班布特羅和沙丁胺醇在人體內(nèi)的立體選擇性藥動學(xué)和代謝產(chǎn)物研究

姜義武　夏宇敏（.廣東東莞常安醫(yī)院藥劑科　東莞　53000；.廣東東莞康華醫(yī)院藥劑科　東莞　53000）

班布特羅和沙丁胺醇在人體內(nèi)的立體選擇性藥動學(xué)和代謝產(chǎn)物研究

姜義武1夏宇敏2（1.廣東東莞常安醫(yī)院藥劑科東莞523000；2.廣東東莞康華醫(yī)院藥劑科東莞523000）

目的：研究分析班布特羅和沙丁胺醇在人體內(nèi)的立體選擇性藥動學(xué)和代謝產(chǎn)物。方法：各選擇5名受檢者服用消旋鹽酸班布特羅片劑與左旋硫酸沙丁胺醇片，分別于用藥前、用藥后（1、3、6、12、24、48以及72h）抽取受檢者靜脈血5mL，檢測患者血漿中班布特羅和沙丁胺醇的濃度變化。結(jié)果：班布特羅及沙丁胺醇在人體的代謝過程中均存在著差異。結(jié)論：班布特羅、沙丁胺醇及它們的代謝產(chǎn)物在代謝上具有立體選擇性。

班布特羅 沙丁胺醇 立體選擇性藥動學(xué) 代謝產(chǎn)物

班布特羅、沙丁胺醇均屬于β2-腎上腺素受體激動劑，是特布他林的氨基甲酸酯前藥［1］。班布特羅自身并沒有藥性作用，但其能夠在人體內(nèi)通過氧化反應(yīng)以及水解作用生成特布他林，特布他林則具有藥理活性［2］。沙丁胺醇是一種支氣管擴(kuò)張劑，通常被用來治療慢性肺阻以及哮喘［3］。我院對班布特羅和沙丁胺醇在人體內(nèi)的立體選擇性藥動學(xué)和代謝產(chǎn)物進(jìn)行了深升入研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料和方法

1.1檢測方法：班布特羅的檢測方法：在目前已有的對班布特羅以及其代謝產(chǎn)物的檢測方法中，靈敏度最高是2010年Luo［4］創(chuàng)建的LC-MS/MS班布特羅手性測定方法，因該方法并不適合用于測定人體的血漿，故需要在對該檢測方法做一些改進(jìn)。首先采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-MS/MS）的LC分離血液樣本中的母藥，再采用MS/MS的質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測（multiple reaction monitoring，MRM）模式采集樣本中的母藥及其子離子。MRM允許符合設(shè)定的目標(biāo)物母離子進(jìn)入碰撞池，然后在碰撞池中將此母離子進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)，接著去除無關(guān)子離子干擾，僅采集選定的子離子的質(zhì)譜信號。這種質(zhì)譜掃描模式可以克服背景干擾且靈敏度高，滿足了藥物定量測定的迫切需要。

沙丁胺醇的檢測方法：目前也有許多研究報(bào)道了沙丁胺醇的檢測方法，靈敏度最高的是LC-MS/MS檢測法，測定的沙丁胺醇對映體最低定量限為100.0pg/mL，四硫基沙丁胺醇的最低定量限為5.000ng/mL，且單獨(dú)測定沙丁胺醇時(shí)，最低定量限可達(dá)到25.00pg/mL。受試者吸入1200μg沙丁胺醇后，血漿中R-沙丁胺醇、S-沙丁胺醇的Cmax分別約為2.000ng/mL、3.500ng/mL，LLOQ需至少低于200.0pg/mL，此方法已經(jīng)達(dá)到了靈敏度的要求。雖然此方法靈敏度高且同時(shí)進(jìn)行了沙丁胺醇代謝產(chǎn)物的測定，但是滿足其測定所需要的沙丁胺醇血漿樣品量大，同時(shí)測定時(shí)為400μL，單獨(dú)測定時(shí)為500μL，且此方法中沙丁胺醇和四硫基沙丁胺醇對映體沒有完全分離，所以要對現(xiàn)有的檢測方法進(jìn)行改進(jìn)。

1.2檢測材料及儀器

1.2.1對照品：消旋鹽酸班布特羅、消旋鹽酸單胺班布特羅、消旋硫酸特布他林、左旋硫酸沙丁胺醇、消旋硫酸沙丁胺醇、左旋鹽酸特布他林。（所有藥品均有由中國藥品生物制品檢定所提供，純度均大于等于與99%）。

1.2.2基質(zhì)：選擇我院6名健康自愿者的空白血漿以及空白尿樣，空白血液中含有抗凝劑EDTA-K2，通過檢測證明空白血漿以及尿樣內(nèi)無潛在內(nèi)源性干擾物，可用于配制尿樣以及、血漿的質(zhì)控樣品以及標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。

1.2.3儀器：美國Waters公司的高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀由高效液相色譜（ACQUITY I CLASS）串聯(lián)質(zhì)譜（XeVO-TQ-S）組成；德國Hettich公司的UNIVERSAL 320R型臺式高速冷凍離心機(jī)等。

1.3立體選擇性藥動力學(xué)研究：班布特羅的研究方案：選擇5名受檢者，受檢測者在用藥前禁食12h，次日清晨服用消旋鹽酸班布特羅片劑，劑量為10mg。分別于用藥前、用藥后（1、3、6、12、24、48以及72h）抽取受檢者靜脈血5mL，將靜脈血轉(zhuǎn)移至抗凝管，記錄采血時(shí)間，加入50μL新斯的明溶液混勻后于離心，取上層血漿，在-60℃溫度中保存。

沙丁胺醇的研究方案：選擇5名受檢者，受檢測者在用藥前禁食12h，次日清晨服用左旋硫酸沙丁胺醇片，劑量為2.4mg。剩余研究步驟同班布特羅的研究方案。

2結(jié)果

2.1班布特羅實(shí)驗(yàn)實(shí)測數(shù)據(jù)：5名受試者服用消旋鹽酸班布特羅片劑10mg，在規(guī)定的不同時(shí)間點(diǎn)采集血漿，采用LC-MS/MS法測定體內(nèi)血藥濃度，結(jié)果詳見表1。

表1 5例受檢者服藥后血漿中班布特羅濃度變化（pg/mL）

2.2沙丁胺醇實(shí)驗(yàn)實(shí)測數(shù)據(jù)：5名受試者服用左旋硫酸沙丁胺醇片劑2.4 mg，在規(guī)定的不同時(shí)間點(diǎn)采集血漿，采用LC-MS/MS法測定體內(nèi)血藥濃度，結(jié)果詳見表2。

表2 5例受檢者服藥后血漿中沙丁胺醇濃度變化（pg/mL）

2.3沙丁胺醇的代謝產(chǎn)物總結(jié)：在人的尿液、血漿和糞便樣品中共檢測到15種代謝產(chǎn)物，其中尿樣中11種、血樣中3種、糞便中4種。相同的代謝產(chǎn)物：尿樣、血樣和糞便中1種（M6）；尿樣、糞便中1種（M1）。詳見表3。

3討論

班布特羅在治療慢性肺阻以及哮喘上具有非常重要的效果，但目前對于班布特羅藥代動力學(xué)的研究報(bào)道較少，這主要是由于包括單胺班布特羅在內(nèi)的幾個(gè)班布特羅中間代謝產(chǎn)物的藥理活性目前沒有明確。沙丁胺醇對映體主要是以硫酸結(jié)合物的形式從人體內(nèi)清除，目前市場上的沙丁胺醇一般以消旋體混合物的狀態(tài)出現(xiàn)。

本文通過5例受檢者服藥后血漿中班布特羅濃度變化情況發(fā)現(xiàn)，班布特羅對映體在體內(nèi)的代謝是立體選擇性的。本研究在人體中定量測定班布特羅及其兩種代謝物單胺班布特羅和特布他林的手性LC-MS/MS方法。班布特羅對映體的定量下限為25.00pg/mL，單胺班布特羅和特布他林對映體的定量下限為50.00pg/mL，與現(xiàn)有的國內(nèi)外檢測方法相比，本方法靈敏度大大提高，且同時(shí)對班布特羅、單胺班布特羅和特布他林進(jìn)行了定量分析。研究者們發(fā)現(xiàn)［5］，單胺班布特羅的水解過程要比班布特羅的水解過程緩慢許多，導(dǎo)致其在體內(nèi)出現(xiàn)短暫累積。而此現(xiàn)象說明單胺班布特羅可能與特布他林在體內(nèi)的緩慢釋放相關(guān)。本文以班布特羅和沙丁胺醇作為研究對象，通過對其藥代動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，研究了班布特羅及其兩種代謝產(chǎn)物和沙丁胺醇在人體內(nèi)的立體選擇性藥代動力學(xué)，通過比較發(fā)現(xiàn)：班布特羅與沙丁胺醇存在立體選擇性代謝。藥物在體內(nèi)經(jīng)過吸收后，會發(fā)生一系列的化學(xué)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，最終形成與母藥結(jié)構(gòu)相關(guān)的一種或者多種代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)藥物的代謝研究過程中發(fā)現(xiàn)，同一種藥物在不同種屬、不同性別甚至個(gè)體中的代謝存在差異，這可能是藥物代謝酶的水平和組成不同造成的。沙丁胺醇在體內(nèi)的代謝途徑表明其在人體內(nèi)的Ⅰ相代謝主要是氧化、還原、去烷基化反應(yīng)，Ⅱ相代謝主要是葡萄糖醛酸化和硫酸化反應(yīng)，且這以上反應(yīng)相互交錯(cuò)進(jìn)行，造成了代謝產(chǎn)物的多樣性。

綜上所述，班布特羅、沙丁胺醇及它們的代謝產(chǎn)物在代謝上具有立體選擇性。

表3沙丁胺醇的代謝產(chǎn)物總結(jié)

［1］Guan S，Hu CY，He MY，et al.Comparative pharmacokinetics and bile transformation of R-enantiomer and racemic bambuterol after single-dose intravenous，oral administration in rats and beagle dogs［J］.Eur J Drug Metab Pharmacokinet，2014，40（4）：1-8.

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