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    洋蔥干預(yù)后對去勢大鼠骨質(zhì)疏松的影響

    2016-08-06 12:35:04郭輝茍麗熊鑫鑫姚曉龍楊培培李白艷
    中國骨質(zhì)疏松雜志 2016年4期
    關(guān)鍵詞:去勢血鈣洋蔥

    郭輝 茍麗 熊鑫鑫 姚曉龍 楊培培 李白艷*

    1. 新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院影像中心,烏魯木齊 830054 2. 新疆自治區(qū)人民醫(yī)院消化內(nèi)科,烏魯木齊 830001

    絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(post menopausal osteoporosis,PMOP)是中老年婦女的常見病、多發(fā)病,其發(fā)病率緊隨糖尿病、心腦血管疾病,躍居老年疾病第三位。隨著PMOP的發(fā)病率逐年上升,對人類的健康危害更加明顯?,F(xiàn)有抗骨質(zhì)疏松治療藥物大多都有不同程度的毒副作用,服藥時(shí)間長,費(fèi)用昂貴,患者依從性較差[1-2]。尋找合適有效預(yù)防及治療藥物,減輕患者及社會的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)、延續(xù)患者的生命,PMOP將成為前所未有的公共衛(wèi)生問題。

    洋蔥,俗稱圓蔥或蔥頭,為多年生百合科草本植物,常以肥大的鱗莖作為蔬菜食用[3],洋蔥主要含硫化物、類黃酮和前列腺素類成分,具有抑菌、抗癌和抗氧化的作用[4]。研究報(bào)道,洋蔥提取物對高血壓、高血脂、糖尿病、動脈粥樣硬化、冠心病、胃癌、骨質(zhì)疏松等病癥有一定的預(yù)防和治療作用[3,5-6]。目前,國內(nèi)關(guān)于洋蔥與骨質(zhì)疏松研究少有報(bào)道,且洋蔥抗骨質(zhì)疏松作用機(jī)理還不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過洋蔥粉體內(nèi)干預(yù)去勢大鼠-骨質(zhì)疏松動物模型,在明確洋蔥粉對骨質(zhì)疏松防治效果的基礎(chǔ)上,以期明確其作用機(jī)制。

    1 資料和方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動物與分組

    實(shí)驗(yàn)于2014年11月至2015年5月在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院科技樓動物實(shí)驗(yàn)中心及其院內(nèi)完成。選取新疆醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)室(許可證號:SCXK(新)2011-0004)健康3月同齡雌性SPF級SD大鼠55只,體重為(250g±20)g,未曾交配,動物適應(yīng)飼養(yǎng)1周后,將大鼠按照體重進(jìn)行編號,按照隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠隨機(jī)分為不加任何處理的對照組(CON)10只,其余45只進(jìn)行造模(開腹切除大鼠雙側(cè)卵巢),動物手術(shù)后給予抗生素3d,防止感染,自由攝食,飲水。造模一周后按照同樣方法將造模大鼠隨機(jī)分為:模型組(OVX)、低劑量洋蔥粉組(LO)、中劑量洋蔥粉組(MO)、高劑量洋蔥粉組(HO)。CON與OVX組飲用相應(yīng)體積自來水,LO、MO、HO組均從造模一周后給洋蔥粉水溶劑每天飲用,連續(xù)24周。洋蔥粉劑量依據(jù)文獻(xiàn)[7]低、中、高劑量分別為1.5 g/(100 g·d)、3 g/(100 g·d)、6 g/(100 g·d),飼養(yǎng)24周后處死。

    1.2 檢測指標(biāo)

    SD大鼠每周測量一次體重,飼養(yǎng)12周和24周后各測量一次骨密度,第24周測完骨密度后,進(jìn)行腹主動脈采血后處死。檢測以下指標(biāo):(1)骨密度:麻醉后的動物置雙能X線骨密度儀,利用小動物專用軟件分析左側(cè)股骨上段1/3骨密度。(2) 血清標(biāo)本檢測:所有大鼠腹腔麻醉,進(jìn)行腹主動脈取血法進(jìn)行取血,取血5 mL,靜置半小時(shí),3500 r/min離心5 min,進(jìn)行血清血鈣(Ca)、血磷(P)、雌二醇(E2)等生化指標(biāo)檢測。

    1.3 統(tǒng)計(jì)方法

    2 結(jié)果

    2.1 實(shí)驗(yàn)SD大鼠數(shù)量分析

    去卵巢手術(shù)后第一天死亡3只,因麻醉過量致死;第3天死亡1只,第5天死亡1只,死亡原因可能均為腸胃脹氣、腸梗阻致死;12周測量骨密度后死亡2只(模型組死亡1只,低劑量組死亡1只)。最后納入統(tǒng)計(jì)分析的各組大鼠數(shù)為:CON組10只、OVX組9只、LO組9只、MO組10只,HO組10只,見表1。

    表1 洋蔥干預(yù)12周與24周SD大鼠各項(xiàng)指標(biāo)組間比較Table 1 Comparison of indicators among SD rats of different groups after onion intervention for 12 and 24 weeks

    2.2 實(shí)驗(yàn)SD大鼠體重分析

    5組實(shí)驗(yàn)大鼠喂養(yǎng)12周(F=1.022,P=0.407)、24周(F=0.950,P=0.445)體重組間相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),5組實(shí)驗(yàn)大鼠喂養(yǎng)12周和24周體重進(jìn)行配對t檢驗(yàn),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.4,P=0.168),見表1。

    2.3 實(shí)驗(yàn)SD大鼠各組左側(cè)股骨骨密度檢測結(jié)果分析

    12周后模型組與對照組比較大鼠骨密度值明顯減低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-2.201,P=0.042),說明模型組造模成功,見表1。

    12周后大鼠骨密度值由大到小為MO組>LO組>HO組>OVX組。與OVX組比較,MO組(P=0.002)、LO組(P=0.018)大鼠骨密度值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,HO組(P=0.073)大鼠骨密度值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。24周后大鼠骨密度值由大到小為MO組>HO組>LO組>OVX組。與OVX組比較,LO組(P=0.046)、MO組(P<0.001)、HO組(P=0.002)大鼠骨密度值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明去勢大鼠食用洋蔥粉有增加骨密度的效果,但是劑量越高不一定效果越好,MO組增加去勢大鼠骨密度效果最好,見表1。5組實(shí)驗(yàn)大鼠骨密度值組內(nèi)進(jìn)行比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.725,P=0.002),見表1。

    2.4 24周后實(shí)驗(yàn)SD大鼠各組血清中血鈣、血磷、E2的表達(dá)

    大鼠血清Ca的水平由大到小為CON組>HO組>MO組>OVX組>LO組,大鼠血清P的水平由大到小為LO組>MO組>HO組>OVX組>CON組,與LO組比較,MO、HO、CON、OVX組大鼠血清Ca、血清P水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);其它各組血鈣、血磷水平兩兩比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

    表2 洋蔥粉干預(yù)24周SD大鼠血清各項(xiàng)指標(biāo)組間比較Table 2 Comparison of serum indicators of SD rats of different groups after onions intervention

    大鼠血清E2水平由大到小為MO組>HO組>CON組>LO組>OVX組。與MO組比較,LO(P<0.001)、HO(P=0.001)、CON(P<0.001)、OVX(P<0.001)大鼠血清E2水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與OVX組比較,HO(P<0.001)、CON(P<0.001)大鼠血清E2水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但LO組大鼠血清E2水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.068);與CON組比較,LO組大鼠血清E2水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004),但HO組大鼠血清E2水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.344);與HO組比較,LO組大鼠血清E2水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),見表2。

    3 討論

    目前建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動物模型最為常用的是去勢法[8-10],切除雌性大鼠雙側(cè)卵巢后,導(dǎo)致雌激素水平降低,對成骨細(xì)胞的刺激減弱,使骨吸收活性大于骨形成能力,骨的快速丟失導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥,因此美國FDA規(guī)定在關(guān)于骨質(zhì)疏松的研究中首選去勢大鼠做動物模型。3月齡大鼠處于性成熟期,激素代謝水平也趨于穩(wěn)定,適合去卵巢骨質(zhì)疏松模型構(gòu)建。本實(shí)驗(yàn)采用3月齡大鼠切除雙側(cè)卵巢構(gòu)建骨質(zhì)疏松模型,切除大鼠卵巢12周后測量骨密度,OVX組大鼠左側(cè)股骨骨密度顯著低于CON組,提示骨量丟失,骨質(zhì)疏松模型造模成功。

    洋蔥不但是一種美味蔬菜,還能強(qiáng)健人體骨骼。研究認(rèn)為洋蔥是最能夠阻止骨質(zhì)流失的一種蔬菜,其具有藥用價(jià)值,預(yù)防骨質(zhì)疏松效果甚至比藥物還要好[11-12]。雖然現(xiàn)在還不清楚洋蔥對骨質(zhì)疏松的藥理機(jī)制,但是Huang等[13]認(rèn)為食用大量洋蔥能夠增加去卵巢動物的骨密度和骨骼強(qiáng)度,Matheson等[14]研究發(fā)現(xiàn)人食用洋蔥,能增加人的骨質(zhì)密度,防止骨質(zhì)疏松骨折發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。本實(shí)驗(yàn)以洋蔥粉為受試物、以去勢雌性大鼠為實(shí)驗(yàn)對象,研究表明,在喂飼12周后,MO、LO、HO組大鼠骨密度值比OVX組分別增加180.6%、135.3%、98.2%,MO、LO組與OVX組大鼠骨密度值比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,HO組與OVX組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;24周后,MO、LO、HO組大鼠骨密度值比OVX組分別增加157.2%、70.3%、107.0%,洋蔥干預(yù)三組與OVX組大鼠骨密度值比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明去勢大鼠食用洋蔥粉能增加骨密度,但是骨密度增加不與洋蔥粉的劑量呈正比。洋蔥干預(yù)組與模型組比較可抑制去勢大鼠骨量丟失,增加大鼠骨質(zhì)密度,其中MO組最明顯,說明洋蔥可以增加骨強(qiáng)度,減少骨量的丟失。推測可能是由于洋蔥中含有槲皮素和類黃酮成分,皮素能抑制骨吸收,類黃酮具有促進(jìn)骨形成的作用[15-16]。槲皮素對去卵巢大鼠骨量丟失具有保護(hù)作用[17],類黃酮成分具有雌激素樣作用[18],雌激素和具有弱雌激素作用的類黃酮補(bǔ)充體內(nèi)雌激素水平的變化,維持內(nèi)分泌系統(tǒng)的穩(wěn)定,保持了體內(nèi)無機(jī)元素,維持了骨礦物質(zhì)的代謝平衡。

    血鈣、磷是反映骨形成活性的重要指標(biāo)。血清總鈣的測定對骨礦代謝和鈣磷代謝的研究具有重要價(jià)值[19]。骨中的鈣、磷通過成骨和溶骨作用,不斷與胞外液進(jìn)行鈣磷交換,維持血鈣和血磷濃度的相對穩(wěn)定性。血鈣和血磷相互影響,血鈣升高,血磷則下降,反之亦然。本實(shí)驗(yàn)研究顯示,OVX組大鼠血鈣較對照組降低;與OVX組比較,MO、HO組大鼠血鈣水平分別升高約為8%、11%,HO組大鼠血鈣水平降低約為31.9%。說明一定劑量洋蔥濃度能避免去勢大鼠血鈣丟失的作用。磷可促進(jìn)骨基質(zhì)的合成和骨礦物質(zhì)的沉積,改變骨細(xì)胞對鈣的攝入,導(dǎo)致骨細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變。本實(shí)驗(yàn)MO組大鼠血磷水平略高于對照組;與模型組比較,LO、MO、HO組大鼠血磷水平分別升高約為74.4%、9.6%、0.9%。說明洋蔥干預(yù)能增加大鼠血磷的含量,但是MO、HO、OVX、CON組兩兩比較均無顯著差異。

    婦女絕經(jīng)期后,雌激素缺乏,骨轉(zhuǎn)換率升高,骨吸收與骨形成之間脫節(jié),破骨細(xì)胞吸收的骨量大于成骨細(xì)胞形成的骨量,導(dǎo)致凈骨量丟失[20]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),去卵巢大鼠洋蔥粉干預(yù)24周后,OVX組比CON組比較,大鼠體內(nèi)E2水平降低29.4%,有顯著差異性,發(fā)生骨質(zhì)疏松癥狀;與CON組比較,MO、HO組大鼠體內(nèi)E2水平升高約為25.2%、4.9%,LO組大鼠體內(nèi)E2降低約為18%;與OVX組比較,LO、MO、HO組大鼠體內(nèi)E2升高約為16.1%、77.3%、49.3%;洋蔥粉干預(yù)各組大鼠體內(nèi)E2水平兩兩比較有顯著差異性,MO組大鼠體內(nèi)E2水平最高,說明洋蔥粉干預(yù)能增加體內(nèi)E2水平,但是需要合適劑量洋蔥才能達(dá)到最高E2水平。這可能與洋蔥中含有黃酮類植物雌激素,能提高體內(nèi)雌激素水平有關(guān)[17]。

    本研究的局限性,沒能測量12周中血清Ca、P、E2的含量水平,設(shè)計(jì)中測量骨密度值間隔時(shí)間可能較大,以及影響骨質(zhì)疏松較大的血清指標(biāo)等有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

    綜上所述,洋蔥具有提高去卵巢大鼠BMD的作用,能夠提高血清鈣、磷的含量,同時(shí)提高雌二醇水平含量,在一定的程度上提高雌激素水平,達(dá)到防治骨質(zhì)疏松癥的目的。

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