• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    β-catenin/Akt信號通路在亞硒酸鈉誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡中的機(jī)制研究

    2016-08-07 09:09:43王海波劉延軍陳樹偉武文龍李鳳臣
    中國生化藥物雜志 2016年8期
    關(guān)鍵詞:細(xì)胞株細(xì)胞周期酸鈉

    王海波,劉延軍,陳樹偉,武文龍,李鳳臣

    (解放軍第107醫(yī)院 胃腸科,山東 煙臺 264002)

    β-catenin/Akt信號通路在亞硒酸鈉誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡中的機(jī)制研究

    王海波Δ,劉延軍,陳樹偉,武文龍,李鳳臣

    (解放軍第107醫(yī)院 胃腸科,山東 煙臺 264002)

    目的 探討β-catenin/Akt信號通路在亞硒酸鈉誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡中的機(jī)制研究。方法 培養(yǎng)胃癌細(xì)胞株SGC-7901,0、5、10、20 μmol/L亞硒酸鈉處理細(xì)胞,24 h后流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡率變化;10 μmol/L的亞硒酸鈉處理細(xì)胞,24 h后流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期變化;10 μmol/L的亞硒酸鈉處理細(xì)胞,0、6、12、24 h后Western blot檢測β-catenin、cyclin D1和survivin的蛋白表達(dá)量及蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)的活性。結(jié)果 5、10、20 μmol/L亞硒酸鈉處理細(xì)胞的凋亡率顯著高于0 μmol/L(P<0.01)。10 μmol/L的亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞24 h后,與對照組比較,G0/G1期細(xì)胞顯著減少,S期及G2/M期細(xì)胞顯著增加(P<0.05),G2/M期細(xì)胞增加(P<0.05);10 μmol/L的亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞后,β-catenin、cyclin D1和survivin在6、12和24 h的蛋白表達(dá)量顯著低于0h(P<0.01),且隨著時間的延長,蛋白的表達(dá)量逐漸減少;10 μmol/L的亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞后,p-Akt在6、12和24 h的含量顯著低于0 h(P<0.01),而Akt各時間點比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 亞硒酸鈉能誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡,阻滯細(xì)胞于S期,其作用機(jī)制可能與β-catenin/Akt信號通路有關(guān)。

    亞硒酸鈉;β-catenin/Akt;胃癌;凋亡

    癌癥是機(jī)體內(nèi)細(xì)胞的惡性增殖形成的惡性腫瘤。隨著人們生活方式以及環(huán)境的改變,癌癥的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢,給人們的健康造成了嚴(yán)重的威脅。雖然隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展,癌癥的早期診斷和治療有一定的突破,但癌癥的發(fā)病仍然很高[1-3]。硒是人體必需的一種微量元素,研究顯示,硒不僅能預(yù)防腫瘤的發(fā)生,而且能有效治療腫瘤,主要機(jī)制是引發(fā)腫瘤細(xì)胞的凋亡[4-5]。亞硒酸鈉是最早研究的一種無機(jī)硒,許多研究已經(jīng)證實亞硒酸鈉能促進(jìn)肝癌、骨肉瘤、直腸癌等細(xì)胞的凋亡,但亞硒酸鈉與胃癌細(xì)胞的作用機(jī)制的研究比較少[6-8]。β-catenin對促進(jìn)細(xì)胞凋亡和維持細(xì)胞生存發(fā)揮重要作用[9],蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)能對腫瘤細(xì)胞的活性進(jìn)行調(diào)控[10],因此,本研究對β-catenin/Akt信號通路在亞硒酸鈉誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡中的機(jī)制研究,以期為后續(xù)的研究提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 細(xì)胞:胃癌細(xì)胞株SGC-7901由山東大學(xué)細(xì)胞生物研究中心提供。

    1.1.2 試劑:β-catenin、Akt、cyclin D1、survivin單克隆抗體均購自美國Abcaminc;DMEM培養(yǎng)基購自美國Gibco;亞硒酸鈉、胰蛋白酶均購自美國Sigma;Annexin V-FITC凋亡試劑盒購自美國BD;碘化丙啶購自Sigma-Aldrich;RNA酶購自Invitrogen。

    1.1.3 儀器:CK2-TRC-3型倒置熒光顯微鏡購自日本Olympus;BB5060UV型細(xì)胞培養(yǎng)箱購自德國Heraeus;LSR II流式細(xì)胞儀購自美國BD;DYCZ-24EN垂直電泳槽購自北京六一儀器。

    1.2 方法

    1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng):從液氮罐中取出裝有胃癌細(xì)胞株SGC-7901的凍存管,放入事先調(diào)好溫度的37 ℃水浴鍋中解凍,并輕輕搖動冷凍管使其在1 min內(nèi)全部融化,加入含有10% FBS的DMEM細(xì)胞生長液的離心管中,1000 r/min離心8 min,棄上清,加入細(xì)胞生長液懸浮細(xì)胞,接種于細(xì)胞96孔培養(yǎng)板中,37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,更換培養(yǎng)基。細(xì)胞融合度達(dá)到90%時,倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液,PBS洗滌細(xì)胞2次,加入1 mL胰酶消化細(xì)胞,細(xì)胞呈單個存在時,終止消化,1000 r/min離心8 min,除去酶消化液,PBS重懸細(xì)胞,離心后加入細(xì)胞生長液,將細(xì)胞種植于培養(yǎng)板中,37 ℃,5%CO2濃度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

    1.2.2 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染:取對數(shù)生長期的胃癌細(xì)胞株SGC-7901,0.25 %的胰酶消化細(xì)胞,觀察到細(xì)胞呈單個存在時,轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中,1000 r/min離心7 min,棄上清,加入不含有胎牛血清的不完全培養(yǎng)液接種到細(xì)胞培養(yǎng)板中,在37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h。0、5、10、20 μmol/L亞硒酸鈉與不完全培養(yǎng)基混合后加入到胃癌細(xì)胞株SGC-7901中,37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6 h后,更換為含有胎牛血清的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

    1.2.3 流式儀檢測細(xì)胞凋亡:取加入0、5、10、20 μmol/L亞硒酸鈉處理的胃癌細(xì)胞株SGC-7901,培養(yǎng)24 h后,加入0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞為單個細(xì)胞,加入PBS重懸細(xì)胞,并調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106個/mL,取1 mL細(xì)胞懸液至離心管中,1000 r/min,4 ℃離心8 min,棄去上清,PBS洗滌細(xì)胞2次,在沉淀中加入200 μL Binding Buffer,混合均勻后分別加入5 μL PI和 Annexin-V,避光室溫靜置20 min ,加400 μL緩沖液,流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞凋亡情況。共檢測3次。

    1.2.4 細(xì)胞周期檢測:取對數(shù)生長期的胃癌細(xì)胞5×104個/mL培養(yǎng)24 h后,加入10 μmol/L的亞硒酸鈉共培養(yǎng)24 h,同時設(shè)置對照組(無亞硒酸鈉)。收集細(xì)胞,PBS洗滌細(xì)胞,4 ℃乙醇固定12 h后,離心除去乙醇,加入1% 200 μL RNA酶溶液,37 ℃、15 min水浴,加入碘化丙啶,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。共檢測3次。

    1.2.5 Western blot檢測β-catenin、cyclin D1、survivin的表達(dá)及Akt蛋白的活性:10 μmol/L的亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞0、6、12、24 h后,收集細(xì)胞,棄上清,PBS洗滌細(xì)胞3次,胰酶消化細(xì)胞,1000 r/min,離心8 min,PBS懸浮細(xì)胞。按照試劑盒步驟提取細(xì)胞蛋白和測定提取的蛋白濃度。將蛋白樣品與上樣緩沖液充分混合,100 ℃變性5 min。每孔加入50 μL樣品,調(diào)整電泳時電壓。電泳結(jié)束后,取出蛋白凝膠,將濾紙、凝膠、PVDF膜、濾紙依次夾好,4 ℃轉(zhuǎn)膜過夜。取出PVDF膜用5%脫脂奶粉封閉后,分別以β-catenin、cyclin D1、survivin、Akt作為一抗(1:500),4℃孵育過夜,TBST清洗后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(1:1000),37 ℃孵育1h,TBST清洗后加入ECL發(fā)光劑顯影,以β-actin為內(nèi)參用自動凝膠成像系統(tǒng)采集圖像并計算蛋白表達(dá)率。

    2 結(jié)果

    2.1 不同濃度亞硒酸鈉對細(xì)胞凋亡率的影響 0、5、10、20 μmol/L的亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞24 h后,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡率。5、10、20 μmol/L的亞硒酸鈉處理的細(xì)胞的凋亡率(12.46±1.08、21.79±1.42、14.34±1.16)顯著高于 0 μmol/L(3.12±0.78)(P<0.01),其中10 μmol/L亞硒酸鈉處理的細(xì)胞凋亡率高于5 μmol/L和20 μmol/L(P<0.01),因此選擇10 μmol/L做后續(xù)研究。見圖1。

    圖1 不同濃度的亞硒酸鈉處理對胃癌細(xì)胞凋亡率的影響A:流式細(xì)胞結(jié)果;B:細(xì)胞凋亡率**P<0.01,與0 μmol/L比較Fig.1 Effect of sodium selenite at different concentrations on apoptosis rate (n=3,±s)A:flow cytometry;B: apoptosis rate**P<0.01,compared with 0 μmol/L

    2.2 細(xì)胞周期檢測 10 μmol/L亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞24 h后,與對照組比較,G0/G1期細(xì)胞減少,S期及G2/M期細(xì)胞增加(P<0.05,P<0.01),說明細(xì)胞發(fā)生S期阻滯,細(xì)胞增殖受到抑制。見表1。

    表1 亞硒酸鈉處理對細(xì)胞周期的影響Tab.1 Effect of sodium selenite on cell cycle (n=3,±s,%)

    *P<0.05,**P<0.01,與0 μmol/L比較,compared with 0 μmol/L

    2.3 Western blot檢測不同時間點β-catenin、cyclin D1和survivin檢測 10 μmol/L亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞后,β-catenin、cyclin D1和survivin在6、12、24 h的蛋白表達(dá)量顯著低于0 h(P<0.01),且隨著時間延長,蛋白的表達(dá)量逐漸減少,說明亞硒酸鈉處理能抑制細(xì)胞蛋白的表達(dá)。見圖2、表2。

    圖2 Western blot檢測亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞后相關(guān)蛋白表達(dá)量Fig.2 Related protein expression treated by sodium selenite detected by Western blot

    組別蛋白表達(dá)率β?catenincyclinD1survivin0h0628±00150506±00110602±0014 6h0439±0012??0377±0012??0413±0013??12h0189±0007??0142±0007??0164±0009??24h0102±0004??0007±0002??0099±0003??

    **P<0.01,與0 μmol/L比較,compared with 0 μmol/L

    2.4 Western blot檢測Akt活性 10 μmol/L亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞后,Akt在0、6、12、24 h比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,p-Akt在6、12、24 h的蛋白表達(dá)量顯著低于0h(P<0.01),說明亞硒酸鈉能抑制Akt的激活。見圖3、表3。

    圖3 Western blot檢測亞硒酸鈉處理細(xì)胞p-Akt及Akt蛋白變化情況Fig.3 p-Akt and Akt expression treated by sodium selenite detected by Western blot

    組別蛋白表達(dá)量Aktp?Akt0h122±00110421±00076h120±00120302±0008??12h119±00100199±0007??24h121±00090105±0006??

    **P<0.01,與0 μmol/L比較,compared with 0 μmol/L

    3 討論

    硒是生物體必須的一種微量元素,主要以硒化合物的形式存在,研究顯示,硒對人類的健康發(fā)揮重要的作用,能延緩衰老、抗腫瘤等作用,已受到廣大研究者的關(guān)注[11-12]。胃癌是一種消化道惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展不僅與細(xì)胞的惡性增殖和異常分化有關(guān),而且與腫瘤細(xì)胞的凋亡也有很大的關(guān)系[13-14]。因此,研究硒對腫瘤細(xì)胞的影響機(jī)制具有重要意義。

    硒化合物能夠通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和增加細(xì)胞毒性從而對腫瘤細(xì)胞造成影響[15]。當(dāng)高濃度的硒化合物作用于腫瘤細(xì)胞時,能引起細(xì)胞直接的毒性作用,使細(xì)胞的結(jié)構(gòu)造成損傷,導(dǎo)致細(xì)胞膜崩解,從而達(dá)到殺死癌細(xì)胞的目的[16-17]。研究顯示,亞硒酸鈉能誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡,作用機(jī)制與細(xì)胞周期有關(guān)[18]。本研究中,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,結(jié)果發(fā)現(xiàn)5、10、20 μmol/L的亞硒酸鈉處理的細(xì)胞的凋亡率顯著高于 0 μmol/L(P<0.01)。進(jìn)一步研究亞硒酸鈉對細(xì)胞周期的影響,發(fā)現(xiàn)10 μmol/L的亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞24 h后,與對照組比較,G0/G1期細(xì)胞減少,S期細(xì)胞增加(P<0.01),其原因可能是亞硒酸鈉使細(xì)胞發(fā)生S期阻滯,進(jìn)而使細(xì)胞增殖受到抑制有關(guān)。

    β-catenin是Wnt中的一員,在細(xì)胞通訊中占有重要作用,參與腫瘤的發(fā)生以及轉(zhuǎn)移[19]。當(dāng)細(xì)胞中無Wnt信號時,β-catenin被糖原合成激酶-3(Glycogen Synthase Kinase3,GSK-3)磷酸化,與結(jié)腸腺瘤樣息肉蛋白(adenomatous polyposis coli,APC)等蛋白結(jié)合而被降解。當(dāng)Wnt與β-catenin受體結(jié)合后,能抑制GSK3,β-catenin不能被降解,在胞質(zhì)中不斷積累,積累過多時,就會轉(zhuǎn)入核內(nèi),與淋系增強子結(jié)合因子1(lymphoid enhancer factor,LEF1)和轉(zhuǎn)錄因子-4(transcription factor 4 ,TCF4)結(jié)合,對cyclin D1、survivin等靶基因進(jìn)行調(diào)控,從而參與細(xì)胞的活動,調(diào)控多種疾病的發(fā)生[20-21]。本研究用10 μmol/L的亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞后,結(jié)果顯示,β-catenin、cyclin D1和survivin在6、12 h和24 h的蛋白表達(dá)量顯著低于0h(P<0.01),且隨著時間的延長,蛋白的表達(dá)量逐漸減少,說明亞硒酸鈉處理能抑制細(xì)胞蛋白的表達(dá)。

    Akt在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)量很高,是細(xì)胞內(nèi)重要的促進(jìn)存活因子[22]。研究表明,Akt能使β-catenin發(fā)生磷酸化,促進(jìn)β-catenin的入核和轉(zhuǎn)錄[23]。因此,本研究用10 μmol/L亞硒酸鈉作用于胃癌細(xì)胞后,結(jié)果顯示亞硒酸鈉能降低Akt的磷酸化(P<0.01),說明亞硒酸鈉能抑制Akt的激活。

    綜上所述,亞硒酸鈉能誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡,阻滯細(xì)胞于S期,其作用機(jī)制可能與β-catenin/Akt信號通路相關(guān)。

    [1] 呂晴, 侯日瑩, 王艷軍. 國內(nèi)外老年人牙齒脫落病因?qū)W研究進(jìn)展[J]. 中國老年學(xué)雜志, 2015, 35(23): 317-319.

    [2] 陳萬青, 鄭榮壽, 曾紅梅, 等. 2011年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析 [J]. 中國腫瘤, 2015, 24(1): 1-10.

    [3] Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics, 2015[J].CA Cancer J Clin, 2015, 65(1): 5-29.

    [4] 胡芬, 王鈺雷, 熊斌. 硒結(jié)合蛋白 1 通過抑制超氧化物歧化酶增強奧沙利鉑的細(xì)胞毒作用[J]. 武漢大學(xué)學(xué)報: 醫(yī)學(xué)版, 2015, 36(3): 363-368.

    [5] 趙鵬, 趙上, 王艷, 等. Fas 及 TRF1, TRF2 在亞硒酸鈉誘導(dǎo)胃癌 SGC-7901 細(xì)胞凋亡過程中的表達(dá)[J]. 營養(yǎng)學(xué)報, 2014, 36(2): 149-153.

    [6] 安佳佳. 亞硒酸鈉通過 ROS/JNK/ATF2 通路誘導(dǎo)白血病 NB4 細(xì)胞周期阻滯和凋亡的機(jī)制研究[D].北京:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院, 2014.

    [7] Thomson JJ, Withey JH. Bicarbonate increases binding affinity of Vibrio cholerae ToxT to virulence gene promoters[J]. J Bacteriolol, 2014, 196(22): 3872-3880.

    [8] 駱新, 石勁松, 盧偉, 等. 亞硒酸鈉對結(jié)直腸癌 HT-29 細(xì)胞 AMPK/mTOR 通路活化及凋亡的影響[J]. 中國老年學(xué)雜志, 2014, 34(14): 3935-3937.

    [9] Azzolin L, Panciera T, Soligo S, et al. YAP/TAZ incorporation in the β-catenin destruction complex orchestrates the Wnt response[J]. Cell, 2014, 158(1): 157-170.

    [10] Wang F, Xiao W, Sun J, et al. MiRNA-181c inhibits EGFR-signaling-dependent MMP9 activation via suppressing Akt phosphorylation in glioblastoma[J]. Tumor Biol, 2014, 35(9): 8653-8658.

    [11] 鄭景慧. 提高烏雞產(chǎn)蛋量的技術(shù)措施[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī), 2014 (7): 120-121.

    [12] Hatfield DL, Tsuji PA, Carlson BA, et al. Selenium and selenocysteine: roles in cancer, health, and development[J]. Trends Biochem Sci, 2014, 39(3): 112-120.

    [13] Nagatsuma AK, Aizawa M, Kuwata T, et al. Expression profiles of HER2, EGFR, MET and FGFR2 in a large cohort of patients with gastric adenocarcinoma[J]. Gastric Cancer, 2015, 18(2): 227-238.

    [14] Fuse N, Kuboki Y, Kuwata T, et al. Prognostic impact of HER2, EGFR, and c-MET status on overall survival of advanced gastric cancer patients[J]. Gastric Cancer, 2016, 19(1): 183-191.

    [15] 劉賽君, 郭梅艷, 鄧列華, 等. 亞硒酸鈉對 UVB 損傷人角質(zhì)形成細(xì)胞的保護(hù)作用[J]. 中國病理生理雜志, 2015, 31(1): 177-180.

    [16] Misra S, Boylan M, Selvam A, et al. Redox-active selenium compounds—from toxicity and cell death to cancer treatment[J]. Nutrients, 2015, 7(5): 3536-3556.

    [17] Fernandes AP, Gandin V. Selenium compounds as therapeutic agents in cancer[J]. Biochim Biophys Acta, 2015, 1850(8): 1642-1660.

    [18] 王艷, 趙上, 蘇衍萍, 等. 亞硒酸鈉通過線粒體途徑誘導(dǎo)人胃癌 SGC-7901 細(xì)胞凋亡的機(jī)制[J]. 解剖學(xué)報, 2016, 47(3): 353-358.

    [19] Tu X, Delgado-Calle J, Condon KW, et al. Osteocytes mediate the anabolic actions of canonical Wnt/β-catenin signaling in bone[J].Proc Natl Acad Sci, 2015, 112(5): E478-E486.

    [20] Meffre D, Massaad C, Grenier J. Lithium chloride stimulates PLP and MBP expression in oligodendrocytes via Wnt/β-catenin and Akt/CREB pathways[J]. Neuroscience, 2015, 284: 962-971.

    [21] Ploper D, Taelman VF, Robert L, et al. MITF drives endolysosomal biogenesis and potentiates Wnt signaling in melanoma cells[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2015, 112(5): E420-E429.

    [22] Crompton J G, Sukumar M, Roychoudhuri R, et al. Akt inhibition enhances expansion of potent tumor-specific lymphocytes with memory cell characteristics[J]. Cancer Res, 2015, 75(2): 296-305.

    [23] Zhang B, Yang Y, Shi X, et al. Proton pump inhibitor pantoprazole abrogates adriamycin-resistant gastric cancer cell invasiveness via suppression of Akt/GSK-β/β-catenin signaling and epithelial-mesenchymal transition[J]. Cancer letters, 2015, 356(2): 704-712.

    (編校:王儼儼)

    Mechanism of β-catenin/Akt signaling pathway in apoptosis of gastric cancer cells induced by selenite sodium

    WANG Hai-boΔ, LIU Yan-jun, CHEN Shu-wei, WU Wen-long, LI Feng-chen

    (Department of Gastroenterology, PLA 107th hospital, Yantai 264000, China)

    ObjectiveTo explore the mechanism of β-catenin/Akt signaling pathway in the apoptosis of gastric cancer cells induced by selenite sodium.MethodsGastric cancer cell line SGC-7901 was cultured, and 0 mol/L, 5 mol/L, 10 mol/L and 20 mol/L selenite sodium treated cells; flow cytometry was used to detect the cell apoptosis rate after 24 h; 10 mol/L sodium selenite treated cells, flow cytometry was used to detect the cell cycle changes after 24 h; 10 mol/L sodium selenite treated cells,protein expression of β- catenin,cyclin D1 and protein kinase B (Akt) activity were detected by Western blot after 0,6,12,24 h.ResultsCells apoptosis rate was significantly higher than 0 mol/L after cells was treated by 5 mol/L, 10 mol/L and 20 mol/L sodium selenite, due to cells apoptosis rate was higher by 10 mol/L sodium selenite treated than 5 mol/L and 20 mol/L, 10 mol/L sodium selenite treated cells for follow-up study; gastric cancer cells was treated by 10 mol/L sodium selenite for 24 h, compared with the control group, G0/G1 phase cells decreased, cells in S phase and G2/M phase significantly increased(P<0.05);gastric cancer cells was treated by 10 mol/L sodium selenite for 0 h, 6 h, 12 h and 24 h,protein expression of β-catenin and cyclin D1 and Survivin in 6 h, 12 h and 24 h was significantly lower than that in 0 hour(P<0.01),and with the extension of time, protein expression gradually decreased; gastric cancer cells was treated by 10 mol/L sodium selenite could significantly decrease the phosphorylation of p-Akt in 6,12,24 h, while there was no significant difference of Akt among difference time points(P<0.01).ConclusionSodium selenite could induce apoptosis of gastric cancer cells, and the cells were arrested in S phase. The mechanism may be associated with beta-catenin/Akt signaling pathway.

    sodium selenite;β-catenin/Akt; gastric cancer; apoptosis

    山東省優(yōu)秀中青年科學(xué)家科研獎勵基金(BS2009SW010)

    王海波,通信作者,男,碩士,副主任醫(yī)師,研究方向:胃癌,E-mail:wang13145356111@163.com。

    R735.2

    A

    猜你喜歡
    細(xì)胞株細(xì)胞周期酸鈉
    阿侖膦酸鈉聯(lián)用唑來膦酸治療骨質(zhì)疏松
    紅霉素聯(lián)合順鉑對A549細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡的影響
    NSCLC survivin表達(dá)特點及其與細(xì)胞周期的關(guān)系研究
    X線照射劑量率對A549肺癌細(xì)胞周期的影響
    丙戊酸鈉對首發(fā)精神分裂癥治療增效作用研究
    穩(wěn)定敲低MYH10基因細(xì)胞株的建立
    熊果酸對肺癌細(xì)胞株A549及SPCA1細(xì)胞周期的抑制作用
    Rab27A和Rab27B在4種不同人肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)
    穩(wěn)定抑制PAK2蛋白表達(dá)的HUH—7細(xì)胞株的建立
    CYP2E1基因過表達(dá)細(xì)胞株的建立及鑒定
    国产伦在线观看视频一区| 国产黄色免费在线视频| 色吧在线观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产日韩欧美在线精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久国产乱子免费精品| 亚洲精品国产色婷婷电影| 99久久精品国产国产毛片| 欧美3d第一页| 免费看不卡的av| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久热久热在线精品观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 一边亲一边摸免费视频| 春色校园在线视频观看| tube8黄色片| 亚洲av二区三区四区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 亚洲人成网站在线观看播放| 赤兔流量卡办理| 女人精品久久久久毛片| 成人国产av品久久久| 麻豆成人午夜福利视频| 各种免费的搞黄视频| 久久精品国产自在天天线| 亚洲av男天堂| 久久人人爽人人爽人人片va| 中文字幕av电影在线播放| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲欧美清纯卡通| 久久久久精品性色| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲精品成人av观看孕妇| 简卡轻食公司| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产精品三级大全| 高清欧美精品videossex| 九九爱精品视频在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 男人和女人高潮做爰伦理| 97精品久久久久久久久久精品| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产精品.久久久| freevideosex欧美| 亚洲精品色激情综合| 最近中文字幕高清免费大全6| 熟女人妻精品中文字幕| 国产视频内射| 99热全是精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 在线观看免费日韩欧美大片 | 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 水蜜桃什么品种好| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产综合精华液| 精品一区在线观看国产| 777米奇影视久久| 97在线视频观看| 国产精品女同一区二区软件| 久久久久久久精品精品| 免费观看无遮挡的男女| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久99热这里只频精品6学生| 高清不卡的av网站| 毛片一级片免费看久久久久| 精品国产国语对白av| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国模一区二区三区四区视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 内射极品少妇av片p| 伊人亚洲综合成人网| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产片特级美女逼逼视频| 国产精品久久久久久久久免| 国产高清不卡午夜福利| 免费高清在线观看视频在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 天堂俺去俺来也www色官网| 五月天丁香电影| 亚洲欧美一区二区三区国产| 另类精品久久| 久热久热在线精品观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 高清毛片免费看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 在线观看国产h片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品久久久噜噜| av福利片在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 老司机影院成人| 久久久久久久久久久丰满| 国产探花极品一区二区| 少妇人妻久久综合中文| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲精品456在线播放app| 国产成人freesex在线| 久久久午夜欧美精品| 国产精品免费大片| 99热6这里只有精品| 久久狼人影院| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美另类一区| 免费在线观看成人毛片| 国产精品国产av在线观看| freevideosex欧美| 久久综合国产亚洲精品| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久久国产精品麻豆| 色婷婷av一区二区三区视频| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 久久影院123| 日本黄色片子视频| 秋霞伦理黄片| 2022亚洲国产成人精品| 卡戴珊不雅视频在线播放| 婷婷色av中文字幕| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 最新中文字幕久久久久| 日本爱情动作片www.在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 高清视频免费观看一区二区| 制服丝袜香蕉在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 乱系列少妇在线播放| 国产伦理片在线播放av一区| 成人黄色视频免费在线看| 丰满乱子伦码专区| 极品教师在线视频| 人妻一区二区av| 国产熟女午夜一区二区三区 | 亚洲四区av| 日韩电影二区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 偷拍熟女少妇极品色| 一级黄片播放器| 国产欧美日韩精品一区二区| av在线观看视频网站免费| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产精品伦人一区二区| 看十八女毛片水多多多| 丰满人妻一区二区三区视频av| 女性被躁到高潮视频| 久久久国产欧美日韩av| 成人毛片a级毛片在线播放| 免费少妇av软件| 成人免费观看视频高清| 99热国产这里只有精品6| 好男人视频免费观看在线| 中文字幕亚洲精品专区| 成人免费观看视频高清| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 午夜老司机福利剧场| 亚洲av成人精品一区久久| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 成人无遮挡网站| 久久久久久久久久久丰满| 成人亚洲欧美一区二区av| 一级,二级,三级黄色视频| 国产熟女欧美一区二区| 婷婷色av中文字幕| 老熟女久久久| 精品视频人人做人人爽| .国产精品久久| 国产永久视频网站| 国产一区二区在线观看日韩| 黄片无遮挡物在线观看| 一级a做视频免费观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 丰满少妇做爰视频| 免费在线观看成人毛片| 一级毛片aaaaaa免费看小| 少妇高潮的动态图| 国产免费福利视频在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 精品熟女少妇av免费看| 中国国产av一级| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲久久久国产精品| 日本色播在线视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 天堂俺去俺来也www色官网| 麻豆成人av视频| 国产一区二区在线观看av| 能在线免费看毛片的网站| 国产一区有黄有色的免费视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲第一av免费看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 97超视频在线观看视频| 欧美3d第一页| 伊人亚洲综合成人网| 久久6这里有精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 久久久国产精品麻豆| 亚洲伊人久久精品综合| 曰老女人黄片| 日韩成人伦理影院| 大片电影免费在线观看免费| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美性感艳星| 九九爱精品视频在线观看| 91久久精品电影网| 91在线精品国自产拍蜜月| 午夜影院在线不卡| 欧美精品一区二区免费开放| 国产精品一区www在线观看| 中文资源天堂在线| 日韩制服骚丝袜av| 在线观看www视频免费| 免费看光身美女| xxx大片免费视频| 亚洲人与动物交配视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 街头女战士在线观看网站| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲精品一二三| 成人黄色视频免费在线看| 大香蕉97超碰在线| 99re6热这里在线精品视频| 日本vs欧美在线观看视频 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲成人一二三区av| 久久人妻熟女aⅴ| 丰满乱子伦码专区| 一个人免费看片子| 美女大奶头黄色视频| √禁漫天堂资源中文www| 97精品久久久久久久久久精品| 久久女婷五月综合色啪小说| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产成人aa在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 免费av中文字幕在线| 国产日韩欧美视频二区| 精品国产露脸久久av麻豆| 一边亲一边摸免费视频| 精品亚洲成国产av| 日本与韩国留学比较| 久久99热这里只频精品6学生| 男人添女人高潮全过程视频| 少妇丰满av| 少妇 在线观看| 岛国毛片在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久久午夜欧美精品| 最近手机中文字幕大全| 亚洲国产精品999| 精品国产乱码久久久久久小说| 老司机影院成人| 亚洲,欧美,日韩| xxx大片免费视频| 在线观看www视频免费| 欧美+日韩+精品| 日韩伦理黄色片| av天堂中文字幕网| 黄片无遮挡物在线观看| 精品久久国产蜜桃| 在线 av 中文字幕| 国产午夜精品一二区理论片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 九九在线视频观看精品| 日本av免费视频播放| 97在线视频观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久久久久人妻| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 69精品国产乱码久久久| 久久午夜综合久久蜜桃| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久久久久伊人网av| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 日韩一区二区视频免费看| 男的添女的下面高潮视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 日日啪夜夜爽| 伊人亚洲综合成人网| 黄色怎么调成土黄色| 青春草视频在线免费观看| 欧美精品一区二区免费开放| 成年人午夜在线观看视频| 免费av不卡在线播放| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久久久久国产电影| av免费观看日本| 大香蕉97超碰在线| 国产有黄有色有爽视频| 国产黄片视频在线免费观看| 久久av网站| 777米奇影视久久| 又爽又黄a免费视频| 亚洲av中文av极速乱| 在线观看免费高清a一片| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久久久视频综合| videos熟女内射| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产淫片久久久久久久久| 成年人免费黄色播放视频 | 国内精品宾馆在线| 九草在线视频观看| 青青草视频在线视频观看| 日本91视频免费播放| 亚洲天堂av无毛| 男人爽女人下面视频在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 99热网站在线观看| 妹子高潮喷水视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 欧美+日韩+精品| 国产视频首页在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲国产欧美在线一区| 99久久人妻综合| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 国产中年淑女户外野战色| 看十八女毛片水多多多| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久毛片免费看一区二区三区| 有码 亚洲区| 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲人与动物交配视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 性色avwww在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 久久午夜综合久久蜜桃| 一级毛片aaaaaa免费看小| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 中文天堂在线官网| 国产在视频线精品| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产亚洲欧美精品永久| 91成人精品电影| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久精品夜色国产| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久久久网色| 免费观看av网站的网址| 国精品久久久久久国模美| 黄色欧美视频在线观看| 免费观看a级毛片全部| 久久久久精品性色| 欧美精品一区二区大全| 久久国产亚洲av麻豆专区| 两个人免费观看高清视频 | 国产黄色视频一区二区在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 午夜福利视频精品| 亚洲无线观看免费| 亚洲综合色惰| 亚洲图色成人| 日本色播在线视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 蜜臀久久99精品久久宅男| 97精品久久久久久久久久精品| 在线天堂最新版资源| 能在线免费看毛片的网站| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产在线免费精品| 六月丁香七月| 国产成人freesex在线| 精品少妇久久久久久888优播| 久久狼人影院| 边亲边吃奶的免费视频| 国产一区二区在线观看日韩| 成人二区视频| 国产一区二区在线观看日韩| 国产69精品久久久久777片| 三级国产精品欧美在线观看| 一区二区三区免费毛片| 大香蕉久久网| av国产久精品久网站免费入址| 国产乱来视频区| 国产精品国产三级专区第一集| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 99视频精品全部免费 在线| 在线观看免费高清a一片| 亚洲国产精品999| 欧美少妇被猛烈插入视频| 另类精品久久| 婷婷色综合大香蕉| 嘟嘟电影网在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 六月丁香七月| 黄色配什么色好看| 久久青草综合色| 97超碰精品成人国产| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品偷伦视频观看了| 国内精品宾馆在线| 亚洲av二区三区四区| 国产色婷婷99| 国产精品一区二区在线观看99| 26uuu在线亚洲综合色| 精品卡一卡二卡四卡免费| 18禁动态无遮挡网站| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲欧洲国产日韩| 老司机亚洲免费影院| av在线app专区| 青春草视频在线免费观看| 国产av精品麻豆| 久久综合国产亚洲精品| h视频一区二区三区| 日韩中字成人| 一区二区三区免费毛片| 新久久久久国产一级毛片| 交换朋友夫妻互换小说| 99久久精品国产国产毛片| 久久久久久久久久久免费av| 能在线免费看毛片的网站| 午夜福利,免费看| 日本爱情动作片www.在线观看| 日韩一区二区视频免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看| videos熟女内射| 日本vs欧美在线观看视频 | 久久亚洲国产成人精品v| 简卡轻食公司| 亚洲av欧美aⅴ国产| 99热这里只有是精品在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 亚洲国产欧美在线一区| 日本欧美视频一区| av天堂久久9| 免费看不卡的av| av天堂久久9| 18+在线观看网站| 十分钟在线观看高清视频www | 极品教师在线视频| 国产永久视频网站| 久久人人爽人人片av| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 精品一区二区免费观看| h视频一区二区三区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 高清av免费在线| 成人综合一区亚洲| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 91午夜精品亚洲一区二区三区| av国产精品久久久久影院| 国产一区二区三区综合在线观看 | 午夜日本视频在线| 日韩欧美精品免费久久| 天天操日日干夜夜撸| 2021少妇久久久久久久久久久| 精品人妻偷拍中文字幕| 丰满乱子伦码专区| 麻豆成人av视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 看免费成人av毛片| 国产免费视频播放在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 国产精品久久久久成人av| 在线观看av片永久免费下载| 我要看黄色一级片免费的| 制服丝袜香蕉在线| 国产片特级美女逼逼视频| 女性生殖器流出的白浆| 伦理电影免费视频| 亚洲三级黄色毛片| 成人特级av手机在线观看| 中文字幕制服av| 2022亚洲国产成人精品| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 观看美女的网站| 丝袜喷水一区| 亚洲欧洲国产日韩| 久久精品久久久久久久性| 男的添女的下面高潮视频| videossex国产| 亚洲av综合色区一区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 人人澡人人妻人| 久久精品夜色国产| 亚洲图色成人| 在线精品无人区一区二区三| 日韩制服骚丝袜av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 秋霞伦理黄片| 国产精品偷伦视频观看了| 国产精品久久久久成人av| 亚洲第一av免费看| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲人与动物交配视频| 黑丝袜美女国产一区| 一级毛片久久久久久久久女| 免费少妇av软件| 街头女战士在线观看网站| 国产精品久久久久久精品电影小说| 免费大片黄手机在线观看| 人人澡人人妻人| 国产av一区二区精品久久| 亚洲自偷自拍三级| 伊人久久国产一区二区| 日韩中字成人| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 日日撸夜夜添| 国产精品国产三级国产专区5o| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产精品熟女久久久久浪| 国产真实伦视频高清在线观看| 如何舔出高潮| 亚洲伊人久久精品综合| 成人美女网站在线观看视频| 欧美国产精品一级二级三级 | 精品国产国语对白av| 久久国产精品大桥未久av | 两个人免费观看高清视频 | 国产色婷婷99| 国产精品一区二区在线不卡| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产黄频视频在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 欧美精品国产亚洲| 91精品一卡2卡3卡4卡| 久久97久久精品| 人体艺术视频欧美日本| videossex国产| 国产成人精品无人区| 亚洲精品国产av蜜桃| 婷婷色综合大香蕉| av专区在线播放| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久久久久久久久久免费av| 99久国产av精品国产电影| 欧美精品一区二区免费开放| 99久久人妻综合| 中国国产av一级| 久久av网站| 精品久久久精品久久久| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 欧美3d第一页| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 日本91视频免费播放| 极品人妻少妇av视频| 人人妻人人看人人澡| 久久青草综合色| 人体艺术视频欧美日本| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲久久久国产精品| 六月丁香七月| 寂寞人妻少妇视频99o| 性色av一级| av在线观看视频网站免费| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成人特级av手机在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲人与动物交配视频| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美精品高潮呻吟av久久| 97在线视频观看| 国产av精品麻豆| 精品少妇久久久久久888优播| 高清黄色对白视频在线免费看 | 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲精品日本国产第一区| 黄片无遮挡物在线观看| videos熟女内射| 黄片无遮挡物在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲精品456在线播放app| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产伦在线观看视频一区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产永久视频网站| 中文在线观看免费www的网站| 男女国产视频网站| 插逼视频在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| xxx大片免费视频| 亚洲成色77777| 欧美精品亚洲一区二区| 一区在线观看完整版| 欧美精品高潮呻吟av久久| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 天堂中文最新版在线下载| 妹子高潮喷水视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲精品一二三| 精品少妇内射三级| 满18在线观看网站| 丝袜在线中文字幕|