14];MALAT1是第一個(gè)在肺癌中被研究的LncRNA,它可以作為早期肺腺癌中患者預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后標(biāo)記物[15]。HOTAIR在NSCLC樣本中高表達(dá),HOTAIR高表達(dá)狀態(tài)與NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分級(jí)相關(guān),此外,HOTAIR高表達(dá)的患者預(yù)后相對(duì)較差[16]。CCAT2被發(fā)現(xiàn)在NSCLC組織中高表達(dá),CCAT2的高表達(dá)水平與肺腺癌相關(guān),提示CCAT2可能是一個(gè)肺腺癌特異的LncRNA[17]。GAS5在NSCLC組織中低表達(dá),其表達(dá)水平與NSCLC的腫瘤大小及臨床分級(jí)相關(guān)。GAS6-AS1在NSCLC組織中低表達(dá),其表達(dá)水平與NSCLC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分級(jí)有關(guān),而且GAS6-AS1是NSCLC患者一個(gè)獨(dú)立預(yù)后標(biāo)記物[18]。然而關(guān)于LncRNA在SCLC中的功能研究,目前國內(nèi)外相關(guān)報(bào)道很少。近年來的研究發(fā)現(xiàn),LncRNA CCAT2促進(jìn)SCLC的生長和轉(zhuǎn)移,高表達(dá)LncRNA CCAT2的患者的預(yù)后差[19]。LncRNA HOTAIR通過調(diào)節(jié)HOXA1基因的甲基化影響SCLC的化療敏感性[20]。課題組前期通過LncRNA芯片發(fā)現(xiàn)LncRNA AK09398在SCLC耐藥細(xì)胞株中的表達(dá)較敏感細(xì)胞株中明顯增高,提示LncRNA AK09398可能與SCLC的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。本研究通過比較118例臨床資料完整的SCLC組織及癌旁組織標(biāo)本中的LncRNA AK09398表達(dá),分析其表達(dá)與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)LncRNA AK09398在SCLC組織標(biāo)本中的表達(dá)較癌旁組織明顯增高。LncRNA AK09398的表達(dá)與患者的年齡、性別無關(guān);與疾病分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、化療敏感性及生存狀態(tài)明顯相關(guān)。高表達(dá)LncRNA AK09398患者的總生存時(shí)間及無進(jìn)展生存時(shí)間均較低表達(dá)者明顯縮短;Cox多因素回歸模型分析提示,LncRNA AK09398的表達(dá)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及臨床分期是SCLC獨(dú)立的預(yù)后因素。以上研究結(jié)果提示LncRNA AK09398參與調(diào)節(jié)SCLC的發(fā)生發(fā)展,可能作為潛在的SCLC預(yù)后評(píng)估的分子標(biāo)志物。但LncRNA AK09398在調(diào)節(jié)SCLC預(yù)后中的具體作用機(jī)制及參與的信號(hào)通路,尚需進(jìn)行進(jìn)一步分子實(shí)驗(yàn)室及臨床研究。

    猜你喜歡
    肺癌分析研究
    中醫(yī)防治肺癌術(shù)后并發(fā)癥
    對(duì)比增強(qiáng)磁敏感加權(quán)成像對(duì)肺癌腦轉(zhuǎn)移瘤檢出的研究
    FMS與YBT相關(guān)性的實(shí)證研究
    遼代千人邑研究述論
    隱蔽失效適航要求符合性驗(yàn)證分析
    視錯(cuò)覺在平面設(shè)計(jì)中的應(yīng)用與研究
    科技傳播(2019年22期)2020-01-14 03:06:54
    EMA伺服控制系統(tǒng)研究
    電力系統(tǒng)不平衡分析
    電子制作(2018年18期)2018-11-14 01:48:24
    電力系統(tǒng)及其自動(dòng)化發(fā)展趨勢(shì)分析
    microRNA-205在人非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義
    国产一区二区在线av高清观看| 亚洲av片天天在线观看| 日本 av在线| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 欧美中文综合在线视频| 午夜精品在线福利| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 成人精品一区二区免费| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产xxxxx性猛交| 国产亚洲av高清不卡| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产麻豆成人av免费视频| 91精品三级在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产激情久久老熟女| 十八禁人妻一区二区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 美女 人体艺术 gogo| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 午夜两性在线视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 亚洲五月天丁香| av欧美777| 午夜福利高清视频| 欧美日本视频| 久久人妻av系列| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 51午夜福利影视在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 一二三四在线观看免费中文在| 中文字幕久久专区| 女人被狂操c到高潮| 日韩高清综合在线| 国产三级黄色录像| 美女大奶头视频| 精品欧美国产一区二区三| av有码第一页| 国产亚洲精品第一综合不卡| 手机成人av网站| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 色播亚洲综合网| 韩国av一区二区三区四区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲av成人av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 激情视频va一区二区三区| 91大片在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 免费搜索国产男女视频| 国产精品av久久久久免费| 午夜免费观看网址| 亚洲五月色婷婷综合| 桃色一区二区三区在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 国产成人精品久久二区二区免费| 夜夜爽天天搞| 国产三级在线视频| 国产精品 欧美亚洲| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 亚洲精品国产色婷婷电影| 大陆偷拍与自拍| 精品国产亚洲在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久精品91蜜桃| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 欧美日韩瑟瑟在线播放| 91精品国产国语对白视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲av第一区精品v没综合| 黄色视频,在线免费观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 午夜影院日韩av| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲精品在线美女| 国产乱人伦免费视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久久久久久久免费视频了| 国产片内射在线| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲人成电影免费在线| 高清毛片免费观看视频网站| 久久精品国产亚洲av高清一级| 午夜福利免费观看在线| 免费高清视频大片| 国产成年人精品一区二区| av在线播放免费不卡| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲三区欧美一区| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 又黄又粗又硬又大视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 看片在线看免费视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 看免费av毛片| 亚洲在线自拍视频| 麻豆国产av国片精品| 亚洲av美国av| 美国免费a级毛片| 操美女的视频在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲欧美激情在线| 久久影院123| 久久精品国产亚洲av高清一级| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 国语自产精品视频在线第100页| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 成人永久免费在线观看视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 日韩三级视频一区二区三区| 久久香蕉精品热| 婷婷丁香在线五月| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| av在线播放免费不卡| 国产在线观看jvid| 91成人精品电影| 欧美在线黄色| 国产av在哪里看| 久久精品91蜜桃| 亚洲最大成人中文| 搞女人的毛片| 国产亚洲精品av在线| 成人精品一区二区免费| 精品国内亚洲2022精品成人| 伦理电影免费视频| 久久国产精品人妻蜜桃| www.熟女人妻精品国产| 国产高清videossex| 亚洲天堂国产精品一区在线| xxx96com| 免费在线观看日本一区| 欧美中文日本在线观看视频| 少妇的丰满在线观看| 性欧美人与动物交配| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 天堂影院成人在线观看| 99久久国产精品久久久| 国产色视频综合| 露出奶头的视频| 天堂√8在线中文| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产av一区二区精品久久| 国产一区在线观看成人免费| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 少妇熟女aⅴ在线视频| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 看黄色毛片网站| 免费在线观看日本一区| 中文字幕最新亚洲高清| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产人伦9x9x在线观看| 窝窝影院91人妻| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产亚洲精品av在线| 岛国在线观看网站| 亚洲专区国产一区二区| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 搞女人的毛片| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 91成年电影在线观看| 91精品三级在线观看| 亚洲激情在线av| 亚洲自拍偷在线| 精品国产亚洲在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美大码av| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 欧美精品亚洲一区二区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 大码成人一级视频| 很黄的视频免费| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一区二区日韩欧美中文字幕| 一a级毛片在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲av美国av| 欧美在线黄色| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品一区二区三区四区久久 | 一级毛片精品| 日本一区二区免费在线视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久草成人影院| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 在线国产一区二区在线| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲人成电影观看| 国产一区二区激情短视频| 亚洲激情在线av| 亚洲成人国产一区在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 在线免费观看的www视频| 久久香蕉国产精品| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一进一出好大好爽视频| av有码第一页| videosex国产| 男女之事视频高清在线观看| 中国美女看黄片| 国产成人av教育| 操美女的视频在线观看| www.精华液| 精品国产乱子伦一区二区三区| 欧美乱码精品一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 久久久久亚洲av毛片大全| 免费少妇av软件| 91精品三级在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| a级毛片在线看网站| 久久久久九九精品影院| 两人在一起打扑克的视频| 午夜久久久在线观看| 国产激情欧美一区二区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 中文亚洲av片在线观看爽| 午夜视频精品福利| 国产在线观看jvid| 宅男免费午夜| 88av欧美| 亚洲九九香蕉| 久久久久国内视频| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲一区二区三区色噜噜| 日韩免费av在线播放| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精品,欧美在线| videosex国产| 色播亚洲综合网| 人人妻人人澡人人看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 首页视频小说图片口味搜索| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 又黄又粗又硬又大视频| 久久精品91蜜桃| 精品久久久久久,| 国产精品,欧美在线| 久久中文字幕人妻熟女| 禁无遮挡网站| 91麻豆av在线| 国产亚洲精品av在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产野战对白在线观看| 91精品三级在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 91国产中文字幕| 精品久久蜜臀av无| 精品国内亚洲2022精品成人| 曰老女人黄片| 国产精品综合久久久久久久免费 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 看片在线看免费视频| 亚洲专区字幕在线| 亚洲精品在线美女| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久久中文看片网| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 自线自在国产av| 亚洲激情在线av| 大型av网站在线播放| 欧美日韩福利视频一区二区| 91大片在线观看| 热re99久久国产66热| 国产99白浆流出| 午夜免费观看网址| 大陆偷拍与自拍| 日本一区二区免费在线视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 热re99久久国产66热| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品,欧美在线| 性色av乱码一区二区三区2| 一进一出抽搐动态| 我的亚洲天堂| 麻豆一二三区av精品| 色老头精品视频在线观看| 波多野结衣高清无吗| 国产精品九九99| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 成熟少妇高潮喷水视频| 欧美乱色亚洲激情| 国产真人三级小视频在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 在线播放国产精品三级| 国产精品1区2区在线观看.| 国产私拍福利视频在线观看| 国产精华一区二区三区| 免费观看精品视频网站| 男人舔女人的私密视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 性欧美人与动物交配| 99国产精品一区二区三区| 美女免费视频网站| cao死你这个sao货| www.熟女人妻精品国产| 少妇熟女aⅴ在线视频| 一区福利在线观看| 99riav亚洲国产免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产亚洲精品久久久久5区| 性欧美人与动物交配| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 美女大奶头视频| 人成视频在线观看免费观看| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产一区二区激情短视频| 两人在一起打扑克的视频| 欧美乱色亚洲激情| av欧美777| 桃红色精品国产亚洲av| 成人精品一区二区免费| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 69av精品久久久久久| 久久伊人香网站| 国产成人欧美| 视频区欧美日本亚洲| 国产成人av教育| 超碰成人久久| 午夜福利一区二区在线看| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲av电影在线进入| a级毛片在线看网站| 亚洲成国产人片在线观看| 9热在线视频观看99| 十八禁网站免费在线| 一进一出抽搐动态| netflix在线观看网站| 久久久国产欧美日韩av| av网站免费在线观看视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲中文av在线| 大码成人一级视频| 欧美成人午夜精品| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产熟女午夜一区二区三区| 一区二区三区国产精品乱码| 国产三级在线视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 精品久久久久久久久久免费视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 午夜福利在线观看吧| xxx96com| 亚洲欧美日韩无卡精品| 1024视频免费在线观看| 国产精品野战在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜 | 亚洲精品国产精品久久久不卡| 老司机午夜福利在线观看视频| 在线观看免费视频日本深夜| 露出奶头的视频| 最新美女视频免费是黄的| www.自偷自拍.com| 亚洲七黄色美女视频| 两个人看的免费小视频| 亚洲国产精品999在线| 丝袜美腿诱惑在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| √禁漫天堂资源中文www| 在线观看www视频免费| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产精品久久视频播放| 99国产精品99久久久久| 一区福利在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久人人97超碰香蕉20202| av超薄肉色丝袜交足视频| 日日爽夜夜爽网站| 99re在线观看精品视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产欧美日韩一区二区三| 国产97色在线日韩免费| 999精品在线视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 两个人看的免费小视频| 91成人精品电影| 国产精华一区二区三区| av电影中文网址| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品日产1卡2卡| 午夜福利高清视频| 又大又爽又粗| 国产成+人综合+亚洲专区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲专区国产一区二区| 国产av精品麻豆| 精品一区二区三区av网在线观看| 丁香欧美五月| 91国产中文字幕| 757午夜福利合集在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 精品久久久久久成人av| 男人舔女人的私密视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 精品国产国语对白av| 久久天堂一区二区三区四区| 人人妻人人澡人人看| 午夜激情av网站| 国产精品爽爽va在线观看网站 | av网站免费在线观看视频| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲视频免费观看视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 欧美成人免费av一区二区三区| 国产一区二区三区视频了| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 免费在线观看日本一区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 在线免费观看的www视频| 91成人精品电影| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 九色亚洲精品在线播放| videosex国产| 天堂影院成人在线观看| av中文乱码字幕在线| 后天国语完整版免费观看| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲久久久国产精品| 热99re8久久精品国产| 又紧又爽又黄一区二区| а√天堂www在线а√下载| 欧美最黄视频在线播放免费| 久热这里只有精品99| 热99re8久久精品国产| 身体一侧抽搐| 在线观看午夜福利视频| 亚洲专区字幕在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲第一电影网av| 最好的美女福利视频网| 久久午夜亚洲精品久久| 曰老女人黄片| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 黄色 视频免费看| 一级,二级,三级黄色视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲人成77777在线视频| av天堂久久9| 欧美在线黄色| 国产麻豆69| 亚洲电影在线观看av| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲av片天天在线观看| 长腿黑丝高跟| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产亚洲欧美98| 韩国精品一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区精品| 色老头精品视频在线观看| 91成年电影在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 美女午夜性视频免费| 99久久精品国产亚洲精品| 一进一出抽搐gif免费好疼| 色精品久久人妻99蜜桃| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 欧美成人一区二区免费高清观看 | 久久国产精品影院| 午夜亚洲福利在线播放| 国产成人精品久久二区二区免费| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美在线一区亚洲| 91九色精品人成在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 多毛熟女@视频| 91成人精品电影| 日本 欧美在线| 一级毛片高清免费大全| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 午夜老司机福利片| av电影中文网址| 嫩草影院精品99| 热re99久久国产66热| 久久精品影院6| 制服人妻中文乱码| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 又黄又粗又硬又大视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲在线自拍视频| 欧美在线黄色| 欧美中文日本在线观看视频| 男女午夜视频在线观看| 一进一出抽搐动态| 丝袜在线中文字幕| 又大又爽又粗| 麻豆成人av在线观看| 中国美女看黄片| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产免费男女视频| 视频区欧美日本亚洲| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 欧美亚洲日本最大视频资源| 夜夜爽天天搞| 亚洲一区中文字幕在线| 国产伦人伦偷精品视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲av成人一区二区三| av有码第一页| 国产精品野战在线观看| 久久香蕉国产精品| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲av美国av| 国产精品一区二区免费欧美| 国产精品,欧美在线| 久久人妻av系列| 99精品欧美一区二区三区四区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产欧美日韩一区二区三| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲久久久国产精品| 免费观看精品视频网站| 啦啦啦 在线观看视频| 波多野结衣巨乳人妻| 一个人免费在线观看的高清视频| 韩国av一区二区三区四区| 国产精品av久久久久免费| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 叶爱在线成人免费视频播放| 无限看片的www在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久亚洲真实| 一级黄色大片毛片| 欧美黑人精品巨大| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 国产一区在线观看成人免费| 色综合欧美亚洲国产小说| av在线播放免费不卡| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产免费av片在线观看野外av| 最新美女视频免费是黄的| 老汉色av国产亚洲站长工具| 中文字幕av电影在线播放| 一个人免费在线观看的高清视频| 91在线观看av| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲国产精品成人综合色| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲五月婷婷丁香| 久久久久久人人人人人| 午夜老司机福利片| 在线视频色国产色| 成人18禁在线播放| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲性夜色夜夜综合| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 一级片免费观看大全| 亚洲成人免费电影在线观看| 在线观看日韩欧美| 国产男靠女视频免费网站| 女人被狂操c到高潮| 男女下面进入的视频免费午夜 | 香蕉国产在线看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲成国产人片在线观看| 精品一品国产午夜福利视频| 国产精品一区二区在线不卡| 老汉色av国产亚洲站长工具| 中文字幕高清在线视频| 亚洲九九香蕉| 老司机在亚洲福利影院|